3 курс / Фармакология / Диссертация_Ефимова_А_О_Фармакологические_свойства_экстракта_Hirudo
.pdf
|
Подопживотнбылиразделенынагруппепо(10мышейвкаждой |
|
||
группе)Первой. опытнойгруппынаносилимазьэкстрактомп наявкиподошву |
|
|
||
заднлапыс ерастирайгкимежеднвтечиемд10внодоиндукцииейие |
|
|
||
остроговоспалительногоотекарегистрир( |
|
оваласьперваястадиятканевых |
||
изменений);подопытныммышамвторойгруппы |
|
|
– гельсэкстрактомпиявки. |
|
|
Оценкапротивовоспалительнойактивностипрепиявкиаратов |
|
||
медицинскойукрыснамодф« »тровойлигранулемы |
|
|
||
|
Эксперименвыполненнабелых80аутбредны |
|
хкрысахобоегопола |
|
массой190 |
-200г |
[Г.А.Шварц,Р.Д.Сюбаев |
|
., 2012].Предварительноуподопытных |
животныхудалиливолосянпокрначастикоспвжийплощадьюныменеех2 |
|
|
||
см2. Хроническоепролиферативнимплантациейвоспалениевызывалиподк жу |
|
|||
медиальчастиспипростерилизованныхыойкусочковфетрамассой40±2мг |
|
|
||
(рис.4) . |
|
|
|
|
|
Нанесениетравмыприсохраненииц лосткожныхпокрововости |
|
|
|
проводилисиспользовалегкогоэфирнаркоза. огоием |
|
После использования |
||
местнойанестезиираств( лид, о10%ркаина |
|
|
). Ежедневнонавыстриженныйучасток |
|
слегкимрастираннаносис иэкстрактлелипиявкидуемый,животным |
|
|
||
контгруппыольной |
– изоторастворническатрияхлорида.На8 й |
-есуткипосле |
||
операциикусочкифетраобразвокнихвавшейсягрануляционнойугтканью |
|
|
||
извлек,взвешнаторсливесахвысушивалионныхдопостоянноймассы |
|
|
||
течение48часовпри60°С. |
|
|
|
|
|
ПролиферативреакПР)(оценивалииюпоразмеждумассойуюице |
|
|
|
высушеннойгранулемыМ( |
СУХ)иисходнмассфетраМ(ой |
ИСХ)вмг(). |
||
|
Экссудатреакцивную |
юЭР()оценивалипоразницемеждумассамисырой |
||
(М СВ)ивысушеннойгранулемыМ( |
СУХ)вмг(). |
|
||
|
Противодействиевлияниеос(напролалительноеферативный |
|
||
экссудатикомпонентывоспаления) ныйыражалипроцепоотношениюктах |
|
|
||
контрольнойиинтактнойгрупп |
|
ам. |
|
|
51
Рисунок 4.Фет« »гранулемаоваякрысы
Оценкатерапевтическогодействияпригеморрагическихповреждениях
(экспериментальнаяподкожнаягематома)
|
Экспериментывыполненнабелыхаутбкрысах. едных |
|
|
|
Предварительноу |
подопытных животныхудалиливолосянпокровначастиспжийплощадьюны |
|
||||
менеех3см |
2.Геморагическиеповреждениямягкихтканейвызывалипутем |
|
|||
нанесения стандартноготупогоударафикси.Нанесениелырованнойтравмыпри |
|
|
|
|
|
сохранениицелосткожныхпокостировов |
|
водилисиспользованиемместной |
|||
анестезии (раствлид, о10%)ркаина |
.Наместенанесениятравмыформировался |
|
|||
«синяк»,площадькоторогоизмерялиежедневно.Подопживотнбылиые |
|
|
|
|
|
разделенынагрупп8 по(крыс10вкаждойгруппе)Крысам. опытнойгруппы |
|
|
|
|
|
ежедневнонакожнослегквтираниемнаносилигельэкстрактомп доявки |
|
|
|
|
|
полногоисчезновениягематомЛ.В[. |
|
Подорольская ссоавт. 2002 |
]. Подопытным |
||
живторойотнымгруппыежедннакожнослегктираниемв наносилигель |
|
|
|
|
|
гепарина (рис.5) .Животныеконтгруппыполучалиольнойизотоническийраствор натрияхлорида.
52
ОпределяливремязаживленияповрежденийТ)(рассчитывалипроцент изменений поформуле:
Рисунок 5.Геморрагическповрежденмягкихтканейукрыс. иея |
|
|
Оценкапротивовоспалительногодействпризаживлениираня |
|
|
Эксперимвыполненнаб ау80лыхтбкр.ысахендных |
|
|
Предварительподопытныху животудалиливолосянойпокров |
|
начастикожи |
спиныплощадьюменеех3см |
2. Нанесениетравмыприсохраненииц лостности |
|
кожныхпокровосиспользовадилилегкогоэфирнаркоза. огоием |
|
|
Послойкожрананосилиныпомощьюеетрафаретаплощадью |
|
225мм²с |
использованиемместнойане |
стезиираств( л д, о10%;апликационноркаина)при |
|
соблюдеправиласептикиниисептики |
(рис.6) |
.Заживлениекожраных |
происходилооткрытымспособом |
[Н.Ю.Фроловассоавт. 2009] |
.Накожу |
подопытживотныхежедаобразцыевно,силиодержащиеэкстрак |
|
тпиявки |
(рис.7) . |
|
|
Животныеконтгруппынаносилиольнойизоторастворическийатрия хлорида.Наблюдензаживленияпровдоолногоилиран.
53
Рисунок 6.Послойкожранукрысслева( |
– опыт;справа |
- |
контроль) |
|
|
Рисунок 7.Нанесениемазиэкс |
трактомпиявкинапослойкожраныее |
|
укрысслева( |
– опыт;справа |
- контроль) |
54
Оценкапротивовоспалительногодействияприэкспериментальных |
|
|
ожогах |
|
|
Всоответствиируковопопроведениюдоклиническихством |
|
|
исследованийкарственсредств,применялико ых |
тактный |
|
высокотемпературнспо.ОжогиобпиныАстепениIIIкр зывалий |
|
|
прикладываниемна10спредварительнодепилированнкоже,разогретдо ой |
|
|
200°Смеднойпластинысилой1,5НЮ[.Клебанова, 2005]. |
|
|
Обо состояниищемживотныхсудилинаоснован |
ииповеденческих |
|
ре,акцийппетита,массытела,выживаем.Наблюдениезапроцессомсти |
|
|
заживленияожоговыхранпроводиежедневно,авелиожоговыхчинудефектов |
|
|
измнесколькорнаялиазпротяжиссл. ениидования |
|
|
Экспериментывыполненнабелых80крысах. |
Предварительноу |
|
подопытныхживотныхудалиливолосянпокровначастиспжийплощадьюны |
|
|
менеех3см |
2.Ожнакнаносилигижупомощьюраскаленногометалического |
|
трафаретаплощадью |
225мм²сиспользовместнойанестезиир( ниемствор |
|
лидокаина, 10%) |
присоблюдеправасептикинлии.Заживлениесептики |
|
кожранпроисходилоыхоткрытымспос.На бомжудопытныхживотных |
|
|
ежеднанмазьевноосилиэкстрактапиявкипрепсра.ратывнения |
|
|
Животнымконтгруппынаносилиольнойизоторастворическийатри |
я |
|
хлорида.Наблюдензаживленияпровдоолниолижоговойповерхности. |
|
|
Втечпемнпослервыхинуттермическоговоздейстобласттравмыия |
|
|
наблюдаливыражгипкожие,ннуюграницыремиюобожженногоучасткабыли |
|
|
четкообознач, тмечаласьот кожинычностьпопериферии. |
|
|
Дефектыожиставалисьоткрытыминапротяжениивсегопе |
риода |
|
наблюдений.Отемпахзаживленияранепо уыхрежденийкрысизразныхгрупп |
|
|
судили,периодическиснимаявыкройкираннакальку,взвешоцениваяилхи |
|
|
перииз( мекутр)яютлвиплметромбораны.щадь |
|
|
На2 -есуткипослеперацииунелеченыхкрыс |
поверхностьдефектовкожи |
|
покрываласьтонкимструпом,образраневымованнымтделяемым.Привзятии |
|
|
живрукиотныхкорочкалегкоповреждалась,просачивалсяэкссудат.Былиярко |
|
|
55
выражепризнакивоспален: ыраотлянысильнойчаютсяотечностью,
наблюдалосьгнойвоспалениенаграницоеомертвевшейтканью,расплавление
некротимасс.Влегруппахчепрныхсквоспаизнакибысглажены,ения особенноеслииспытувеществообладвыраженныммоеанетиэкссудативным действием.
|
Оценкапротивосвертывающегодейст |
вия |
|
|
|
Экспериментывыполненна40кроликахпородышинши,обоегополала |
|
|
|
массой2,5 |
-3кг.Доначалаэксперименуподопыживотныхизкрныхаевой |
|
|
|
ухазабикровьдлярегалипараметрстрациитромбоэластограммыв |
|
(ТЭГ) .В |
||
течед10подопытнымейиеживо |
|
тнаносилиыхлегквтираниемэкстракт |
|
|
пиявнаучакожисудаленнымтокволосянымпокрпл вомщадью |
|
2х2см 2. |
||
Чердней10жедневногоз накожногопримпрепаратовэкстрактанениявки |
|
|
||
повторнорегистпараметрыировали |
тромбоэластограммыВ.[А.Макаров |
ссоавт., |
||
2012].Обэффективнисследованныхвеществсудилипостиизменениювремени |
|
|
||
свертыванияминутах. |
|
|
|
|
|
Остраятоксичностьгелямазинаосновеэкстрактамедицинской |
|
|
|
пиявки |
|
|
|
|
|
ВопытахпоопределениюостройтоксичностиМетодические( указанияпо |
|
|
|
изучению общетоксическогодействияфармакологическихвеществ, 2012)мазь |
|
|||
гельнанвыстриженныйосилиаучастоккожиразмеромсм2 |
2 наспинебелых |
|||
мышей-самцовпутемираниядополноговсасываниязанескразддозылько |
|
|
||
4000мг/кг.Большдозудостичьнеудалосю |
|
ьвследствиезначительного |
||
затрудненияпоглощениягелявозникающихприэтомпотерь.Оценивали |
|
|
||
выживатотныхечениемость14сутокпосленанесения. |
|
|
||
|
Длярасчетавеличинытоксикологическогопоказателя |
LD50 |
использовали |
|
методЛичфилда |
-Вилкоксонавсоотребованиямиветстинструкциямиии |
|
||
Федеральнслужбыпонадзорувсфездйеависоциальногоохраненразвития
[МироновА.Н., 2012].
56
Подоструютоксичностьместнораздрожающеедействгеляимази |
|
|
||
наоснов еэкстрактамедицинскойпиявки |
выполняли,используя |
многотестовое |
||
наблюдениепоС.Ирвину[Irwin S., 1964]. |
Исследовасубхронической |
|||
токсичностигелевоймаз карственныхвойформэкстрактаедицинской |
|
|
||
пиявкипроводилинакрысахмассой190±5,4г.Впод |
остропнакрысахтах |
|
||
животнымнаносилипрепаратынакожвтече30днвоиерапевтической, 5 |
|
- и |
||
10-краотерапевтинойдозыдлячеловесу межвидовогоетомскпересчетаой |
|
|
||
доз(1:7длякрыс) |
|
– 80,и800мг4геля,мази0/кг.Испытаннаямаксимальна |
|
ядоза |
в70разпревышаюттерапевдозудлячеловебезичесучмежвидовоготкаую |
|
|
||
пересчетадоз. |
|
|
|
|
Длярасчетатестируемдозыруковследующимодствовалисьй: |
|
|
||
терапевтическаядозагелямазидлякрысучетоммежвидовогопересчетадоз |
|
|
||
[Freireich E.J. et al., 1966] составляет(250мг:9≈20мг)*7/крымассой223у |
|
-286г |
||
(среднийвес250г)илимг80геля/кг,где250мг |
|
- общмассан янесенного |
||
геля/человека, 90 |
|
- Соотношениемеждуплощадьюповерхностителакрысы |
|
|
человека, 7 |
– межвидовойпересчетдоз. |
|
|
|
Оценивследующиепараметрылись: |
|
|
||
1. Интегрпок:общееасостояниезателильные,характшерстного |
|
|
||
покрова,состояниеслизистыхоб (лочеккр,наличиехарактервыделений, |
|
|
||
отечн),оформленностьицветфекалий. |
|
|
||
2. Изменениеэмоциональногосостояния( |
вок,агрессиялзации |
|
||
пуглив),нарушениясстороныстьЦНСсиндром( Штраубепарезы,тремо, , р |
|
|
||
судороги),реф(луховой,ексыроговичный,ипсилатеральныйсгибательный). |
|
|
||
3. Двигательную,мышечнуюкоординациюреактивность |
:двигательная |
|||
мышечнаяудержани( |
енапровол,сетке)координации,поведенческаяке реакция |
|
|
|
(реактив),налсинчиего«остьдр»омабатости. |
|
|
||
4. Функциональноесостояниевегетативнойнервнойсистемы:тест |
|
|
||
«открытоеполе»,частотадыхания,цветкожи,ректальнаятемпература,наличие |
|
|
||
илиотсутствие |
экзофтальма,птоза. |
|
|
|
57
Реактивностьмышейоценивпохарреакцииласьктерунаизменение |
|
||
окружающейобстановкивидеперемещениянаоткрытыйстол. |
|
Настороженность |
|
определяли ориентировочнымирефлексамиприиспользованиистандартного |
|
||
звуковогораздражителя( |
громкийхлопок). |
Пуглживотоцевостьприниваласьых |
|
прикосрнцангом. овении |
Трем,судо,харпоактер,гиизмененияходки |
||
положениятелаконечностейоценивалисьпризу блюдениильном. |
|
||
Доначалаипослекончаниявведпрепараж вязвешотныхов |
ивали |
||
помещаливобменныеклеткинасуткиприсвободномдоступекводедля |
|
|
|
определесуточногодиурезарНмочиия[ |
|
|
ШумскаяН.И.Карамзина, Н.., 1966]. |
Сосердечнотояние |
|
-сосудистсистоцепомощьюмынивалий |
|
электрввтокардиографиитведенииромдо |
|
началаэкспеиприегомента |
|
завершефункциональное.Влияна нисостояниенервнойсистоц мынивали |
|
||
показателямспонтаннойдвигаак ельнойивности[ |
|
БуркацкаяЕ.М.исоавт., |
|
1980]Местно. |
-раздражающеедействоценпримакроскопическомвали |
||
микроскопическомсследованииместнанесенобразцов,содержавшихэкстрактя пиявкимед. цинской
Одейиствииследуемыхпрепаратовнасостояниеживотныхсудилипо измрегистринениюпоказателейравнениюуемыхсконтрольными
значениями,такжепроводилисравне ниерезультатовопытныхгруппмежду собой.
58
Статистическийанализ данныхпроводилисиспользованиемпрограмм
Microsoft Excel 2016 (Microsoft corp., USA), Statistica 13.2 (Dell inc., USA), IBM SPSS Statistics v25 (IBM corp., USA)Прове. нормальностиаспределенияку
количествперемпровсенныхпомощьюкритердилиШапироев |
-Уилка |
|
Колмогорова-СмирноваспоправкойЛилиефорса. |
|
|
Сравнениеколичестперемдвнухенныхзависимыхгруппах |
|
|
провспомощьюкритериядилиМанна |
|
-Уитни.Длятрехгрупппользовались |
критериемКраскела |
-Уоллиапостериорныс сравнения. ми |
Параметры |
нормальныхраспределенийпризнаковвыборкахописывалиформатеМ± |
m |
|
(средниезначенияднеквадратотклонен). ическое |
|
|
59
ГЛАВАИзуч3специ. нфармфическойактивностиологической субстанции,гелямазигирулюкс
|
3Оценкапротивовосп.1 активностиэкстракта,мазгелятельной |
|
|
||||
наосновеэкстрактапиявкимедицпрформалиновомнскойотеке |
|
|
|
|
|||
|
Результатыисследования |
показали,что |
присубплантарномвведении0,1мл |
||||
2%раствораформуподопытныхлинамышейразвыривотекалапыетсяженный, |
|
|
|
|
|||
очемсвидетельствудостоверноеувеличееобъ.От,ниемчтоаечено4рез |
|
|
|
|
|||
часапослевведенияформобъемлауподопытныхлинаж |
|
|
|
ивотконтрольнойых |
|||
грувеличилсяппына65,3± 1,5%. |
|
|
|
|
|||
|
Анализрезультатовэксперимисслпоказе,нтальногопридовния |
|
|
||||
накожномпримененииэкстрактапиявкиразличныхлекарственныхформах |
|
|
|
|
|||
отмечаетсяуменьшениевыраженносмалииндуцифо овантеканогом |
|
|
|
апы |
|||
умышейтабл(.4)Такбыловыявлено. ,чтопвлияниемдф рмобъемалинапы |
|
|
|
|
|||
подопытныхжив, лучавшихобразецсубстанциигирулюкс,увелна чился |
|
|
|
|
|||
45,3±0,5%,чтобылов раза1,4<0,05)( меньшечемвконтролемыши(с |
|
|
|
|
|||
«формалиновым»отеклапы, |
учавшиенаружноизотоническийраствор |
|
|||||
натрияхлорида). |
|
|
|
|
|
|
|
Таблица4 |
– Влиянмедэкстрактапиявки,мазицинскойгеляЭМП,гепарина |
|
|
||||
диклофенакавыраженностьформалинового« »отекалапыу шей |
|
|
|
|
|||
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Толапкищинаподопытных |
Увеличениетолщины |
||
|
|
|
|
мышей,мм( |
M ± m) |
лапки |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
№п / |
|
Опыт |
|
Довведения |
|
Черезчаса4 |
|
|
|
|
послевведения |
мм |
|||
|
|
|
|
раствора |
|
||
|
|
|
|
|
раствора |
(M ± m) |
|
|
|
|
|
формалина |
|
||
|
|
|
|
|
формалина |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
1 |
Контроль |
|
2,15±0,06 |
|
3,70±0,06 |
1,55±0,03 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
2 |
Субстанция |
|
2,41±0,03 |
|
3,67±0,13 |
1,26±0,11 |
|
|
гирулюксэкстракт( |
|
|
||||
|
пиявки |
|
|
|
|
|
|
60