2. Валидационная оценка методики анализа кислоты аскорбиновой в растворе йодатометрическим методом по показателю «Прецизионность»

Приготовили модельный раствор кислоты аскорбиновой №2.

Определение №1.

Провели 3 параллельных титрования, отмеривая каждый раз по 0,5 мл ЛП.

Определение №2.

Провели 3 параллельных титрования, отмеривая каждый раз по 1,0 мл ЛП.

Определение №3.

Провели 3 параллельных титрования, отмеривая каждый раз по 1,5 мл ЛП.

Расчет содержания кислоты аскорбиновой (г) провели по формуле приведенной при определении правильности.

Результаты занесли в таблицу №5 и рассчитали стандартное отклонение (SD) и относительное стандартное отклонение (RSD).

Таблица 5. Результаты определения прецизионности кислоты аскорбиновой методом йодатометрии.

Навеска для анализа,г	Объем титранта, мл	Найдено, г/мл			Метрологические характеристики
0,025	3,1	0,0509	0,0001	0,0000001	=0.051 SD=0.01 RSD=1.68
0,025	3,2	0,051	0	0
0,025	3,0	0,049	0,002	0,00004
0,05	6,0	0,0486	0,0024	0,000057
0,05	6,3	0,051	0	0
0,05	6,0	0,048	0,003	0,00009
0,075	9,1	0,049	0,002	0,00004
0,075	9.3	0,0504	0,0006	0,0000003
0,075	9.7	0,0511	0,0001	0,0000001

В результате проведенных исследований установлено, что RSD соответствует по показателю прецизионность.

3.Валидационная оценка методики анализа кислоты аскорбиновой йодиметрическим методом

МЕТОДИКА КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ

К 1,0 мл препарата прибавляют 5 мл воды и титруют 0,05 М раствором йода до слабо-желтого окрашивания, не исчезающего в течение 30 сек.

1. мл 0,05 М раствора йода соответствует 0,008824 г кислоты аскорбиновой.

1. Валидационная оценка методики анализа кислоты аскорбиновой в растворе иодиметрическим методом по показателю «Линейность».

Построение градуировочного графика

Точную навеску кислоты аскорбиновой (5 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде, доводят водой до метки и перемешивают (раствор А).

На титрование отмеривают последовательно 0,50 мл; 1,0 мл; 1,5 мл; 2,0 мл; 2,5 мл раствора А (0,075 г; 0,010 г; 0,125 г; 0,150 г; 0,175 г.) и проводят определение по методике описанной для количественного определения кислоты аскорбиновой.

Данные занесли в таблицу 6.

Таблица 6. Результаты титриметрического определения кислоты аскорбиновой йодиметрическим методом

Объем 5% раствора А (мл)	0,5	1,0	1,5	2,0	2,5
Содержание кислоты аскорбиновой г/ в навеске	0,025	0,05	0,075	0,1	0,125
Объем 0,05 М йода (мл)	2,5	5,1	8,9	11,0	13,1

Построили градуировочный график зависимости концентраций от объема титранта, рассчитали уравнение градуировочного графика и коэффициент корреляции.

Рисунок 2 - Градуировочный график зависимости объема титранта от концентрации кислоты аскорбиновой.

При математической обработке рассчитали величину коэффициента корреляции r. Коэффициент корреляции составил: r= 0,9966

Полученные результаты показали, что существует линейная зависимость между навеской кислоты аскорбиновой и объемом титранта – 0,05 М раствором йода.

2. Валидационная оценка методики анализа кислоты аскорбиновой в растворе йодиметрическим методом по показателю «Правильность».

Приготовили три модельных раствора кислоты аскорбиновой (табл. 7).

Таблица 7. Приготовление модельных растворов кислоты аскорбиновой

Модельная смесь	1	2	3
Навеска кислоты аскорбиновой (г)	4,0	5,0	6,0
Трилона Б (г)	0,02	0,025	0,03
Натрия гидрокарбоната (г)	1,908	2,385	2,862
Натрия сульфита безводного (г)	0,16	0,200	0,24
Воды для инъекций	До 100 мл	До 100 мл	До 100 мл

Раствор А₁ (модельная смесь 1) Точные навески кислоты аскорбиновой (4,0

г), трилона Б (0,02г), натрия гидрокарбоната (1,908г) и натрия сульфита (0,16 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде при нагревании на водяной бане и доводят водой до метки.

Раствор А₂ (модельная смесь 2) Точные навески кислоты аскорбиновой (5,0 г), трилона Б (0,025 г), натрия гидрокарбоната (2,385 г) и натрия сульфита (0,200 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде при нагревании на водяной бане и доводят водой до метки.

Раствор А₃ (модельная смесь 3) Точные навески кислоты аскорбиновой (6,0 г), трилона Б (0,03 г), натрия гидрокарбоната (2,862г) и натрия сульфита (0,24 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в воде при нагревании на водяной бане и доводят водой до метки.

Проводили 3 параллельных титрования на трех уровнях концентраций (9 определений).

К 1,0 мл каждой из модельных смесей (А_1, А_2, А₃) прибавляют 5 мл воды и титруют 0,05 М раствором йода до слабо-желтого окрашивания, не исчезающего в течение 30 сек.

1 мл 0,05 М раствора йода соответствует 0,008824 г кислоты аскорбиновой.

1 мл 0,0167 М раствора калия йодата соответствует 0,008824 г кислоты аскорбиновой.

Расчет содержания кислоты аскорбиновой (г/мл) проводят по формуле:

где: V– объем титранта, мл;

К– поправочный коэффициент;

Т– титр йода по определяемому веществу, г/мл;

а – навеска модельной смеси, взятая на анализ, мл.

Р- 1 мл

Результаты занесли в таблицу №8 и рассчитали открываемость, стандартное отклонение, относительное стандартное отклонение и коэффициент Стьюдента.

Таблица 8 – Результаты определения правильности методом йодиметрии

№ п/п	Уровень	Взято модельной смеси, (г или мл)	Взято лекарственного вещества, г	Объем титранта, мл	Найдено лекарственного вещества, г	Открываемость	Метрологические характеристики
1	1	1,0 мл	0,04	4,86	0,0395	98,75	=100,24 SD=1,94 RSD=1,20 t=0.6
2	1	1,0 мл	0,04	4,50	0,0398	99,7
3	1	1,0 мл	0,04	4,53	0,0408	100,25
4	2	1,0 мл	0,05	5,70	0,0503	100,6
5	2	1,0 мл	0,05	5,65	0,0500	102,1
6	2	1,0 мл	0,05	5,65	0,0500	103,9
7	3	1,0 мл	0,06	6,80	0,0602	100,33
8	3	1,0 мл	0,06	6,70	0,0592	97,07
9	3	1,0 мл	0,06	6,75	0,0597	99,5

Т.о.должно находиться в пределах от 98 до 102, следовательно, данная методика соответствует валидационной характеристике «правильность».

Поскольку t =0,6 << (95%, f) =2,31, что позволяет считать результаты выборки результатов свободными от систематической ошибки.

3. Валидационная оценка методики анализа кислоты аскорбиновой в растворе йодиметрическим методом по показателю «Прецизионность».

Приготовили модельный раствор кислоты аскорбиновой №2.

Определение №1.

Проводят 3 параллельных титрования, отмеривая каждый раз по 0,5 мл ЛП.

Определение №2.

Проводят 3 параллельных титрования, отмеривая каждый раз по 1,0 мл ЛП.

Определение №3.

Провели 3 параллельных титрования, отмеривая каждый раз по 1,5 мл ЛП.

Рассчитали содержание кислоты аскорбиновой (г/мл), стандартное отклонение (SD) и относительное стандартное отклонение (RSD).

Таблица 5. Результаты определения прецизионности кислоты аскорбиновой методом йодиметрии.

Навеска для анализа,г	Объем титранта, мл	Найдено, г/мл			Метрологические характеристики
0,025	3,1	0,0499	0,0001	0,0000001	=0.0496 SD=0.0007 RSD=1,41
0,025	3,2	0,0501	0	0
0,025	3,0	0,0493	0,002	0,00004
0,05	6,0	0,0486	0,0024	0,000057
0,05	6,3	0,0491	0	0
0,05	6,0	0,0508	0,003	0,00009
0,075	9,1	0,0496	0,002	0,00004
0,075	9.3	0,0501	0,0006	0,0000003
0,075	9.7	0,0491	0,0001	0,0000001

В результате проведенных исследований установлено, что RSD соответствует по показателю прецизионность.