VII. Реакции нейтрализации

Этот тип иммунологических реакций основан на способности антител специфически подавлять (нейт­рализовать) биологическую активность возбудителя или его токсинов в различных тест-системах: в организме животных, в куриных эмбрионах, культурах клеток или каким-то иным способом. Например, для оценки эффективности иммунизации против дифтерии и столбняка определяют уровни антитоксинов в сыворотке крови привитых по их способности нейтрализовать биологическое действие определенной дозы токсина (реакция Шика). Одна­ко реакции нейтрализации применяют и с диагностическими целями. Особенно широкое применение они получили в вирусологической практике как для серологической диагностики вирусных заболеваний, так и для идентификации вирусов. С этой целью, используют реакции нейтрализации роста, вирусов в культуреклеток, подавления бляшкообразования, гемадсорбции, торможения гемагглютинации (РТТА) и др.

До тех пор. пока не была выяснена химическая природа антител, полагали, что каждая, реакция иммунной .сыворотки опосредуется особым видом антител, которые получили соответственно название агглютининов, преципитинов, опсонинов, антитоксинов и т. п. Хотя, эта названия сохранились, они имеют чисто феноменологическое значение, т. е. отражают конечный результат взаимодействия антитела с антигеном. В настоящее время уже ясно, что нет специальных антител - агглютининов, преципитинов и т. д., а есть 5 классов иммуноглобулинов. Специфичность антител, относящихся к любому классу иммуноглобулинов, определяется структурой его активного центра, причем антитела данной специфичности могут относиться к разным классам. Конечный исход взаимодействия антигена с антителами зависит от природы антигена (корпускулярный - агглютинация, растворимый - преципитация); от участия системы комплемента (бактериолиз, бактерицидное действие); макрофагов; от того, к какому классу иммуноглобулинов относится данное антитело; от свойств его Fc-фрагмента. Разные классы иммуногло­булинов в неодинаковой степени участвуют в различных иммунологических реакциях.

Например, в реакциях агглютинации наиболее активны, антитела, относящиеся к IgMиIgG, в реакции связывания комплемента участвуют главным, образом антителаIgG, а в реакции лизиса с участием лизоцима и комплемента — толькоIgA.

VIII. Иммуноблотинг- современный высокочувствительный метод идентификации белков, в том числе вирусных антигенов. Метод основан на комбинации гельэлектрофореза и реакции антиген-антитело. Высокая степень разрешения достигается за счет электрофоретического разделения белков, глико- и липопротеинов и максимальной специфичностью детектирующих иммунных сывороток или моноклональных антител. В оптимально отработанных условиях иммуноблотингом можно обнаруживать антиген в количествах менее 1 нг в испытуемом объеме. Технически иммуноблотинг выполняется в три приема:

1) подлежащие анализу белки подвергаются разделению в полиакриламидном геле в присутствии денатурирующих веществ.

2) разделенные белки переносятся с геля путем наложения (блотинга) на нитроцеллюлозный фильтр и фиксируются на нем; при переносе сохраняются количественные соотношения белков;

3) на фильтры наносятся детектирующие поли- или моноклональные антитела, содержащие радиоизотопную или ферментную метку; для обнаружения связавшихся антител применяют также антивидовую меченую сыворотку, иными словами, на заключительном этане блотинг аналогичен твердофазным иммунологическим тестам.

Иммуноблотинг достаточно широко используется в исследованиях строения вирусов гепатитов, в частности, для установления антигенного родства между отдельными штаммами.