Методы гистологической окраски

04-021822

ПикроМаллори

Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С

Реактивы

А. ЖелезныйгематоксилинВейгерта, растворВ,18мл

В. ЖелезныйгематоксилинВейгерта, растворА,18мл

C.Спиртовойрастворпикриновойкислоты, 30мл

D.Полихромныйрастворпунцового фуксина, 30 мл

E.Растворфосфорномолибденовойкислоты,

FРастворанилиновогосинего,30мл

Применение

Трихромный краситель для соединительнотканных срезов. Селективность действия красителя объясняется различной степенью аффинности между ним и соединительнотканными макромолекулами. В частности, соединительная ткань заметно ацидофильна ввиду наличия большего числа основных групп и потому обладает высокой аффинностью к кислым красителям (пикриновая кислота и оранж G) и низкой по отношению к слабым основным и амфотерным красителям (кислый фуксин и ксилидин Понсо). Центральную роль в данном методе играет фосфомолибденовая кислота, являющаяся связующим звеном между тканевыми структурами, с которыми она связывается (волокна коллагена, клеточные мембраны), и анилиновым синим (основной краситель с частичными амфотерными свойствами).

Описание метода

Поместить срезы в дистиллированную воду.

Нанести на срез 5 капель реактива А и. 5 капель реактива В, оставить на 10 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Подсинить образцы в проточной воде в течение 10 мин.

Нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 2 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Нанести на срез 10 капель реактива D, оставить на 1 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Нанести на срез 10 капель реактива Е, оставить на 15 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Нанести на срез 10 капель реактива F, оставить на 1 мин.

Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло.

Результаты

31

04-010802

Набор для окраски по Массону с анилиновым синим

Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С

Реактивы

А. Железный гематоксилин Вейгерта, раствор В, 18 мл

В. Железный гематоксилин Вейгерта, раствор А, 18 мл

C. Спиртовой раствор пикриновой кислоты, 30 мл

D. Кислый фуксин Понсо, 30 мл

E. Раствор фосфомолибденовой кислоты, 30 мл

Миокард F. Анилиновый синий по Массону, 30 мл

Применение

Рекомендован для окрашивания соединительной ткани. Выявляет ядра, нейрофибриллы, нейроглию, коллаген, кератин, интрацеллюлярные волокна, гаметы.

Метод основан на использовании четырех различных красителей: железного гематоксилина Вейгарта для окраски ядер, пикриновой кислоты для эритроцитов, смеси кислых красителей для цитоплазмы и анилинового синего для соединительной ткани.

Описание метода

Поместить срезы в дистиллированную воду.

Нанести на срез 6 капель реактива А и добавить 6 капель реактива В, оставить на 10 мин.

Слить избыток реагента и нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 4 мин.

Быстро промыть срезы в дистиллированной воде (3-4 сек) и нанести на срез 10 капель реактива D, оставить на 4 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде и нанести на срез 10 капель реактива Е, оставить на 10 мин.

Слить избыток реагента и нанести на срез 10 капель реактива F, оставить на 5 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации с одноминутной задержкой в последнем – абсолютном этаноле, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло.

Результаты

32

04-011802

НабордляокраскипоМассону-Голднеру

Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С

Реактивы

Применение

Выявляет ядра, нейрофибриллы, нейроглию, коллаген, кератин, интрацеллюлярные волокна, гаметы. Подходит для черно-белых микрофотографий. Метод основан на использовании четырех различных красителей: железного гематоксилина Вейгарта для окраски ядрер, пикриновой кислоты для эритроцитов, смеси кислых красителей для цитоплазмы и светового зеленого – для коллагена.

Описание метода

Поместить срезы в дистиллированную воду.

Нанести на срез 6 капель реактива А и добавить 6 капель реактива В, оставить на 10 мин.

Слить избыток реагента, и нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 4 мин.

Быстро промыть срезы в дистиллированной воде (3-4 сек) и нанести на срез 10 капель реактива D, оставить на 4 мин.

Промытьсрезывдистиллированнойводеинанестинасрез10капельреактиваЕ,оставитьна10мин.

Слить избыток реагента и нанести на срез 10 капель реактива F, оставить на 5 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации с одноминутной задержкой в последнем – абсолютном этаноле, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло.

Результаты

33

04-041822

Набор для окраски по Массону-Фонтана

Срок годности: 1 год Хранить при температуре 4°С

Реактивы

А. Раствор аммиака, 30 мл В. Раствор перманганата калия, 18 мл

C. Активирующий кислотный буфер, 18 мл

D. Раствор щавелевой кислоты, 30 мл

E. Раствор тиосульфата натрия, 30 мл F. Кармалаун Майера, 30 мл

Применение

Рекомендован для выявления меланина в тканях.

В основе метода лежит аргентаффинная реакция – ряд тканевых компонентов обладает способностью восстанавливать серебро из аммиачного раствора до металлического серебра. С целью исключения ложно положительных результатов в набор включены реактивы для депигментации меланина (отбеливатель Маллори). Депигментация должна быть осуществлена на контрольном образце до начала им-

Эпидермис(базальный слой) прегнации серебром.

Внимание: фиксаторы, содержащие в своем составе соли тяжелых металлов (хлорид ртути, бихромат калия), которые могут провоцировать ложно положительные результаты; для промывки образцов использовать только дистиллированную воду; использовать особо чистую стеклянную посуду.

Описание метода

Поместить 2 среза одного препарата в дистиллированную воду.

Выбрать контрольный срез

Только для контрольного среза

Нанести на контрольный срез 10 капель реактива В и 10 капель реактива С, оставить на 20 мин, затем промыть дистиллированной водой.

Нанестинаконтрольныйсрез10капельреактиваD,оставитьна5мин,затемпромытьдистиллирован нойводой.

Приготовитьинкубационныйконтейнерипоместитьвнего2препарата(исследуемыйиконтрольный), нанестинакаждый10капельреактиваАизакрыть,инкубироватьночь.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Нанести на контрольный и на опытный срез 10 капель реактива F, оставить на 10 мин.

Промытьсрезывдистиллированнойводеинанестинасрез10капельреактиваЕ,оставитьна5мин.

Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло.

Результаты

34

04-121812

Метиловыйзеленый-пиронин

Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С

Реактивы

А. Спиртовой кислотный буфер, 30 мл В. Спиртовой раствор Альцианового

синего, 30 мл

C.Дифференцирующий спиртовой кислотный буфер, 30 мл

D.Буферный раствор Метилового зеленого пиронина, 30 мл

Кора мозжечка

Применение

Одновременная демонстрация ДНК и РНК в тканях. Рекомендован для выявления плазматических клеток и РНК в гистологических и цитологических препаратах.

В данном методе окрашивание достигается за счет смеси двух основных красителей: очищенного метилового зеленого и пиронина Y. С целью дифференциального окрашивания к раствору красителя добавляют буфер до достижения рН 4.8. При значениях рН меньше 4.8 в конечном образце превалирует красный цвет (пиронин); при более высоких значениях рН превалирует сине-зеленый цвет (метиловый зеленый). Селективность взаимодействия красителя с нуклеиновыми кислотами определяется значением рН раствора.

Внимание:

Не использовать фиксаторы с концентрацией формальдегида выше 10% в виду опасности блокирования аминных групп ДНК;

Не использовать фиксаторы с высоким содержанием кислот: возможна остановка реакции с последующим гидролизом;

Избегайте использования высоких температур при заливке в парафин, особенно в водяной бане: существует опасность увеличения расстояния между фосфатными группами ДНК и невозможности их взаимодействия с Метиловым зеленым (пиронинофилия ДНК).

Описание метода

Депарафинизировать срезы и поместить в этиловый спирт 70°.

Нанести на срез 10 капель реактива А, оставить на 10 мин.

Просушить образцы и нанести на срез 10 капель реактива В, оставить на 15 мин.

Просушить образцы и нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 3 мин.

Промыть срезы в проточной воде в течение 10 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Нанести на срез 10 капель реактива D, оставить на 7 мин.

Быстро промыть в дистиллированной воде, просушить срезы фильтровальной бумагой, затем просушить 10 мин на воздухе.

Дважды просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло.

Результаты

35

04-043822

P. A. S. M. Метенамин-серебро

Внимание: при всех реакциях с солями серебра необходимо использовать особо чистую стеклянную посуду и не допускать соприкосновения содержащих серебро реактивов с металлическими объектами (пинцетами и т.п.)

Описание метода

Поместить срезы в дистиллированную воду.

Нанести на срез 10 капель реактива А, оставить на 30 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Приготовить инкубационный контейнер и поместить туда срезы; в отдельной емкости смешать по 10 капель реактивов B, C, D; полученный раствор вылить на срезы, закрыть

контейнер и инкубировать при 60°С на 60 мин.

Извлечь контейнер из термостата и проверить интенсивность импрегнации.

При удовлетворительных результатах промыть срезы в дистиллированной воде (через 5 мин после открытия контейнера). При недостаточной импрегнации реинкубировать контейнер с проверками через каждые 5 мин.

Нанести на срез 10 капель реактива Е, оставить на 1 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Нанести на срез 10 капель реактива F, оставить на 1 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло.

Результаты

36

04-190812

Муцикармин

Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С

Реактивы

А. Гематоксилин Майера, 30 мл В. Муцикармин Майера, 30 мл

C. Раствор Метанилового желтого, 30 мл

Кишечник

Применение

Выявление мукополисахаридов эпителиального происхождения (муцинов) на гистологических срезах. Муцикармин обладает относительной специфичностью – муцины фибробластов окрашиваются в очень небольшой степени.

Гистохимическая основа метода неизвестна. Существует мнение, что краситель реагирует с глюцидной частью мукополисахаридов.

Описание метода

Поместить срезы в дистиллированную воду.

Нанести на срез 10 капель реактива А, оставить на 5 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Подсинить образцы в проточной воде в течение 5 мин.

Смешать 0,5 мл дистиллированной воды и 10 капель реагента В, полученную смесь нанести на образец, оставить на 30 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 1 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Быстро дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации с задержкой в последнем

– абсолютном этаноле, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло.

Результаты

37

04-055802

Орсеин

Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С

Реактивы

А. Раствор перманганата калия, 18 мл В. Активирующий кислотный

буфер, 18 мл

C. Раствор щавелевой кислоты, 30 мл D. Спиртовой реактив для влажной

камеры, 80 мл

E. Раствор орсеина , 30 мл

F. Дифференцирующий раствор, 30 мл

Эластические волокна

Применение

Выявление эластических волокон в тканях; рекомендован для изучения васкулярной патологии.

Описание метода

Поместить срезы в дистиллированную воду.

Нанести на срез 5 капель реактива А и 5 капель реактива В, оставить на 4 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 1 мин (до обесцвечивания образца).

Дважды промыть срезы в дистиллированной воде.

На дно влажной камеры налить 0,75 мл реактива D, поместить туда препараты и нанести на срез 10 капель реактива Е; инкубировать в течение 20 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Нанести на срез 10 капель реактива F, оставить на 2 мин.

Промыть срезы в проточной воде.

Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло.

Результаты

38

04-180807

ОкраскапоПерльсу

Срок годности: 2 года Хранить при температуре 15-25°С

Реактивы

А. Раствор ферроцианида калия, 12х10 мл В. Активирующий кислотный буфер, 50 мл C. Кармалаун Майера, 30 мл

Печень: депозиты

Применение

Используется для выявления трехвалентного железа в тканях. Метод основан на реакции ферроцианида калия с ионами железа в составе гемосидерина в кислой среде с формированием окрашенной соли - берлинской лазури

4 Fe3+ + 3K4Fe(CN)6 = Fe4(Fe(CN)6)3 + 12 K+

берлинская лазурь

Внимание: ложно позитивная реакция возможна в трех случаях Длительное хранение рабочего раствора (раствор ферроцианида и соляной кислоты должен

быть приготовлен непосредственно перед использованием).

Контаминация стеклянной посуды, а также воды флотационной ванны ионами железа; этого можно избежать, не допуская соприкосновения раствора с металлическими предметами. Асбестоз патологически измененных тканей.

Описание метода

Поместить срезы в дистиллированную воду.

Смешать 10 мл реактива А, 30 мл дистиллированной воды и 4 мл реактива В; поместить срезы в полученную смесь на 20 мин.

Тщательно промыть срезы в дистиллированной воде.

Нанести на срез 10 капель реактива С, оставить на 5 мин.

Промыть срезы в дистиллированной воде.

Дегидрировать в спиртах возрастающей концентрации, просветлить в ксилоле и заключить под покровное стекло.

Результаты

39

Набор для окраски по Папаниколау

Срок годности: 2 года

Мазок из цервикального канала

Применение

цитологическое исследования клеток цервикального канала, метод применим при изучении мокроты, вагинального секрета, выделений бронхов, пищевода, желудка,биопсии костного мозга.

Описание метода

Поместить мазки в этанол 95° на 2 мин.

Промыть мазки дистиллированной водой в течение 2 мин.

Обработать мазки гематоксилином Гарриса в течение 1 мин (реактив № 1).

Промыть мазки под проточной водой 5 мин.

Поместить мазки в этанол 95° на 15 сек.

Обработать OG 6 в течение 2 мин (реактив № 2).

Обработать этанолом 95° в течение 15 сек (дважды).

Обработать ЕА 50 в течение 5 мин (реактив № 3).

Поместить мазки в этанол 95° на 15 сек.

Обработать абсолютным этанолом в течение 30 сек (дважды).

Просветлить в ксилоле или Био Клире (заменитель ксилола) в течение 2 мин (дважды) и заключить под покровное стекло.

Результаты

40