IV. Реакция иммунофлуоресценции (риф)

Молекулы иммуноглобулинов способны необратимо связываться с некоторыми химичес­кими веществами без потери антительной специфичности и свойства связываться с антигеном. Для метки Атможно использовать красители, флуоресцирующие при облучении их коротковол­новым светом (флуорохромы), например, ультрафиолетовым. С помощью РИФ можно быстро обнаруживать даже ничтожные количества антиге­нов, в том числе бактериальных и вирусных, по эффекту флуоресценции комплекса антиген + антитело в люминесцентном микроскопе.

V. Реакции, протекающие с участием комплемента

Реакция бактериолиза. Используется для серологической диагностики холеры Феномен бакте­риолиза легко удается наблюдатьinvitro. Исследуемую сыворотку наносят в последовательном двукрат­ном разведении каплями на поверхность питательной среды, на которую предварительно засеваютизвестную культуру вибриона. Чашку с посевами инкубируют при 37 °С в течение 18-20 ч. Под влиянием имеющихся в сыворотке антител и комплемента холерные вибрионы разрушаются (лизируются). и в местах нанесения капель образуются стерильные пятна. Титром вибриоцидных антител считается максимальное разведе­ние сыворотки, при котором она еще вызывает отчетливый лизис бактерий.

Реакция гемаглютинациииммунного прилипания. В основе этой реакции лежит способ­ность комплекса антиген + антитело в присутствии комплемента адсорбироваться на эритроцитах, вызывая их склеивание. Применяется для серологической диагностики гепатита А. Характеризуется высокой чувствительностью и специфичностью.

Реакция связывания комплемента Уникальная способность комплемента специфически связываться с различимом во своей природе комплексами антиген + антитело нашла широкое применение в реакции связывания комплемента (РСК). Особое преимущество РСК состоит в том, что природа антигена, участвующего в ней (корпускулярный или растворимый), не имеет значения, так как комплемент связывается сFc-фрагментомлюбого антитела, относящегося кIgGиIgM, независимо от его антительной специ­фичности.Реакцию ставят в два этапа:

1. Исследуемую сыворотку, диагностикум и комплемент инкубируют при тепмературе 37 С в течение часа. Если в исследуемой сыворотке имеются антитела, произойдет образование комплекса антиген-антитело, который свяжет добавленный комплемент. Если в исследуемой сыворотке антител нет, образования комплекса антиген-антитело не произойдет и комплемент останется свободным. Ни каких видимых проявлений реакции на этой стадии нет, поэтому добавляют вторую, индикаторную систему (гемолитическая сыворотка и эритроциты барана).

2. Смесь всех компонентов вновь инкубируют 30- 60 мин. В результате, если комплемент связался на первой стадии т. е. в исследуемой сыворотке были антитела, лизиса эритроцитов не будет – РСК положительна, если же в сыворотке специфические антитела отсутствуют, не использованный комплемент связывается с комплексом эритроциты + антитела индикаторной системы и произойдет гемолиз. – РСК отрицательна.