Простейшие паразитируют в различных органах и тканях: в крови, кишечнике, ЦНС, печени, лёгких и т.д.

Возбудители передаются человеку алиментарным путём, через членистоногих переносчиков, половым путём.

К протозойным инфекциям человека относится: амёбиаз, бабезиоз, балантидиаз, болезнь Шагаса, дизентерия, изоспороз, лейшманиоз, лямблиоз, малярия, саркоцистоз, сонная болезнь, токсоплазмоз, трихомониаз.

Микробиологическое исследование заболеваний вызванных простейшими Микроскопический метод направлен на выявление па разитов в нативных и окрашенных препаратах. Материалом для исследования служат кровь, пунктаты грудины или лимфатических узлов, спинномозговая жидкость, соскоб с кожных элементов, фекалии, дуоденальное содержимое, отделяемое слизистой оболочки наружных половых органов или мочеиспускательного канала. Простейшие можно обнару жить как в мазках, так и в гистологических препаратах, изготовленных из пораженных тканей. Разработано значительное число методов окраски простейших, среди которых наиболее часто применяется метод РомановскогоГимза.

Культуральный метод заключается в посеве исследуемого материала на среды, содержащие кровь или нативную сыворотку, яичный белок, углево ды, аминокислоты и другие вещества(рН сред 7,0-7,6). Культивирование большинства простейших осуществляют обычно при 370С, лейшманий и трипаносомпри 20260 С. Результаты посевов учитывают визуально и микроскопическим методом ( препарат «раздавленная» капля) через 24, 48, 72, 120 часов. Дизентерийные амебы, балантидии, трихомонады, хиломастиксы проще выявить микроскопическими методами, однако при необходимости применяют культуральное исследование.

Серологический метод при протозойных инфекциях имеет вспомогательное значение. Применяется РА (американский трипаносомоз), РП (американский трипаносомоз, амебиаз), РСК (американский трипаносомоз, токсоплазмоз, висцеральный лейшманиоз, амебиаз), РИФ (американский трипаносомоз, малярия, токсоплазмоз, висцеральный лейшманиоз, амебиаз), РНГА (ток соплазмоз), ИФА (токсоплазмоз, тропическая малярия, амебиаз, кожный и висцеральный лейшманиозы, американский трипано сомоз).

Аллергический метод – кожные аллергические пробы применяются редко, обычно для под тверждения диагноза кожного лейшманиоза (проба с лейшманином, реакция Монтенегро) и токсоплазмоза (проба с токсоплазмином).

Биологический метод (биопроба) применяется для подтверждения диагноза ряда протозоозов, а также в научных целях. Чувствительными животными для дизентерийных амеб и балантидий являются 2-3-недельные крысята, морские свинки, котята, щен ки, золотистые хомячки; для лямблий — мыши; для лейшманий белые мыши и хомяки; для американских трипаносом - морские свинки; для африканских трипаносом – мартышки; для токсоплазм - белые мыши. Заражение животных осуществляют па рентерально, в слепую кишку при лапаротомии, через длинный пластмассовый зонд или путем скармливания животным исследуемого материала.

Student TJ

ПО ТЕМЕ: «Морфология вирусов. Классификация. Способы культивирования. Формы взаимодействия вируса с клеткой. Бактериофаги».

ВОПРОСЫ ДЛЯ ОБСУЖДЕНИЯ:

1.Понятие о вирионе и вирусе, их определение:

·Морфология, структура вириона,

·Классификация вирусов.

2.Репродукция вирусов.

·Основные стадии взаимодействия вируса с клеткой хозяина.

3.Методы культивирования вирусов:

·в клеточных культурах,

·курином эмбрионе,

·в организме животных.

4.Методы обнаружения вирусов:

·по цитопатическому действию (ЦПД),

·реакции гемагглютинации и гемадсорбции,

·бляшкеобразованию,

·внутриклеточным включениям.

5.Методы идентификации вирусов.

6.Вирусы бактерий (бактериофаги).

Морфология фагов, распространение в природе, лизегония и её значение, фаговая конверсия.

7.Применение фагов в микробиологии и медицине. Самостоятельная работа:

1.Заражение культуры ткани вирусосодержащим материалом.

2.Постановка реакции гемагглютинации.

3.Демонстрация цветной пробы.

4.Демонстрация ЦПД вирусов.

5.Определение брюшнотифозного и дизентерийного бактериофагов в воде открытых водоёмов (косвенный метод оценки загрязненности воды патогенными бактериями).

6. Определение вида бактерий по чувствительности к бактериофагам (фаготипирование). 7. Реакция нейтрализации (демонстрация).

Морфология вирусов, особенности классификации.

Вирусы— это мельчайшие микроорганизмы, не имеющие клеточного строения, белоксинтезирующей системы, содержащие только один тип нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК). Они отличаются особым разобщенным (дисъюнктивным) способом размножения (репродукции): в клетке отдельно синтезируются нуклеиновые кислоты вирусов и их белки и затем происходит их сборка в вирусные частицы. Вирусы относят к царству Vira. Вирусы, являясь облигатными внутриклеточными паразитами, размножаются в цитоплазме или ядре клетки. Сформированная вирусная частица называется вирионом.

Морфологию и структуру вирусов изучают с помощью электронного микроскопа, так как их размеры малы и сравнимы с толщиной оболочки бактерий. Форма вирионов может быть различной: -палочковидной (вирус табачной мозаики), -пулевидной (вирус бешенства), - сферической (вирусы полиомиелита, ВИЧ), -в виде сперматозоида (многие бактериофаги).

Размеры вирусов определяют с помощью электронной микроскопии, методом ультрафильтрации через фильтры с известным диаметром пор, методом ультрацентрифугирования. Одним из самых мелких вирусов является вирус полиомиелита (около 20 нм), наиболее крупным – натуральной оспы (около 350 нм).

Вирусы имеют уникальный геном, так как содержат либо ДНК, либо РНК. Поэтому различают ДНКсодержащие и РНК-содержащие вирусы. Они обычно гаплоидны, т.е. имеют один набор генов.

Геном вирусов представлен различными видами нуклеиновых кислот: двунитчатыми, однонитчатыми, линейными, кольцевыми, фрагментированными.

Различают просто устроенные (например, вирус полиомиелита) и сложно устроенные (например, вирусы гриппа, кори) вирусы. У просто устроенных вирусов нуклеиновая кислота связана с белковой оболочкой, называемой капсидом (от лат. capsa – футляр). Капсид состоит из повторяющихся морфологических субъединиц – капсомеров. Нуклеиновая кислота и капсид, взаимодействуя друг с другом, образуют нуклеокапсид. У сложно устроенных вирусов капсид окружен дополнительной липопротеидной оболочкой – суперкапсидом (производное мембранных структур клетки-хозяина), имеющей «шипы». Для вирионов характерен спиральный, кубический и сложный тип симметрии капсида.

Спиральный тип симметрии обусловлен винтообразной структурой нуклеокапсида, кубический тип симметрии – образованием изометрически полого тела из капсида, содержащего вирусную нуклеиновую кислоту.

Ввирусологии используют следующие таксономические категории: семейство (название оканчивается на viridae), подсемейство (название оканчивается на virinae), род (название оканчивается на virus).

Воснову классификации вирусов положены следующие категории:

·тип нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК), ее структура, количество нитей (одна или две),

·особенности воспроизводства вирусного генома;

·размер и морфология вирионов, количество капсомеров и тип симметрии;

·наличие суперкапсида;

·чувствительность к эфиру и дезоксихолату;

· место размножения в клетке; · антигенные свойства и пр.

Взаимодействие вируса с клеткой

Известны три типа взаимодействия вируса с клеткой:

1.продуктивный тип, завершающийся образованием вирусного потомства;

2.абортивный тип, не завершающийся образованием новых вирусных частиц, поскольку инфекционный процесс прерывается на одном из этапов;

3.интегративный тип, или вирогения, характеризующийся встраиванием вирусной ДНК в хромосому клетки-хозяина.

Продуктивный тип взаимодействия (репродукция вирусов)

Репродукция вирусов (от англ, reproduce – воспроизводить) осуществляется в несколько стадий, последовательно сменяющих друг друга:

1.адсорбция вируса на клетке;

2.проникновение вируса в клетку;

3.«раздевание» вируса;

4.биосинтез вирусных компонентов в клетке;

5.формирование вирусов;

6. выход вирусов из клетки.

Адсорбция. Взаимодействие вируса с клеткой начинается с процесса адсорбции, т. е. прикрепления вирусов к поверхности клетки. Это высокоспецифический процесс. Вирус адсорбируется на определенных участках клеточной мембраны – так называемых рецепторах.

Способность вирусов избирательно поражать определенные клетки органов и тканей организма называют тропизмом вирусов (от греч. tropos – направление).

Проникновение в клетку. Существует два способа проникновения вирусов животных в клетку: виропексис и слияние вирусной оболочки с клеточной мембраной. При виропексисе после адсорбции вирусов происходят инвагинация (впячивание) участка клеточной мембраны. Процесс слияния осуществляется одним из поверхностных вирусных белков капсидной или суперкапсидной оболочки..

«Раздевание». Процесс «раздевания» заключается в удалении защитных вирусных оболочек и освобождении внутреннего компонента вируса, способного вызвать инфекционный процесс. Конечными продуктами «раздевания» являются сердцевина, нуклеокапсид или нуклеиновая кислота вируса.

Биосинтез компонентов вируса. Проникшая в клетку вирусная нуклеиновая кислота несет генетическую информацию, которая успешно конкурирует с генетической информацией клетки. Реализация генетической информации вируса осуществляется в соответствии с хорошо известными из биологии процессами транскрипции (от лат.transcriptio – переписывание, т.е. синтез информационных РНК – иРНК, комплементарных матричным ДНК или РНК), трансляции (от лат. translatio – передача, т. е. синтез белков на рибосомах клетки с участием иРНК) и репликации (от лат. replicatio – повторение, т. е. синтез молекул нуклеиновой кислоты,

гомологичных геному Формирование (сборка) вирусов.

Существуют следующие общие принципы сборки вирусов, имеющих разную структуру:

1.формирование вирусов является многоступенчатым процессом с образованием промежуточных форм;

2.сборка просто устроенных вирусов заключается во взаимодействии молекул вирусных нуклеиновых кислот с капсидными белками и образовании нуклеокапсидов (например, вирусы полиомиелита). У сложно устроенных вирусов сначала формируются нуклеокапсиды, с которыми взаимодействуют белки суперкапсидных оболочек (например, вирусы гриппа);

3.формирование вирусов происходит не во внутриклеточной жидкости, а на ядерных или цитоплазматических мембранах клетки;

4.сложно организованные вирусы в процессе формирования включают в свой состав компоненты клетки-хозяина (липиды, углеводы).

Выход вирусов из клетки. Различают два основных типа выхода вирусного потомства из клетки. Первый тип – взрывной – характеризуется одновременным выходом большого количества вирусов. При этом клетка быстро погибает. Второй тип – почкование. Он присущ вирусам, имеющим суперкапсиднуе оболочку.

Интегративный тип взаимодействия (вирогения)

Интегративный тип взаимодействия (вирогения) характеризуется встраиванием (интеграцией) нуклеиновой кислоты вируса в хромосому клетки. При этом вирусный геном реплицируется и функционирует как составная часть клеточного генома.

Культивирование и индикация вирусов Культивирование вирусов человека и животных проводят с целью лабораторной диагностики

вирусных инфекций, для изучения вопросов патогенеза и иммунитета, получения диагностических и вакцинных препаратов, применяют в научноисследовательской работе. животных, развивающиеся куриные эмбрионы и культуры клеток.

Индикацию вирусов осуществляют по характеру специфических поражений оболочек и тела эмбриона, а также феномену гемагглютинации – склеиванию эритроцитов.

Метод культур клеток – выращивание различных клеток и тканей вне организма на искусственных питательных средах. Большое распространение получили культуры клеток из эмбриональных и опухолевых (злокачественно перерожденных) тканей.

В зависимости от техники приготовления и культивирования различают три основных типа культур клеток и тканей: однослойные культуры клеток; культуры суспензированных клеток; органные культуры.

О размножении вирусов в культуре клеток свидетельствуют I следующие признаки:

·цитопатический эффект;

·образование в клетках включений;

·образование бляшек;

·феномен гемадсорбции;

·«цветная» реакция.

Цитопатический эффект (ЦПЭ) – видимые под микроскопом морфологические изменения клеток вплоть до их гибели, возникающие в результате повреждающего действия вирусов.

Идентификация вирусов осуществляется с помощью серологических (иммунологических) методов:

·реакция торможения гемагглютинации (РТГА),

·реакция торможения гемадсорбции (РТГадс),

·реакция связывания комплемента (РСК),

·реакция нейтрализации цитопатогенного действия (РН),

·реакция иммунофлюоресценции прямая и непрямая (РИФ, РНИФ),

·реакция преципитации в геле (РП),

·реакция нейтрализации цветной пробы.

Бактериофаги

Бактериофаги (от «бактерия» и греч. phagos– пожиратель) – вирусы бактерий, обладающие способностью специфически проникать в бактериальные клетки, репродуцироваться в них и вызывать их растворение (лизис).

Вдальнейшем выяснилось, что бактериофаги широко распространены в природе. Их обнаружили в воде, почве, пищевых продуктах, различных выделениях из организма людей и животных, т.е. там, где встречаются бактерии. В настоящее время эти вирусы выявлены у большинства бактерий, как болезнетворных, так и неболезнетворных, а также ряда других микроорганизмов (например, грибов). Поэтому в широком смысле их стали называть просто фагами.

Фаги различаются по форме, структурной организации, типу нуклеиновой кислоты и характеру взаимодействия с микробной клеткой.

Морфология. Большинство фагов под электронным микроскопом имеют форму головастика или сперматозоида, некоторые – кубическую и нитевидную формы. Размеры фагов колеблются от 20 до 800 нм у нитевидных фагов. Наиболее полно изучены крупные бактериофаги, имеющие форму сперматозоида. Они состоят из вытянутой икосаэдричес-кой головки и хвостового отростка. Внутри хвостового отростка имеется полый цилиндрический стержень, сообщающийся отверстием с головкой, снаружи – чехол, способный к сокращению наподобие мышцы. Хвостовой отросток заканчивается шестиугольной базальной пластинкой с короткими шипами, от которых отходят нитевидные структуры – фибриллы.

Существуют также фаги, имеющие длинный отросток, чехол которого не способен сокращаться, фага с короткими отростками, аналогами отростков, без отростка.