1.Тонкие фиксированные мазки окрашиваются водным карболфуксином (из расчета 10 капель карболового фуксина Циля на 10 мл фосфатного буфера рН – 7,4) в течение 5 мин.

Мазок промывают водой и обрабатывают 0,5% раствором лимонной кислоты (1-3 сек).

2.Хорошо промывают водой и докрашивают 10 сек, 0,5% водным раствором метиленового синего.

3.Промывают водой и высушивают.

Риккетсии окрашиваются в рубиново-красный цвет и легко обнаруживаются на фоне голубой цитоплазмы и синего ядра клеток.

Student TJ

Цель: Изучить микрофлору почвы, воды, воздуха и организма человека.

Экология (от греч. Oikos – дом, место обитания) -это наука о изучении взаимоотношений микроорганизмов друг с другом и с окружающей средой.

Термин «экологическая микробиология» был впервые введен в 1945г С.Н. Виноградским для объединения разрозненных разделов общей и прикладной микробиологии, занятых изучением взаимосвязей макроорганизмов и микроорганизмов.

Экологическая микробиология- изучает отношения внутри микробных сообществ, а также взаимоотношения микроорганизмов и макроорганизмов, совместно обитающих в общих биотопах. Экосистема- является более высоким экологическим рангом и состоит из двух компонентов: 1) сообщества живых существбиоценоза.2) среды их обитания (биотопа) например, естественная микрофлора тела вместе с организмом хозяина, или микрофлора толстого кишечника и соответствующий участок желудочнокишечного тракта.

Биотоп- среда обитания микробов, которая состоит из живых (биотических) или абиотических природных компонентов, чаще всего из их суммы. Микробы находятся в прямых или косвенных взаимоотношениях со средой обитания.

Биоценоз-совокупность популяций разных видов, связанных единной средой обитания (биотопом). Микробоценоз (синоним микробиоценоз) – совокупность разных видов микробов, обитающих одном биотопе, например, ротовой полости.

Любая экосистема-лишь маленькая частица земной биосферы, которая является по существу,суммой всех экосистем планеты, живой оболочкой Земли. Все живые существа в природе, в том числе и микроорганизмы, связаны с другими организмами. Эти связи определяются обычно пищевыми-(трофическим типом связи) и пространственными (тропическим типом связи) - интересами».

Микроорганизмы находятся в различных взаимоотношениях друг с другом. Межвидовые взаимоотношения многообразны и динамичны. Классифицируют три основных типа отношений: симбиоз, нейтрализм и конкуренцию.

Симбиоз- от греческого слова simbiosis означает-совместная жизнь. Симбиоз совместное существование двух различных организмов. Симбиоз может быть факультативным или облигатным. При факультативном симбиозе каждый из организмов может при необходимости жить и без партнера, при облигатном самостоятельное развитие одного из организмов или обеих невозможно. Различают несколько вариантов полезных взаимоотношений: метабиоз, мутуализм, комменсализм, сателлизм, паразитизм.

Метабиоз- взаимоотношение микроорганизмов при котором один из них использует для своей жизнедеятельности продукты жизнедеятельности другого. Метабиоз характерен для почвенных нитрифицирующих бактерий.

Мутуализм- взаимовыгодное взаимоотношение разных организмов от латинского слово mutuus – взаимный. Примером мутуалистического симбиоза является лишайникисимбиоз гриба и синезеленой водоросли. Получая от клеток водоросли, органические вещества,гриб, в свою очередь поставляет им свою очередь минеральные соли и защищают от высыхания.

Комменсализм-(от лат. commensalism-сотрапезник) – характеризует такой вид сожительство, при котором выгоду из симбиоза извлекает один вид, не причиняя другому вреда. Комменсалами являются бактериипредставители нормальной микрофлоры человека.

Сателлизм- усиление роста одного вида микроорганизма под влиянием другого вида микроорганизма. Например, колонии дрожжейили сарцин, выделяя в питательную среду метаболиты,стимулирует рост вокруг них колонии других микроорганизмов.

Антагонистические взаимоотношения или антагонистический симбиоз, выражаются в виде неблагоприятного воздействия одного вида микроорганизма на другой, приводящего к повреждению и даже гибели последнего.

Паразитизм- (от греческогоparasitism - нахлебник) такая форма взаимоотношений, когда один организм использует другого как среду обитания или как источник пищи, как правила, нанося вред ему. Различают облигатные (абсолютные) паразиты- вирусы риккетсии и хламидии – (обязательные паразиты живых клеток) внутриклеточные паразиты. факультативные – многие бактериальные и грибковые возбудители инфекционных заболеваний являются необязательными паразитами и могут выживать за пределами организма хозяина. Для паразитов характерно свойство тропизм.

Тропизм-это приуроченности паразита к обитанию в строго определенных клетках, органах, тканях, к паразитированию только в организмах определенного круга хозяев.

Санитарная микробиология – направление медицинской микробиологии, изучающее микрофлору окружающей среды и ее влияние на здоровье человека. Санитарная микробиология изучает микрофлору окружающей среды с позиции влияния ее на здоровье человека.

Основные задачи санитарной микробиологии:

·Изучение биоценозов, в которых присутствуют микроорганизмы, патогенные для человека;

·Разработка методов микробиологических исследований внешней среды, микробиологических нормативов и мероприятий по оздоровлению объектов окружающей среды.

Санитарная микробиология использует два основных метода оценки санитарно – эпидемического состояния внешней среды: прямое обнаружение патогенных микроорганизмов и выявление косвенных признаков их пребывания во внешней среде по наличию санитарно – показательных микроорганизмов (СПМ).

К санитарно-показательным бактериям относятся представители облигатной микрофлоры организма человека и теплокровных животных, для которых средой обитания является кишечник или респираторный тракт. Они обладают следующими свойствами:

1)Постоянно выделяются в большом количестве с испражнением или капельками слизи из респираторного тракта.

2)Не имеют других мест обитания.

3)Способны сохраняться в окружающей среды в течении тех же сроков, что и патогенные бактерии, паразитирующие в кишечнике или респираторном тракте.

4)Не способны интенсивно размножаться на каких-либо объектах вне организма хозяина и изменять свои свойства.

5)Методы идентификации и дифференциации СПМ должны быть просты и надежны. Санитарно-показательными микробами, свидетельствующими о фекальном загрязнении

разным родам семейства Enterobacteriaceae. Обнаружение E.coli в каких-либо объектах окружающей среды или пищевых продуктах считается наиболее достоверным показателем свежего фекального загрязнения. Наличие бактерий родов Citrobacter и Enterobacter указывает на относительно давнее фекальное загрязнение. Присуствие Clostridium perfringens, C. sporogens

идругих клостридий в почве свидетельствует о ее фекальном загрязнении, при чем как свежем так и давнем, поскольку эти бактерии образуют споры что позволяет им длительно сохраняться в окружающей среде (в частности в почве). Обнаружение объектах в окружающей среде Enterococcus faecalis также свидетельствует об их фекальном загрязнении. К группе термофильных бактерий относятся неродственные бактерии, представители различных семейств, способных размножаться при температуре 600 С и выше (Lactobacillus lactis Streptococcus thermophiles и др.). они не являются постоянными обитателями кишечника человека

ине служат критериями фекального загрязнения окружающей среды. Резкое увеличение количества этих бактерий может свидетельствовать о загрязнении почвы разлагающимися отбросами, поскольку они размножаются в само-разогревающемся навозе и компостах. Бактерии принадлежащие к роду Proteus (P. vulgaris и др.) семейства Enterobfcterceace, широко распространены в природе. Эти гнилостные бактерии в большом количестве встречаются на разлагающихся останках животных и растений. Обнаружение этих бактерий в каких-либо пищевых продуктах свидетельствует о гнилостном распаде. Гемолитические стрептококки (S. pyogenes), являясь транзитным обитателями носоглотки и зева, выделяются с капельками слизи воздушно-капельным путем. Сроки выживания гемолитических стрептококков в окружающей среде практически не отличаются от сроков, характерных для большинства других возбудителей воздушно-капельных инфекций. Обнаружение гемолитических стрептококков в воздухе помещений указывает на возможное его загрязнение микробами, содержащимися в зеве, носоглотке, верхних дыхательных путях человека и являющимися возбудителями воздушнокапельных инфекций. Staphylococcus aureus является факультативным обитателем носоглотки, зева, а также кожных покровов человека. Его присутствие в воздухе помещений или на находящихся там предметах является показателем воздушно-капельного загрязнения. Одновременное обнаружение золотистого стафилококка и гемолитических стрептококков свидетельствует о высокой степени загрязнения воздуха.

Содержание санитарно-показательных бактерий оценивается по двум показателям: титру и индексу.

Титром- называется та минимальная масса или объем, в котором обнаруживаются данные бактерии.

Индексом- количество санитарно-показательных бактерий, содержащихся в 1л жидкости,1г почвы, 1м3 воздуха.

Микробное число-общее количество микроорганизмов, содержащихся в единице объема или массы исследуемого объекта-1мл воды, 1г почвы, 1м3 воздуха.

Микрофлора воды.

Вода - естественная среда обитания микроорганизмов. Состав микрофлоры воды зависит от химического состава воды, температуры, содержания СО и О рН, облучения солнечными лучами, содержания питательных веществ. Флорой и фауной, глубиной водоема, выпуском сточных и промышленных вод.

В пресных водоемах (реки, озера) нормальными обитающими являются микрококки. Micrococcus roseus и другие, псевдомонады Pseudomonas fluorescens, извитые формы. В воду поступают сапрофитные микробы почвы: азотобактерии, нитробактерии, протеи, псевдомонады, спириллы и другие микроорганизмы воды участвуют в самоочищении водоемов. В воду могут попадать

патогенные и условно патогенные микробы из почвы, вместе со сточными и промышленными водами, из населенных пунктов, при стирке белья, купании лошадей, при попадании в воду трупов грызунов и других животных, погибших от инфекций. Эти бактерии не приспособлены к существованию в воде и через некоторое время погибают. Но определенное время они сохраняются в воде: сальмонеллы от 2 дней до 3 месяцев, шигеллы 5-9 дней, лептоспиры 7-150 дней, холеный вибрион до нескольких месяцев. Вода имеет важное санитарноэпидемиологическое значение как фактор передачи возбудителей многих инфекций, особенно кишечных (брюшного тифа, дизентерии, сальмонеллезов, холеры, гепатита А, полиомиелита), которые с испражнениями больных и носителей поступают в открытые водоемы, а оттуда нередко и в питьевую воду.

Хотя вода не особенно благоприятна для патогенных и условно-патогенных микробов, многие из них способны переживать в ней определенное время. Сроки выживания патогенных микробов в воде зависят главным образом от их вида и концентрации микробной взвеси, температуры воды и содержания органических веществ.

Санитарно-показательными микроорганизмами воды являются:

А) E.coli, Str. faecalisсвидетельствует о свежем фекальном загрязнении.

В) p.Citrobacter, p. Enterobacterсвидетельствует о сравнительно давнем фекальном загрязнении.

Показатели санитарного состояния воды:

1)Общее микробное число (ОМЧ)-общее количество микроорганизмов в 1мл воды.

2)Коли-титр-наименьший объем воды в мл, в котором определяется хоть одна жизнеспособная

клетка.

3) Коли-индекс-число жизнеспособных клеток в 1л воды.

Таблица 1. Нормативы для питьевой воды (ГОСТ 2874-84)

Микрофлора почвы.

Почвы являются важнейшей средой и природным резервуаром обитания микроорганизмов. Вместе с растениями и животными они составляют сложные и многообразные биогеоценозы, состав, плотность, функциональная активность и прочие характеристики которых зависят от типа и структуры почвы, состава минеральных и органических веществ, физико-химического состояния, температуры, рН, влажности, концентрации углекислого газа, других факторов.

В слое пахотной почвы толщиной 15см на площади в 1га может содержаться от 1 до 5-6 тонн микробной массы. Она максимальная на глубине 10-20см. на глубине свыше 1-2м микроорганизмы уже встречаются в незначительном количестве, начиная с 5-6 м, почва может быть стерильной.В почве обитают бактерии, грибы, лишайники, простейшие, бактериофаги, водоросли, вирусы.

Почвенные бактерии:

a.аммонифицирующие бактерии, которые разлагают белки (p. Pseudomonas, p. Proteus, p. Bacillus); азотофиксирующие бактерии (p. Azotobacter, Azomonas, Mycobacter);

b.нитрифицирующие (p. Thiobacillus);

c.клубеньковые (p. Rhizobium)

d.серо - и железобактерии.

Азотофиксирующие бактерии

Вместе с испражнениями, мочой, с отбросами и трупами животных и человека в почву попадают представители нормальной микрофлоры человека и животных, патогенные и условно-патогенные микробы: кишечная палочка, возбудители брюшного тифа, сальмонеллёзов, дизентерии, возбудители холеры, вирусы гепатитов А, Е, полиомиелита. В почве они через некоторое время погибают по различным причинам (недостаток питательных веществ, высыхания, действия света). Основная причина – антагонизм постоянных обитателей почвы (бактерий, актиномицетов, грибов). Но некоторое время они сохраняются в почве. Сроки выживания-от некоторых дней до нескольких месяцев. Долго сохраняющиеся в почве споры. Споры возбудителя сибирской язвы, столбняка, ботулизма, газовой гангрены сохраняются в почве в течении несколько лет. Более того, для спорообразующих бактерий рода Клостридиум почва является естественной средой обитания. Поэтому попадание земли в раны чревато возникновением газовой гангрены или столбняка. Размножение в пищевых продуктах ботулинума таит смертельную угрозу отравления ботулотоксином. Отмирание патогенных бактерий в почве обусловлено недостатком влаги,

отсутствием необходимых питательных субстратов, антагонизмом почвенных микробов, действием солнечных лучей. Таким образом, почва является фактором передачи инфекционных заболеваний. В связи с этим проводят санитарнобактериологический контроль состояния почвы.

Санитарно-показательными микроорганизмами почвы являются:

А) E. сoli, а также бактерии группы кишечной палочки- БГКП–p. Citrobacter, p. Enterobacter, p. Klebsiella);

Б) Str. faecalis; В) C. perfringens.

Эти бактерии имеют общий путь выведения с возбудителями кишечных инфекций (с фекалиями) и служат показателями фекальной загрязненности почвы.

Показатели санитарного состояния, почвы:

1)общее микробное число (ОМЧ) –общее количество микроорганизмов в 1г почвы.

2)коли-титр почвы

3)перфрингенс – титр почвы.

Коли-титром почвы-наименьшее количество почвы в граммах, в котором определяется хоть одна жизнеспособная клетка кишечной палочки- E.Coli.

Перфрингенститр почвы – наименьшее количество почвы в граммах в котором определяется хоть одна жизнеспособная клетка возбудителя газовой гангрены – C.Perfringens. Санитарно-показательные бактерии группы кишечных палочек (БГКП) принадлежат к семейству энтеробактериям: E. Coliцитробактеры, энтеробактеры. Обнаружение C. Perfringens -в разных объектах окружающей среды, пищевых продуктах считается наиболее достоверным показателем свежего фекального загрязнения, а наличие цитробактеров и энтеробактеров указывает на относительно давнее фекальное загрязнение.

Присутствие C.Perfringens, C.sporogenesи других клостридий в почве свидетельствует об ее фекальном загрязнении давнее время эти бактерии образуют споры и длительное время находятся в почве. Обнаружение в объектах окружающей Str. Faecallis, также свидетельствует об их фекальном загрязнении.

Таблица 2. Санитарно-показательные бактерии окружающей среды и пищевых продуктов.

Микрофлора воздуха.

Недостаток влаги и питательных веществ, солнечная радиация препятствуют размножению микроорганизмов в атмосферном воздухе. микробы поступают в воздух с поверхности почвы и растений, с отходами некоторых производств, из животных организмов. Микрофлора зависит от интенсивности солнечной радиации, ветра, осадков, характера почвы, времен года. Воздух является неблагоприятной средой для микроорганизмов. Отсутствие питательных веществ, влаги, оптимальной температуры, губительное действие солнечных лучей и высушивания приводит к быстрой гибели микробов в воздухе. Но некоторые виды могут сохраняться в воздухе достаточно долго. Их распространение в воздухе связано с образованием в нем аэрозолясистемы из воздуха, капель жидкости и твердых частиц. микроорганизмы адсорбируются на частицах аэрозоля и оказываются надежно защищенными от губительного действия ультрафиолетовых лучей.

В воздухе могут встречаться до 100 видов сапрофитных микроорганизмов, пигментообразующие бактерии-(микрококки, желтая сарцина, чудесная палочка), спорообразующие анаэробы (дрожжи, плесневые грибы, актиномицеты) споровые палочки B. Subtilis, B. Megaterium, B. cereus которые наиболее устойчивы к действию прямого солнечного света и высушивания.

Микроорганизмы попадают в воздух с поверхности тела (с чешуйками кожи) и через верхние дыхательные пути при разговоре, кашле, чихании. В результате в воздух попадают патогенные микроорганизмы: гноеродные кокки, микробактерии туберкулеза, дифтерийная бацилла,

P.O.U. 59g t.me/tgmu12 - 55 -

стрептококки, бактерии туляремии, риккетсии. Некоторое время они могут находиться в воздухе, что связано с их устойчивостью к высушиванию и действию ультрафиолетовых лучей. Через воздух они могут передаваться вместе с каплями слизи и мокроты при чихании, кашле, разговоре. В связи с этим воздух может быть фактором передачи ряда инфекций: гриппа, кори, скарлатина, дифтерии, туберкулеза, коклюша, стрептококковых, стафилококковых и менингококковых инфекций, ангины, оспы, легочная форма чумы и другие. Распространение патогенных микробов через воздух может реализоваться и другим путем, если выброшенные из респираторного тракта капельки высыхают на поверхности и превращаются в бактериальную пыль. Показано, что внутри белкового субстрата некоторые патогенные бактерии выживают дольше и такая бактериальная пыль может интенсивно перемещаться с воздушными потоками. Пылевой путь особенно в эпидемиологии туберкулеза, дифтерии. Поэтому проводятся санитарно-бактериологический контроль состояния воздуха особенно в больничных и детских учреждениях, в аптеках.

Показатели санитарного состояния воздуха:

1)Микробное число воздуха- общее количество микробов в 1 м3 (1000 литров) воздуха.

2)Количество санитарно-показательных микробов на 250 литрах.

3)Санитарно-показательные микробами воздуха закрытых помещений являются:

a)золотистый стафилококк – S.Aureus.

b)α -зеленеющий стрептококк–Str. Viridans;

c)β- гемолитический стрептококк– Str. Haemolyticus.

Эти бактерии являются показателями орально-капельного загрязнения. Они имеют общий путь выделения в окружающую среду с патогенными микроорганизмами, передающимися воздушнокапельным путем. Сроки выживания их в окружающей среде не отличаются от сроков, характерных для большинства возбудителей воздушно-капельных инфекций.

Обнаружение гемолитического стрептококка (Str. pyogenes) и золотого стрептококка (S. Aureus) в воздухе помещений указывает загрязнение микроорганизмами, содержащимися в зеве, носоглотке, верхних дыхательных путей и является возбудителями воздушно-капельных систем одновременное обнаружение золотистого стафилококка и гемолитического стрептококка свидетельствует о высокой степени загрязненности воздуха.

Таблица 3. Критерии оценки микробного обсеменения воздуха в больничных помещениях