Методы гистологической окраски

04-181807

ПерльсВан-Гизон

Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С

Реактивы

А. Раствор калия ферроцианида, 12х10 мл В. Активирующийбуферныйраствор,50мл C. Пикрофуксин по Ван-Гизону, 30 мл

Печень

Применение

Используется с целью выявления ионов трехвалентного железа, коллагена и других компонентов соединительной ткани в тканях.

Метод основан на реакции калия ферроцианида с ионами трехвалентного железа в составе гемосидерина в кислой среде с формированием окрашенной соли – берлинской лазури.

4 Fe3+ + 3K4Fe(CN)6 = Fe4(Fe(CN)6)3 + 12 K+

берлинская лазурь

Подкрашивание пикрофуксином по Ван-Гизону позволяет дифференцировать коллаген от других компонентов соединительной ткани.

Внимание: Ложно положительные результаты возможны при следующих факторах:

Большой срок хранения рабочего раствора (раствор калия ферроцианида должен быть приготовлен непосредственно перед использованием);

Загрязнение стеклянной посуды и воды в водяной бане ионами трехвалентного железа; с целью предотвращения данного фактора избегать контакта реактивов с металлическими объектами;

Асбестоз: наличие асбестоза в патологически измененных тканях может вызвать осаждение солей трехвалентного железа.

Описание метода

Поместить срезы в дистиллированную воду.

Смешать содержимое бутылочки с реактивом А, 30 мл дистиллированной воды и 4 мл реактива В, погрузить срезы в полученный раствор на 20 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 10 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Быстро дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации с одноминутной задержкой в последнем – абсолютном этаноле, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло.

Результаты

41

04-210923

Сириус красный

Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С

Реактивы

А. Гематоксилин Майера, 30 мл В. Спиртовой реактив для

инкубационного контейнера, 2х80 мл C. Раствор щелочи 80% в этаноле, 30 мл D. Раствор сириуса красного F3B, 30 мл E. Щелочной буферный раствор, 30 мл

Применение

Выявление амилоида в фиксированных формалином и заключенных в парафин препаратах.

Описание метода

Поместить срезы в дистиллированную воду.

Нанести на срез 10 капель реактива А, оставить на 1 мин.

Подсинить в проточной воде в течение 5 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Приготовить инкубационный контейнер: на дно налить 1,5 мл реактива В, поместить в контейнер образцы и нанести на срез 10 капель реактива С и 10 капель реактива D. Инкубировать при 60°С на 60 мин.

Слить избыток реагента и нанести на срез 10 капель реактива Е, оставить на 20 сек.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Дегидрировать в абсолютном этаноле, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло.

Результаты

42

04-169812

Толуидиновый синий-Альциановый желтый для Helicobacter pylori

Срок годности: 1 год Хранить при температуре 15-25°С

Реактивы

А. Раствор йодной кислоты, 30 мл В. Раствор метабисульфита натрия, 30 мл

C.Раствор альцианового желтого, 30 мл

D.Раствор толуидинового синего, 30 мл

Желудок

Применение

Интегрированный метод выявления Нelicobacter pylori и кислых мукополисахаридов в образцах тканей желудка (толщина срезов 5 мкм).

Поверхностные желудочные эпителиальные мукополисахариды, обычно не реагирующие на альциановые красители, после окисления йодной кислотой способны к данному окрашиванию с образованием нерастворимого соединения. Во второй части процедуры окрашивания бактерии приобретают синюю окраску под воздействием толуидинового синего.

Описание метода

Поместить срезы в дистиллированную воду.

Нанести на срез 10 капель реактива А, оставить на 10 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Нанести на срез 10 капель реактива В, оставить на 5 мин.

Промыть срезы в проточной воде в течение 2 мин.

Нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 5 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Нанести на срез 10 капель реактива D, оставить на 3 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Просушить при помощи фильтровальной бумаги, затем просушить на воздухе. Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло.

Результаты

43

04-120802

Реакция Фельгена

Срок годности: 1 год Хранить при температуре 4°С

Реактивы

А. Раствор соляной кислоты 5N, 30 мл В. Реактив Шиффа, 30 мл

C. Раствор тиосульфата натрия, 30 мл D. Раствор фиксатора, 30 мл

Печень эмбриона крысы

Применение

Выявление ДНК в тканях. Метод состоит из двух частей:

- Кислотный гидролиз (5N HCl, комнатная температура, 40 мин), предназначенный для селективного разделения двух пуриновых оснований – аденина и гуанина – в молекуле ДНК; Реакция Фельгена высоко специфична для ДНК. РНК не способна к данной реакции.

Об успешном протекании реакции можно говорить на основе двух фактов:

-обработка срезов реактивом Шиффа после кислотного гидролиза привела к окрашиванию среза;

-обработка реактивом Шиффа контрольного образца, не прошедшего кислотный гидролиз, не привела к окрашиванию

Внимание: реактив А отличается коррозионной активностью – обращаться с осторожностью в хорошо вентилируемых помещениях, избегать контакта с кожей и глазами. Работать в перчатках и защитных очках.

Описание метода

Поместить срезы в дистиллированную воду.

Нанести на срез 10 капель реактива А, оставить на 40 мин.

Дважды промыть срезы в дистиллированной воде.

Нанести на срез 10 капель реактива В, оставить на 10 мин.

Слить избыток реагента и нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 2 мин.

Слить избыток реагента и нанести на срез 10 капель реактива D, оставить на 3 мин.

Промыть срезы под проточной водой в течение 5 мин.

Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло.

Результаты

44

04-060802

P. T. A. H. Фосфорновольфрамовый гематоксилин

Описание метода

Поместить срезы в дистиллированную воду.

Нанести на срез 5 капель реактива А, добавить 5 капель реактива В, оставить на 5 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 5 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Поместить срезы в реактив D, закрыть контейнер и инкубировать в течение ночи

Быстро промыть срезы в дистиллированной воде (3-4 сек).

Быстро дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации с одноминутной задержкой в последнем – абсолютном этаноле. Просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло.

Результаты

45

04-021002

Фуксин кислый / Оранжевый G

Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С

Реактивы

А. Железный гематоксилин Вейгерта, раствор А, 18 мл

В. Железный гематоксилин Вейгерта, раствор В, 18 мл

C. Раствор фосфорномолибденовой кислоты, 30 мл

D. Раствор фуксина кислого/оранжевого

G, 30 мл

Почка Применение

Рутинный метод для выявления белковых депозитов в почечных клубочках при взятии биопсии.

Селективность метода обусловлена различной степенью аффинности полихромного раствора фуксина кислого/оранжевого G к тканевым макромолекулам. Центральная роль в процессе окрашиванияотводитсямолекулефосфорномолибденовой кислоты, служащей связующим звеном между тканевыми структурами (волокна коллагена, мембраны клеток) и

Артерия анилиновым синим (амфотерный краситель). Оранжевый G, не проявляющий аффинности к фосфорномолибденовой кислоте, окрашивает

остальные тканевые структуры, не связанные с кислотой. Кислый фуксин визуализирует белковые депозиты.

Описание метода

Поместить срезы в дистиллированную воду.

Нанести на срез 5 капель реактива А, затем 5 капель реактива В, оставить на 10 мин.

Промыть срезы в проточной воде в течение 5 мин.

Нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 5 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Нанести на срез 10 капель реактива D, оставить на 5 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации с одноминутной задержкой в последнем – абсолютном этаноле, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло.

Результаты

46

04-110802

Циль-Нильсен (для срезов)

Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С

Реактивы

А. Раствор йодной кислоты, 30 мл В. Раствор карбол-фуксина, 30 мл

C.Дифференцирующий кислотный буфер, 30 мл

D.Гематоксилин Майера, 30 мл

Легкое

Применение

Выявление патогенных бактерий ( особенно палочек Коха) в гистологических срезах, мазках мокроты и культуральных мазках.

Отличительным свойством микобактерий является кислотоустойчивость. Будучи один раз окрашены карбол-фуксином, они сохраняют красный цвет даже под воздействием сильных обесцвечивающих агентов. Подобное свойство микобактерий может быть объяснено особым составом клеточной стенки, содержащей большое количество липидов.

Описание метода

Поместить срезы в дистиллированную воду.

Погрузить срезы в реактив А, оставить на 10 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Погрузить срезы в реактив В., оставить на 30 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде и просушить при помощи фильтровальной бумаги.

Нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 1 мин.

Промыть срезы в проточной воде в течение 3 мин.

Нанести на срез 10 капель реактива D, оставить на 2 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде и подсинить в проточной воде в течение 5 мин. Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло.

Результаты

47

04-111802

Циль-Нильсен

Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С

Реактивы

А. Раствор йодной кислоты, 30 мл В. Раствор карбол-фуксина, 30 мл C. Дифференцирующий кислотный

буфер, 30 мл

D. Раствор метиленового синего, 30 мл E. Активирующий основной буфер, 30 мл

Легкое

Применение

Используется с целью выявления патогенных микобактерий (особенно палочек Коха и палочек Ганзена) в гистологических срезах мазках мокроты культуральных мазках.

Отличительной особенностью микобактерий является кислотоустойчивость; будучи один раз окрашены карбол-фуксином, они сохраняют красную окраску даже после воздействия сильных обесцвечивающих реактивов. Подобное свойство микобактерий объясняется особым строением клеточной стенки, содержащей большое количество липидов.

Описание метода

Поместить мазки в дистиллированную воду.

Нанести на мазок 10 капель реактива А, оставить на 10 мин.

Промыть в дистиллированной воде.

Нанести на мазок 10 капель реактива В, оставить на 30 мин.

Промыть в дистиллированной воде и осушить образцы при помощи фильтровальной бумаги.

Нанести на мазок 10 капель реактива С, оставить на 1 мин.

Промыть в проточной воде в течение 3 мин.

Нанести на мазок 10 капель реактива D и 5 капель реактива Е, оставить на 30 сек.

Промыть в проточной воде.

Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло.

Результаты

48

Если хранение реактива А происходило при температуре ниже рекомендуемой и произошло образование геля, необходимо поместить бутылочку с реактивом в теплую воду – произойдет переход в исходное агрегатное состояние.

Описание метода

Поместить срезы в дистиллированную воду.

Нанести на срез 10 капель реактива А, оставить на 10 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Нанести на срез 10 капель реактива В, оставить на 20 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 2 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Слить избыток реагента и нанести на срез 10 капель реактива D, оставить на 2 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Нанести на срез 10 капель реактива Е, оставить на 3 мин.

Подсинить срезы в проточной воде в течение 5 мин.

Дегидрировать в этаноле, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло.

Результаты

49

04-131802

ШИК-реакция Пикро-индигокармин

Срок годности: 1 год Хранить при температуре 4°С

Реактивы

А. Раствор йодной кислоты, 30 мл В. Реактив Шиффа в модификации Хочкисса-Мак-Мануса, 30 мл

C. Раствор метабисульфита калия, 30 мл D. Раствор фиксатора, 30 мл

E. Раствор пикро-индигокармина, 30 мл

Желудок

Применение

Выявление компонентов соединительной ткани, содержащих в своем составе близкорасположенные гликолевые или аминогидроксильные группы.

Описание метода

Поместить срезы в дистиллированную воду.

Нанести на срез 10 капель реактива А, оставить на 10 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Нанести на срез 10 капель реактива В, оставить на 15 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 2 мин.

Слить избыток реагента и нанести на срез 10 капель реактива D, оставить на 3 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде, затем промыть в проточной в течение 5 мин.

Нанести на срез 10 капель реактива Е, оставить на 5 мин.

Быстро дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло.

Результаты

50