Билет №3

1)

Лиазы — ферменты, катализирующие разрыв С–О, С–С, C–N и других связей, а

также обратимые реакции отщепления различных групп субстратов не гидролити-

ческим путем. Выделяют 7 подклассов. Эти реакции сопровождаются образованием

двойной связи или присоединением групп к месту двойной связи. Класс насчитывает

около 230 ферментов. Лиазы — сложные ферменты.

Класс: 4. Лиазы

Подкласс: 4.1. Углерод-углерод-лиазы

Подподкласс: 4.1.1.Карбоксилазы

Классификационный номер: КФ 4.1.1.22

2)

В И Т А М И Н В 1 2 ( К О Б А Л А М И Н , А Н Т И А Н Е М И Ч Е С К И Й)

Суточная потребность

2.5-5.0 мкг

Источники

• только животные продукты: печень (90-150 мкг%), рыба, почки, мясо

• синтезируется кишечной микрофлорой, однако не доказана возможность его

всасывания в нижних отделах ЖКТ.

Строение

Содержит 4 пиррольных кольца, ион кобальта (с валентностью от Co3+ до Co6+),

группу CN-

Строение коферментной формы

В организме при синтезе коферментных форм группа CN- заменяется на метил,

5-дезоксиаденозил, нитрит, ОН-группу.

Метаболизм

Для всасывания необходим внутренний фактор Кастла – гликопротеин, синтези-

руемый обкладочными клетками желудка.

В крови транспортируется в виде гидроксикобаламина специфическими транс-

портными белками (α- и β-глобулинами).

Биохимические функции

Перенос атома Н на атом С в обмен на какую-либо группу.

1. Участие в трансметилировании гомоцистеина при синтезе метионина. Данная

реакция обеспечивает удержание свободной фолиевой кислоты в клетке. При не-

хватке витамина В12 N5-метил-ТГФК накапливается, легко проникает через мембра-

ны и выходит из клетки. Возникает внутриклеточная недостаточность фолиевой ки-

слоты, хотя в крови ее может быть много.

2. Участвует в превращении пропионил-КоА в метил-малонил-КоА, а тот далее в сукцинил-КоА. Т.о. витамин обеспечивает полное окисление остатков жирных кислот с нечетным числом атомов в катаболических реакциях, утилизацию треонина, валина, изолейцина, метионина, боковой цепи холестерола.

Гиповитаминоз

1. Макроцитарная анемия, (количество эритроцитов снижено в 3-4 раза). Возникает

чаще у пожилых, но может быть и у детей Причиной является потеря фолиевой кислоты клетками при недостаточности витамина В12 и, как следствие, нарушение синтеза пуринов и dТМФ.

2. Неврологические нарушения:

• накопление нечетных жирных кислот вызывает жировую дистрофию нейронов и демиелинизацию нервных волокон, что проявляется в онемении кистей, стоп, ухудшении памяти;

• нехватка метионина опосредует снижение активности реакций метилирования и уменьшает синтез ацетилхолина.

3. Пернициозная анемия Аддисон-Бирмера – аутоиммунное заболевание, при котором образуются антитела против обкладочных клеток желудка либо против внут-

реннего фактора Кастла.

Причиной гиповитаминоза обычно бывает не отсутствие в пище,

а плохое всасывание из-за заболеваний желудка и кишечника (гаст-

риты и энтериты).

Лекарственные формы

Цианкобаламин

3)

Колориметрический метод определения активности а-амилазы в сыворотке крови и моче

а-Амилаза (диастаза, 1,4-а-0-глюкангидролаза, КФ 3.2.1.1) ка­тализирует гидролиз ос-1,4-глюкозидных связей крахмала и глико­гена до мальтозы и декстринов.

а-амилаза Крахмал + Н₂0> Мальтоза + Декстрины

У здорового человека в крови в небольшом количестве содер­жится амилаза двух изоферментных типов: панкреатический - Р-тип (около 30%) и слюнной -S-тип (около 70%), которые попадают в кровь в результате естественного старения и отмирания клетокслюнных желез и поджелудочной железы. Фермент иммеет отно­сительно низкую молекулярнуюЧассу (около 48000 Д), фильтруется в почечных клубочках и присутствует в моче. Соотношение изофер-ментов в моче иное, чем в крови: Р-тип - 70%,S-тип - до 30%.

Реактивы

1) Фосфатный буфер, рН 7,0, 2) крахмальный субстрат, 3) 9 ммоль/л раствор NaCI, 4) осаждающий раствор: 1,85 ммоль/лMgS0₄, сульфосалициловая кислота (2 ммоль/л).

Материалы исследования Сыворотка крови.

Принцип а-Амилаза катализирует гидролиз нерастворимого цветного крахмального субстрата с образованием синего, растворимого в воде красителя. Количество освобожденного красителя пропорци­онально каталитической активности фермента.

Расчет Активность фермента в сыворотке крови находят по приложен­ной калибровочной таблице, исходя из полученной оптической плот­ности.

При определении активности фермента в моче полученную по таблице каталитическую активность необходимо умножить на 2.

Если проба имеет высокую активность, ее разбавляют физио­логическим раствором, определение проводят снова, а результат умножают на разведение.

IНормальные величины

Сыворотка140-350 Е/л

Моча1000-2000 Е/л

Практическое значение Повышение активности фермента происходит главным обра­зом при заболеваниях поджелудочной железы. При остром панк­реатите активность в крови и моче возрастает в 10-30 раз. Возра­стание активности фермента выявляется при беременности, по­чечной недостаточности, кишечной непроходимости, заболевани­ях желчных путей, диабетическом кетоацидозе, некоторых опухо­лях легких и яичников, поражении слюнных желез.

Оформление работы Отмечают принцип метода, регистрируют результаты анализа и делают вывод о возможной патологии.