1.4.4 Под термином «дубильные вещества» понимают специфическое «дубящее» действие органических веществ, чаще всего полифенольной природы.

Для выделения дубильных веществ из растений используют экстракцию горячей водой; охлажденный водный экстракт обрабатывают петролейным эфиром, бензолом или смесью бензол-хлороформ (1:1) для удаления хлорофиллов, терпеноидов, липидов. Затем экстракт обрабатывают этиловым эфиром (фенольные соединения) и метиловым или этиловым спиртом (дубильные вещества).

Осаждение дубильных веществ из водных или водно-спиртовых растворов осуществляют солями свинца. Полученные осадки затем обрабатывают разбавленной серной кислотой.

Для разделения дубильных веществ на индивидуальные компоненты используют адсорбционно-распределительную хроматографию на колонках целлюлозы, силикагеля или полиамида, ионообменную хроматографию на колонках катионита (Дауэкс -50), гель-хроматографию на колонках сефадекса G-50 или G- 100 [200].

Для предварительной информации о природе дубильных веществ используют специфические качественные реакции:

реакция с 1% раствором ЖАК позволяет отличить гидролизуемые дубильные вещества (черно-синее окрашивание) от конденсированных (черное или черно-зеленое);

реакция с нитритом натрия и 0,1 н раствором кислоты хлороводородной на гидролизуемые дубильные вещества (коричневое окрашивание);

реакция с 1% ванилином в кислоте хлороводородной концентрированной на конденсированные дубильные вещества (красное окрашивание).

Для установления структуры дубильных веществ, идентификации индивидуальных соединений, контроля за ходом анализа широко применяют методы хроматографии.

Для хроматографирования на бумаге используют системы растворителей: н-бутанол-уксусная кислота-вода (6:1:8, 4:1:5, 40:12,5:29), 2,6 и 15% уксусная кислота, н-бутанол-уксусная кислота-вода (3:3:1), муравьиная кислота-соляная кислота-вода (5:3:2), н-бутанол-соляная кислота-вода (7:2:5).

Для ТСХ используют системы растворителей: ацетон-вода-пиридин (20:4:1), бензол-метанол-пиридин (16:2:1), бензол-этанол (1:1), бензол-ацетон (1:5, 1:4, 1:3).

Для ВЭЖХ хроматографии дубильных веществ гидролизуемого типа используют колонку Merck LiChrosorb RP₁₈, YMC SIL – 60 с подвижной фазой 0,01 М метафосфорная кислота-0,01 М дигидрофосфат калия-ацетонитрил (42,5:42,5:15), н-гексан-метиловый спирт-тетрагидрофуран-муравьиная кислота (60:45:15:1), УФ-детектор при 280 нм.

Для ВЭЖХ хроматографии конденсированных дубильных веществ используют неподвижные фазы лихросорб RP –8 (10 мкм) (колонка 250х4,6), сферисорб гексил (5 мкм) (колонка 120х4,6) и гиперсил SAS (5 мкм) (колонка 120х4,6) с использованием УФ-детектора (280 нм), при элюировании вода+0,1% перхлорная кислота и метиловый спирт [200].

Максимум поглощения дубильных веществ в УФ-спектрах находится при 280 нм.

В ИК-спектрах дубильных веществ в области 3400 см^-1 наблюдаются широкие полосы поглощения высокой интенсивности, которые относятся к частотам ассоциированных связей О-Н. 1735 см^-1 – колебания связей С=О в сложноэфирных группах, 1690 см^-1 указывает на присутствие групп С=О, которые находятся в сахаридных составляющих этих веществ. 1600 см^-1 – колебания связей С=С в ароматических и алифатических группах [212].