4.2.3. Анализ уф-спектров кислоты аскорбиновой
Наличие сложных сопряженных систем в структурах водорастворимых вита-минов дает возможность широкого применения УФ-спектрофотометрии для их фармакопейного анализа. IP и USP регламентируют при установлении подлинности сравнение УФ-спектров испытуемой субстанции со спектрами стандартных образцов. ГФ, CP, EP (BP) и JP при установлении подлинности регламентируют сравнение УФ-спектров испытуемой субстанции со стандартными спектрами (рис. 7).
Рис.7. УФ-спектр кислоты аскорбиновой (15 мкг/мл) в растворе кислоты серной 0,005 М.
Количественное определение кислоты аскорбиновой.
5.1. Титриметрические методы
Титриметрические количественного определения кислоты аскорбиновой также базируются на ее химических свойствах:восстановительных и кислотных.
ГФ XIIрекомендует метод йодатометрии. В этом случае титрантом служит раствор калия йодата. Титрование ведут в присутствии иодида калия и хлороводородной кислоты (индикатор — крахмал) до стойкого синего окрашивании.
Избыточная капля титрованного раствора калия йодата реагирует с калия йодидом, выделяя йод, который указывает на конец титрования:
Метод йодометрии. Кислота аскорбиновая окисляется титрованным раствором йода в нейтральной, слабокислой или слабощелочной средах до кислоты дегидроаскорбиновой.
Метод йодохлорометрии. Титруют раствором йодмонохлорида до появления стойкого слабо-синего окрашивания (индикатор крахмал). Происходит окисление аскорбиновой кислоты пореакции:
Цериметрическое определение. Избыточная капля сульфата церия окисляет индикатор до бледно-голубого окрашивания
Раствор фенантролина представляет собой комплексное соединение закисного железа с о-фенантролином интенсивно-красного цвета. Сульфат церия окисляет железо до трехвалентного. В результате чего образуется комплексное соединение голубого цвета:
Титрование раствором 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия. В плодах шиповника содержание аскорбиновой кислоты определяют титро- ванием 0,001 н. раствором 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия в кислой среде до появления не исчезающей в течение 0,5—1 мин розовой окраски.
Кислотные свойства кислоты аскорбиновой выражены в достаточной степени, что позволяет количественно определять лекарственное вещество алкалиметрически. Кислота аскорбиновая титруется стандартным 0,1 М раствором натрия гидроксила, как одноосновная кислота по енольному гидроксилу в 3-ем положении:
Физико-химические методы
Для количественной оценки кислоты аскорбиновой в многокомпонентных образцах со сложной матрицей, следует применять только высокоспецифичные или сепарационные методы анализа. Метод КЭ является дополнением и в то же время, альтернативой ВЭЖХ, характеризуется высокой эффективностью, малым расходом недорогих реагентов и простотой эксплуатации, капилляры долговечны и легко регенерируются. Несомненно, как и любой инструментальный метод, метод КЭ предполагает материальные затраты на приобретение оборудования, однако такое оборудование является универсальным. Предложенная методика КЭ может быть использована для контроля качества лекарственного растительного сырья и лекарственных препаратов, содержащих кислоту аскорбиновую (плоды и сироп шиповника, витаминный сбор №2, листья бархатцев, растворов кислоты аскорбиновой для инъекций и препарата «Аскорутин»).
Для количественного определения кислоты аскорбиновой в инъекционных растворах можно используют более дешевый и доступный спектрофотометрический метод с ФМК.
В большинстве современных лабораторий используют следующие методы количественного определения кислоты аскорбиновой:
Оптические методы
Спектрофотометрический метод на основании свободной кислоты фосфорномолибденовой.
Высокоспецифичный спектрофотометрический ферментативный метод на основе аскорбатоксидазы
Хроматографические методы
Метод ВЭЖХ
Капиллярный зональный электрофорез
Мицеллярная электрофонетическая хроматография.
Фармакологическое действие, применение в медицине и хранение лекарственных препаратов глюкозы.