3 курс / Фармакология / Диссертация_Ефимова_А_О_Фармакологические_свойства_экстракта_Hirudo

наживотных.

3Мяг. лекиеар

ственныеформыЭМПгирулюкс(«,мазьдлянаружного

примен»гиру« , елдлянияюксьаружнприменения»)оотсутствиегоказали

выраженныхтоксическихэффектов(

ост,хроническая

токсичность и

местнораздражающее действие)

принакожныхаппликацияхуживотн

ых.

Апработыоация

Основныематериалыдиссертпредставленынаучциико грессеом

«ПервыйВсемирныйконгги удотерапииесс»Москва(, г2013.),Человек«

лекарство»Москва(, 2014,гг.);Международной2015,научно2016

-практической

конференМеди« цинаи

XXI века:лечениедостиженияц»Красноярскли( ,

2014г.);расширензаседаотделафармакологиинияхыхАОВНЦ«БАВ» (2015);

IIМеждународнойнаучно

-праконференциитическойПерспективы« развития

соврмедициныменн»г.Вор( , ог.й)неж2015.

Фармакология,клиничесфар (едициаянауколог):пуни3скиектя

–

«Исслмедованиеханизмовдействияфармакологическихвеществэкспериментах

наживотных,наизолироворгантканяхныхжеультурахклеток»,

пункт5

– «Экспериментальноедоклиническое( )изучениебезопасности

фармакологическихвеществ

–

токсиссковключающие, огическиеедования

изученпотенциальныхтоксичностилекар

ственныхпрепаратовиихготовых

лекарственнформусловияхострыоническихэкспериментовна

животных».

Структураиобъемдиссертации

Диссертациоработаизложена12 ная

3 страницахмашинописноготекста

исостоитизвведения,обзоралитерглава( 1),материалтурыметодглава( ов

2),результатисследглавы( ов3 аний

-4),обсуждениярезуг(льтав5),атов

выводов,практическихрекоменд,списклитературы.Втекстецийсод

ржится26

таблиц, рисунков8.Спл соктературывключает2

13источника, 104

-

отечественныхи109

– зарубежных.

1Ингиби.1 скороссвертыкрованиеания

Впервгирувыединел

ил

изэкстракта

медицинских

пиявок Д.Б.

Хайкрафтом (1884г.

).До

появления гепарина, замедляющего свертыкровиание

,

использовался экстрактизголовнойчастипиявок.В40

-хгодахА.В.

Кирсанов

М.Н.Быстрицкаяполучпрепаратг рудинали

-сырца.Очищенныйгирудинбыл

впервыевыделенФ.

Марквардтомнаосноверазработанногоимметода

фракционированэкстрактаизголовнойобластмедицинскойпия. вки

Эксперименты inиvitroinпоказаvivo

ли,чтогирудин,

представляясобой

специфический ингибиторферментатромбина,

формирует

стромбином

неактивный стабильный нековалентныйстехиокомплексетрический

константойдиссоциации·106,3

-13М.

Высокаяпецгифичностьрудинапо

отношениюктромбину

преимущественно выделяет его среди другприродных

ингибиторовэтогофермента:антитромбинаШ,гепаринаa2

-макроглобулина.

В

сравнении ссинтетическ ими

ингибиторами

тромбина,гирудин

явялется

ингибитором данного ферментаИ[.П.Басско.,ав1989]та .

Ингибированиеактивноститромбина

проявляется в частичном илиполном

торможении

свертыванияфибриногена

— иэтодалеко

неединственная

способность гирудина.Вегоприсутствииз медляется

функция активации

тромбиномфактосвертыванияV,овХIIIГирудинVIII,.

может препятствовать

агрегациитромбоцитов,ингибируясвязы анинае

эритроцитами. Гирудин

активирует

дисскомплексациациютромбина

и

специфических белков-

рецепторов натромбоцитах,

поскольку тромбин обладает большим сродством к

гирудину,чем

к высокоаффинным рецепторам тромбоцитов [AВихерт.M,.Н..

Родионова, 1983;И.П.Баскова,Г.С.Исаханян, 2004].

Такжеотм чается

удлинентромбинового, е

отчасти тромбопластинового

протромбиновоговремениплазмыкрови.

Данные показателисисв ртываниямы

крови восстанавлидооптимальногоуровняаются

померевыведенгирудиз ияна

организма.

Содержание

фибриногена, количествотромбоцитов,

атакже

фибриноактивностьплитическаяазмы

остаютсянеизменными

. Влияние гирудина

накровяноедавление,часетотурд

ечныхсокращений

идыхани

янеотмечалось .

Впрокицеслсения

дисульфидныхсвязей

происходит потеря

антитромбиновойспособности

гирудина.Химическ

ая модификация свободных

карбоксильныхгруппгирудин

азначительно уменьшает егосродствоктромбину.

Этосвидете льствуетотом,чтоприкомплекгирудинстрообрмбиномазовании

реализуютсяионныевзаимеждумолекуламиодействия

(рис.1) .

Впроцессевыделения

гирудинаизцельныхмедицинскихпиявокему

сопутствуетнеакомпонентитуловищвныйзпиявок,названный

псевдогирудином,но отличается отгирудина,

тем,что

содержит наN -концевалин.

Вг ирудине присутствует

болеевысок

ое содержаниеаспарагиновой

глутаминовойкислот,лизина,изолейцинатирозина.

Цистеинавпсевдогирудине

в разы ниже (примерновраза3)

,чемвгирудине.

Заболеваниявеннижко представляютихечностейнаиболее

«традиционную»областьприменениягирудо.Несмотряна,чтоерапиилечение

пиявкаминевходитстандтер,вомногихартыпииисточникахописывается

положительныйэффектданногомеупациентоводас

венознойпатологией,

Рисунок 2.Комплексгирудин

-тромбин

Засчетсвоегоприцельногодействиягирудинощутимовлия

ет на

свертываемостькровинавсех

ступенях реакции коа,гдеуляции

рольведущего

коагулянтаиграет

тромбин.

Также гирудинблокирует

несколько другихреакций,

вт ом числе

тормозитобразованиесобственноромбинатромбокиназы,

уменьшаетскопростьцесса

агрегациитромб.Вкрчеловекацвитов

содержится ингибитортромбина

– антитромбин III.Вотличиенего,гирудин

избиратеподавляеттолькоспосьнотромбкбностьактфибрнав. циногенаи

Крт,огомебнаружементаспособфе настворятььужеформировавшиеся

тромбы,.е.тромболитическа

яактивность.

Исследования подтвердили,чтогирудин

ведетсебякантикоагулянт

быстрогодейстпривведенорганизмия.Г рудин

сохраняется ворганизмев

неизменномвиде

, и вывповдитсячками

сохранном видеНиконов[ Г.И.соавт.,

1989;И.П.Баскова

исоавт., 1995].

Всвязисосложнизгогирудинастьютовлениябольшихколичествах

непосредственноизжелезмедицинскихпиявок,былиразрабметотаныды

пурифэтогобелкаиспользованиемкациирекомбинабиотехнологий.Этотных

привелокразрядафаработке

макологическихпродуктовнаоснове

рекомбинантгирудинаКирса[ А.В.Черкесов, ноВ.М.,гоБаскова1938;И.П.,

2004].

Понекоторымаспектам,гирудинобладаетпреимуществомпереднаиболее

частоиспользуемымивклиническойпрактикефибринолитиками

антикоагулянтами,посколькуневлнаактивностьяетдругихбелковплазмы.По

результатамэкспериработентальных

,гируподобныеемуин

вещества

представляюсобой

перспективные антикоагулянты и могут рассматриваться как

ферментныхсвойст

подтверждается увеличениемколичестванаучных

публикаций

по экспериментальному изучениюего

свойствиэффективности

празличных

тромбосос,тическихояниях

втомчисле

тромбкор,мозговыхназыидр. ных

артерий[ Tosi, M.F., 2005; Baskova I.P., 2008; Trontelj, P., 2012].

Профилактика тромбососсптическихомощьюянпрйменения

ЭМП

обусловлена свойствамисекрета:

способность ингибадгезиюагрегациюровать

тромб,блотромбкирцинговкалликреатьнбироватьплазмыкров н

[НазарянА.., 2001;БасковаИ.П.Исаханян, Г.С., 2004].

Дляоценкипротивотсвойствромбепаратов,дейскотичвиорыхеских

направленоингибиро

ваниетромбоцитарно

-сосудистогогемостаза,широко

используеэкспериментальнмодельромбообрсяварте иолахзования

брыжейкикрысыподдействимеханизмахлазера.В регуляцииговедущаяроль

1Тромболитический.3 эффект

ТромболитичеэффектЭМПобусловлпринемкийутствиемф нр

мента

дестабилазы.Дестабилаза

– высокоспецифичныйфермент

- e-(g-Glu)-Lys-

изоп.Еедействиептиднапнаразавленозрушениеe

-(g-Glu)-Lys-изопептидных

связей [I.P. Baskova et al., 2018].

e-(g-Glu)-Lys-изопептсвязпредставляютисобойдныепоперечныесши

вки,

необратимосвязывающиебелкидругдруг,чтообеспечиваетмвыполнение

этимибелкамифизиологическихфункций.Вчастн,такиеп перечныестисшивки

(кросс -линкинги)образуютсявстабилфибринезированном

– белке,являющимся

структурнойосновойкровяно

готромба[

I.P. Baskova, G.I. Nikonov, S. Khalil, 1988].

Разрушужеобразоваизопеть свнепязшретиесядставляетсяные

возм,посколькужнымгеидролизуютсяизвестнымипротеолитическими

ферментами.Втечениемногихлетделалисьпопыткиобнаружить

специфическую

эндо,спептособнуюразрушатьидазузопептсвяз.Поэтомудестабилазадные

–

единствизвестныйнасегодннодефермент,яшнийькатализирующий

расщеплениетакихсвязей.

Дестабилазаявляется

специфичферме,обладающимнымтом

тромболитическими

свойствами

особыммеханизмомдействия.

Открытие

дестабилазногокомплексаподтвержданеизвестногосуществоране путиание

фибринолиза[V.A. Manuvera

et al., 1997].

Действклассическихф бринолитикактивациюнаправлено

природногопутифибриноли

за,т.е.наактивациюплазмина,способного

гидролизовастабилф .Обринзитрицьэффектовреализациитенныйьный

подобногомеханизмафибринопроявотрывелизаяетсомбасудистойя

стен.Этоведеткегомиграциипокровеноснымсосудам;отрыу

омбаот

сосудистойстенки,нанейобразуетсяранепов,котораяерхностьвновьвызывает

каскадбиохимическихре,акцт тромбообразованиевизирующихй.

Отличаясь отплазмина,дестабилаза

способна

разрушать поперечные

сшивкибелке

обеспечить сохранность полипептидных цепей повсемуобъему

тромТаким. б,разом

ее ферментативная активностьприводит

образованию

продукта,сохраняющ его доменнуюструктуруфибрина,чтооб

условливает

постепенноерастворениефибриновогосгусткаХалиль[ С., 1987].

Кромефибринолиактивности,десспособническойабилазаингибировать

тромбообвартеЗавалова[рЛиолахазование..Баскова, И.П.Кузина, Е.В., 1993].

Дестабингибспонтаннуюлазаииндуцированнуюруетантагонистами

агрегациютромбоцитовчеловека.Механиз

мингибироваспонтанагрегациинияой

остаетсяпоканеясным,посколькувнаствремятсутствуетящеекакая

-либо

определконцотносеннаяпцмеханизм,стимулирующихятельноэтпроцесс.в

Втожевремя,этпоказательявляетсяважнейшимфакторомриска,

обуславливающимтромботическиеявлеу нияздоровыхосительнолюдей.

Чтокасаетсямеханингиндуцированнойзмабированияагрегации

тромбоци,тодействиедеснеопосредуетсяабилазыовчерезактивацию

аденилатциклазытромбоцитмембрповышеуровнярныхие

цАМФ.Можно

предп,чтингибиоложагрегациитротьвандестабилазоймбоцитов

обусловлееезащитнымдействиемнамембраныотропутембоцитовее

взаимодействиявысокоуч клеточнсткаффинме.мЭтоибранымих

предположениекоррелируэкспериментальнс

данными,

свидетельствующимионекоторойидентичноспервичнойструк уры

дестабилазыпервичнойструктуреря гезивныхбелков.

Наинтереснойболпредстапотенциальвозможностьляетсяая

растворенобразовавшегосятромбаприспользованиипрепарат

овЭМПзасчет

тромболитическойактивностидестабилазы.Тромболитикиприменяются,как

прав, артеилориальныхомбоза,сопровождающкритическимихся

состоянинфаринсульт( мио, ямикад.Применение).датромболитиковпри

варикотромбофлебитахнеопр

авданноиз

-завысокойстоимостипрепаратовН.[Г.

Котлоисоа., 1999;вта Butt A.M. et al., 2016; Karino M., 2018].

ВэкспериментеИ.П.Басковпоказанотр мболитическоейдействие

водногоЭМПпривнутривенномвнутрижелудочномвведенкрысам,пр

тромбообразовяремнойвапоииВеслератоду.

Степеньтромболоценвизупореквзисааланьсосудаализации

путемвзвешвырезанныхивысушенныхваниятромбовИ.П[.Ба кооа., вта

1995].

ИмепродолжительноесетвоздействиеЭМПнапредобразованн

ые

тромбы.Черезсуток7спонлизистроманаблюдалсяныйвконтрольнойов

группекрысна40%,живпотныхлучившиходнократнопероральноЭМП,

- на

67%,авслучаяхвнутриввведЭМПенногоия

- на78%.

Пероральпримеоказалосьболеенэффениеоективным

- введениеЭМП

привкполномурасдилотврпосравнениюрениюмбовконтролем[

I.P.

Baskova et al., 1988].

АналогичнымобразомпоказанотромболитическоедействиеводногоЭМП.

Степеньтромболувеличсповышениемз концентрациивсаласьЭМП[F.S.

Baranova, I.P. АBaskova,.Т. Baranov,Следуетотметчтопр1997]днократномить .

имногократнвведенииЭМПкровуживотныхмточивостьненаблюдалось.По

внешнимпризнакамсостояниеопытживотныхотличалоськонтрольных.

Прирассмотрениипрепаратовместн

огоприменения

-

возможным

направлениемиспользопрепаратовЭМПявляютсяанияостроевоспаление

стенокповерхвенкон,тромбофлебитыостныхечностей.

Чащевсего

остромбофлебитыйпорварикозножает

-расширенныевены

нижконихварикотромбофлебиечностей(

т)и показываосложненноетеч тние

варикознойболезни,

или

посттромбофлебитическойболезни.

Также,

тромбофлебит может развиватьсяввизуальнонеизмен

ных поверхностныхвенах.

Втак ом

случае,прецидивирующемхарзактереболевания,

необходимо

исключитьпа

ранеопластический

этиогенез.

При бластоматозныхпроцесс

ах у

пациентов лидируетракподжелезы.Троудочнойможетбфлебитсить

ятрогенныйхарактер,

когда развитиепроисходит

послелечебнойкатетеризации

однократнойпункциивены,

чаще еслиона

проходилаодновременнос

введением

растворов раздражающихконцентраций

[КутаковО.И., 1965;МатусовВ.Завалова,

Л.Кузина, Е., 1997].

Варикозноерасширение

вен

является благодатной

почвой развития

тромбоза,таккак

сопровождающие дегенеративныеизмененсосудстенкиястой

изамедлениекровотока

ведетк

тромбообразованию.Ввенознойсетинижних

конечнсоздаетсяейкомплексусловийдляразвитиятромботическогопроцесса,

которомуспособствуютлегкаяранимостьстенки,статичесуда

киеп регрузки,

деформациярасширвенозст,несостоятельностьенкиойиеклапанного

аппарата.

Вслучае

изменадгезивноя

-агрегационныхсвойствформенных

элементовкро,нафонеиенознзасти ояго

измененного кровподкожныхтока