Методы гистологической окраски

Уважаемыеколлеги,

ООО «БиоВитрум» предлагает Вашему вниманию каталог основных методов гистологической окраски препаратов.

Общение с широким кругом специалистов, использующих в своей профессиональной деятельности различные методики, показывает, что назрела необходимость в издании современного справочника, включающего описание и демонстрирующего результаты применения как классических методов окраски гистолических и цитологических препаратов(окраски по Ван-Гизону, Маллори, Массону и др.), так и недавно разработанных, но снискавших заслуженную популярность методик (AgNOR и др.)

Мы надеемся, что данное издание будет полезно не только в практической работе лаборантов-гистологов (т.к. в каталоге пошагово представлены протоколы окрасок), но и для врачей-гистологов, а также для сотрудников медицинских и научно-исследовательских институтов, занимающихся гистотехникой.

При составлении каталога были использованы технические спецификации к готовым наборам красителей, предоставленные нашим итальянским партнером, компанией Bio-Optica Milano S.P.A.

Данное издание каталога является вторым переработанным с учётом уточнений и изменений.

Обращаем Ваше внимание, что все представленные в данном каталоге наименования красителей и сопутствующие товары Вы можете

заказать, обратившись в один из офисов ООО «БиоВитрум».

С надеждой на сотрудничество, Руководитель отдела по работе с клиентами

МихайловаВ.С.

04-045801

AgNOR

Срок годности: 1 год Хранить при температуре 15-25°С в темном месте

Реактивы

А. Желатина водный раствор, 12х8 мл В. Нитрат серебра концентрированный

раствор, 12х10 мл С. Фиксатор, 1х30 мл

Молочная железа: карцинома

Применение

Предназначен для выявления белков афинных к серебру в области ядрышкового организатора (NOR)

Описание метода

Поместить срезы в дистиллированную воду.

Приготовить рабочий раствор: смешать раствор из флакона А и раствор из флакона В, перемешать стеклянной палочкой, промытой в дистиллированной воде.

Поместить исследуемый препарат в раствор и инкубировать в темноте в течение 30 минут при комнатной температуре.

Осторожно промыть в 3 порциях дистиллированной воды.

Нанести на срез 10 капель реагента С, оставить на 1 минуту.

Промыть в дистиллированной воде.

Дегидратировать срезы в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и

заключить под покровное стекло.

Результаты

04-160802

Альциановый синий pH 2,5

Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С

Реактивы

А. Альциановый синий рН 2.5 по Мoури, 30 мл

В. Раствор натрия тетрабората, 30 мл C. Кармалаун Майера, 30 мл

Тонкая кишка

Применение

Используется для выявления кислых мукополисахаридов.

Альциановый синий по химической структуре относится к группе купрофталоцианинов; способен образовывать ионные связи с полианионами кислых мукополисахаридов. В данном методе происходит трансформация красителя в синий пигмент Монастраля под воздействием натрия тетрабората. Данный пигмент является нерастворимым, что облегчает дальнейшую работу с образцом без нежелательного распространения красителя по препарату. Селективность окрашивания обеспечивается избирательным взаимодействием Альцианового синего с карбоксильными и сульфорадикалами полианионов (не происходит взаимодействия красителя с фосфатными радикалами нуклеиновых кислот).

Характерно, что Альциановый синий рН 1 образует связи с мукополисахаридами с большим содержанием сульфо-групп, а Альциновый синий рН 2.5 выявляет большинство кислых мукополисахаридов.

Описание метода

Поместить срезы в дистиллированную воду.

Нанести на срез 10 капель реактива А, оставить на 30 мин.

Подсушить образцы (не промывать), нанести на срез 10 капель реактива В, оставить на 10 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 5 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло.

Результаты

04-161802

Альциановый синий pH 2,5-pH 1,0

Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С

Реактивы

А. Раствор Альцианового синего рН 2.5, 30 мл

В. Раствор натрия тетрабората, 30 мл C. Раствор Альцианового

синего рН 1,0, 30 мл

D. Дифференцирующий раствор, 30 мл

Применение

Используется с целью выявления и дифференциации кислых мукополиса-

Кишечник харидов в тканевых образцах. Для дифференциации высокосульфатированных

кислых мукополисахаридов от слабосульфатированных, от гиалуроновой кислоты и сиаломуцинов проводится окрашивание из серии соседних срезов. Первый срез обрабатывается раствором Альцианового синего рН 2,5, второй – раствором Альцианового синего рН 1,0. Сравнение двух срезов позволяет дифференцировать слабосульфатированных мукополисахариды, гиалуроновую кислоту и сиаломуцины на первой срезе и мукополисахариды с большим содержанием сульфидных групп – на втором. Характерно, что Альциановый синий рН 1

образует связи с мукополисахаридами с большим содержанием сульфо-групп, а Альциановый синий рН 2.5 способен к окрашиванию всех кислых мукополисахаридов.

Описание метода

Альциановый синий рН 2,5

Поместить срезы в дистиллированную воду.

Нанести на срез 10 капель реактива А, оставить на 30 мин.

Слить избыток реагента, нанести на срез 10 капель реактива В, оставить на 10 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло.

Альциановый синий рН 1,0

Поместить срезы в дистиллированную воду.

Нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 10 мин.

Подсушить образцы (не промывать), нанести на срез 15 капель реактива D, оставить на 10 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло.

Результаты

04-163802

Альциановый синий pH 2,5 ШИК реакция(PAS)

Срок годности: 1год Хранить при температуре: 4°С

Реактивы

А. Альциановый синий рН 2.5 по Моури, 30 мл

В. Раствор натрия тетрабората, 30 мл

C.Раствор йодной кислоты, 30 мл

D.Реактив Шиффа по Хочкиссу и Мак Манусу, 30 мл

E.Раствор метабисульфита калия,30мл

F.Раствор фиксатора, 30 мл

Применение

Интегрированный метод выявления кислых и нейтральных мукополисахаридов и углеводов в тканевых образцах.

В первой части процедуры окрашивания срезы обрабатываются Альциановым синим, что приводит к окрашиванию кислых мукополисахаридов с формированием нерастворимого синего пигмента Монастраля, стабильного при дальнейшей обработке во второй половине процесса. Затем проводится ШИК-реакция с окрашиванием нейтральных мукополисахаридов и гликогена (окрашивание гликогена произойдет только при отсутствии предварительной ферментной обработки препарата).

Описание метода

Поместить срезы в дистиллированную воду.

Нанести на срез 10 капель реактива А, оставить на 30 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде, нанести на срез 15 капель реактива B оставить на

10 мин.

Промыть срезы под проточной водой - 5 мин, затем - в дистиллированной воде в течение 2 мин.

Нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 10 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Нанести на срез 10 капель реактива D, оставить на 20 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Нанести на срез 10 капель реактива Е, оставить на 2 мин.

Слить избыток реагента, нанести на срез 10 капель реактива F, оставить на 3 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Нанести на срез 10 капель реактива G, оставить на 2 мин.

Подсинить образцы под проточной водой в течение 5 мин.

Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло.

Результаты

04-140808

Амилаза из Bacillus subtilis

Срок годности: 6 месяцев Хранить при температуре 4°С

Реактивы

Альфа-амилаза из Bacillus subtilis A

в буферном растворе рН 7,3, 1х30 мл

Применение

Применяется для удаления гликогена из тканевых срезов.

Печень, парафиновые срезы: удаление гликогена рекомендуется для обнаружения только эпителиальных нейтральных муцинов.

Мышцы, замороженные срезы тканей.

Описание метода

Поместить срезы в дистиллированную воду.

Нанести на срез раствор амилазы: инкубировать 10 минут при комнатной температуре

Промыть препарат дистиллированной водой несколько раз. Окрасить методом ШИК-реакции (реактивом Шиффа).

Результаты

После обработки амилазой ШИК-реакции нет.

04-121872

Ван-Гизон-Фуше

Срок годности реактива: 2 года Температура хранения: 15-25°С

Реактивы

А. Раствор трихлоруксусной кислоты, 30 мл

В. Раствор хлорида железа, 30 мл С. Пикрофуксин Ван-Гизона, 30 мл

Мышечная оболочка тонкой кишки

Применение

Для визуализации билирубина и коллагеновых волокон в тканевых образцах.

Описание метода

Поместить срез в дистиллированную воду.

На образец нанести 5 капель реактива А и 5 капель реактива В, оставить на 5 минут.

Промыть образцы в дистиллированной воде.

На образец нанести 10 капель реактива С, оставить на 7 минут.

Просушить образцы на воздухе в течение 5 минут (не промывать).

Дегидратировать образцы в абсолютном спирте, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло.

Результаты

04-030802

Ван-Гизон

Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С

Реактивы

А. Железный гематоксилин по Вейгерту, раствор В, 18 мл

В. Железный гематоксилин по Вейгерту, раствор А, 18 мл

C. Пикрофуксин по Ван-Гизону, 30 мл

Мышечная оболочка тонкой кишки

Применение

Рекомендуется для окраски соединительной ткани, особенно с целью выделения коллагеновых волокон. В состав препарата входят три различных красителя: железистый гематоксилин по Вейгерту для окрашивания ядер, пикриновая кислота для цитоплазмы, кислый фуксин для коллагена.

Описание метода

Поместить срезы в дистиллированную воду.

Нанести на срез 5 капель реактива А и 5 капель реактива В, оставить на 10 мин.

Промыть образцы в проточной воде в течение 10 мин.

Нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 10 мин.

Быстро промыть срезы (2-3 сек) в дистиллированной воде.

Быстро дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, оставив на 1 мин в последнем (абсолютный этанол), просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло.

Результаты

10