Реакция пассивной гемагглютинации и ее варианты:

Классическая реакция агглютинациипредусматривает использование корпускулярных антигенов. Однако в ней могут участвовать и растворимые антигены. Чтобы это стало возможным, такие антигены адсорбируют на иммунологически инертных частицах. В качестве носителя можно использо­вать частицы латекса или бентонита, однако в настоящее время наиболее часто применяют эритроци­ты животных или человека. Эритроциты, адсорбировавшие на себе антиген, называются сенсибилизи­рованными данным антигеном, а иммунная реакция, в которой они участвуют, — реакцией непрямой, или пассивной гемагглютинации (РНГА, или РПГА), так как эритроциты участвуют в ней пассивно.

РНГА ставят в специальных пластинках с луночками, имеющими полусферическое дно. При использовании ее для серологической диагностики в этих луночках готовят двукратные разведе­ния в физиологическом растворе исследуемой сыворотки (неизвестные АТ), а затем добавляют к ней в качестве диагностикума взвесь сенсибилизированных эритроцитов. Учет результатов проводят через 2 ч инкубации при 37 °С. При положительной реакции агглютинировавшиеся эритроциты оседают на дно луночки и равномерно покрывают его в виде перевернутого зонтика. При отрицательной реакции эритроциты тоже оседают, жидкость становится прозрачной, осадок выглядит в виде маленького «диска» в центре луночки. Титром сыворотки в РНГА считается последнее ее разведение, которое еще дает ярко выраженную гемагглютинацию. Метод не позволяет дифференцировать IgGиIgM, для того чтобы отличить острую и пастинфекцию, поэтому реакция проводится дважды на7-ой и 14-ый день болезни. Положительным считается 4-х кратное нарастание титра антител.

РНГА может применяться также в качестве ускоренного метода бактериологической диагностики для обнаружения непосредственно в исследуемом материале неизвестных бактерий, вирусов, токси­нов, например возбудителей чумы, стафилококковых энтеротоксинов и др. При таком варианте поста­новки РНГА в роли известного компонента реакции используют эритроциты, адсорбировавшие извест­ные по своей специфичности антитела — антительный эритроцитарный диагностикум.

Вариантами использования РНГА являются: реакция нейтрализации антигена(РНАг),реакция нейтрализации антител(РНАт),реакция торможения пассивной гемагглютинации(РТПГА). Для этих реакций используют антигенные и антительные эритроцитарные диагностикумы. Можно использовать одновременно две взаимно контролирующие однонаправленные реакции, например РНГА с антиген­ным диагностикумом и РНАг с антительным эритроцитарным диагностнкумом.

Реакция нейтрализации антител(РНАт) заключается в том, что суспензию, содержащую искомый антиген, смешивают со специфической иммунной сывороткой, содержащей известные антитела, в соот­ветствующих объемах и инкубируют при 37 °С в течение двух часов. После этого добавляют антигенный эритроцитарный диагностикум. Смесь встряхивают и оставляют при комнатной температуре. Результаты учитывают через 3—4 ч и окончательно —через 18—24 ч. Если в исследуемом материале имеется антиген, он свяжет антитела (нейтрализует их), игемагглютинация не произойдет.

По такому же принципу ставят реакцию нейтрализации антигена(РНАг). Только в этом случае в исследуемом материале обнаруживают антитела.

Реакция коагглютинации.Является одним из вариантов пассивной, т. е. опосредованной клет­ками-носителями, реакции агглютинации на стекле. В основу этой реакции поло­жено уникальное свойство золотистого стафилококка, имеющего в составе своей клеточной стенки белок А, связываться сFc-фрагментамиIgGиIgM. При этом активные центры антител остаются свободными и могут взаимодействовать со специфическими детерминантами антигенов. На предмет­ное стекло наносят каплю 2%-ной взвеси стафилококков, сенсибилизированных соответствующими антителами, и добавляют каплю взвеси исследуемых бактерий. При соответствии антигена антителамчерез 30—60 спроисходит четкая агглютинация нагруженных антителами стафилококков.

Реакция латекс-агглютинации(РАЛ или ЛАГ). Носителем антител в этой диагностической системе являются мелкие стандартные частички латекса. Реакцию выполняют в лунках на стекле.Основным условием успешной постановки ЛАГ является строгое соблюдение количественных соотношений компонентов системы. ЛАГ используют для быстрого обнаружения микроорганизмов или их антигенов в исследуемом материале.