6 курс / Гастроэнтерология / Российский_журнал_гастроэнтерологии,_гепатологии,_колопроктологии (61)

4, 2010

Редакционная

Суммарный эффект активации FXRα желчными

он включает комплексное изменение клеточного

кислотами состоит в повышении транскрипции

метаболизма глюкозы и липидов, которое пере-

прегеномной РНК HBV и соответственно в потен-

водит клетки в состояние, позволяющее осущест-

цировании интенсивности репликации вирусной

влять вирусную репликацию.

ДНК (C. Ramiere и соавт., 2008).

Как показано недавно в эксперименте, коак-

Появились новые данные об оценке влияния

тиватор 1α пероксисомного пролифератор-акти-

желчных кислот на репликацию HCV. Во-пер-

вируемого рецептора γ (PGC1α), усиливающий

вых, высокие уровни ЖК в крови оказались

работу ряда факторов транскрипции, контролиру-

прогностическими маркёрами, предсказывающи-

ющих энергетический и нутритивный гомеостаз,

ми неэффективность противовирусной терапии,

способствует репликации HCV. В соответствии с

направленной на достижение устойчивого виру-

этим выдвинута концепция «метаболовируса» для

сологического ответа. В частности, концентрация

описания регуляции репликации HBV (Schlomai

ЖК выше 15 мМ в сочетании с уровнем феррити-

A. Shaul; цит. по Р. Andre, 2009). В модели

на выше 300 мг/мл оказались предикторами без-

метаболовируса регуляция

транскрипции HBV

успешности терапии. Во-вторых, выяснилось, что

опосредуется близкими друг к другу по харак-

циркулирующие частицы HCV взаимодействуют

теру нутритивными сигналами, исходящими от

с липопротеинами и образуют гибридные липо-

печеночных метаболических генов, таких как

вирусные частицы. Эти гибридные молекулы

РЕРСК и GGPase. Последние вовлечены в регу-

образуются только в гепатоцитах и энтероцитах,

ляцию глюконеогенеза. При голодании индуциру-

т.е. в двух типах клеток, продуцирующих липо­

ется образование PGC1α, который коактивирует

протеины и «купающихся» в желчных кислотах.

HNF4α. Это приводит к усилению репликации

ЖК, особенно хенодезоксихолат и дезоксихолат,

HBV. Интересно, что PGC1α известен также

увеличивают репликацию РНК 1-го генотипа HCV

как коактиватор FXRα и стимулятор экспрессии

более чем в 10 раз (C. Scholtes и соавт., 2008).

генов-мишеней для FXRα. В ответ на кратковре-

Лишь свободные, но не конъюгированные ЖК

менное голодание, когда PPARα и HNF4α сти-

-VESTI

оказывают подобный эффект. Это позволяет пред-

мулируют.RUβ-окисление и глюконеогенез соответ­

полагать, что усиление репликации HCV опосре-

ственно, FXRα уменьшает продукцию и секрецию

дуется ядерным рецептором и не сопряженным

триглицеридов, а также регулирует глюконеоге-

с G-протеином мембранным рецептором TGR5.

нез. На примере модели метаболовируса можно

Только лиганды FXRα стимулируют репликацию

предположить, что желчные кислоты посредством

HCV, и блокирование FXRα блокирует также и

FXRα вовлечены в

метаболическую регуляцию

.M

репликации HBV и HCV.

индукцию репликации HCV, инициируемую ЖК.

Изменение репликации HCV лигандами FXRα

Гепатотоксичность – один из наиболее час-

осуществляется в равной пропорции при наличии

тых побочных эффектов и один из важнейших

или отсутствии интерферона I типа, что указывает

факторов, определяющих вывод лекарственных

на независимый от интерферона механизм контро-

средств с фармацевтического рынка. В качестве

ля репликации РНК желчными кислотами. FXRα

примеров можно привести тиазолидиндион тро­

относится к ДНК-связывающим протеинам, в

глитазон, ингибитор HMG-CoA редуктазы цери-

связи с чем вряд ли возможно егоWWWпрямое взаимо-

вастатин, хинолон тровафлоксацит и ингибитор

действие с РНК HCV. Этот рецептор прямо или

циклооксигеназы-2 лимиракоксиб. К препаратам,

опосредованно регулирует различные гены, вов-

способным индуцировать

острое

повреждение

леченные в метаболизм ЖК, холестерина, липи-

печени, относятся ацетаминофен, антимикроб-

дов и глюкозы. Поэтому, скорее всего, контроль

ные агенты, нестероидные противовоспалитель-

репликации HCV осуществляется несколькими

ные препараты (НПВП), статины. Лекарства

разными механизмами.

могут вызывать гепатит, холестаз или смешан-

Становится очевидным, что FXRα и ЖК

ную форму повреждения печени. Вместе с тем

выступают как регуляторные факторы процесса

другие формы ее холестатического повреждения

репликации HBV и HCV. Метаболизм желчных

вызываются генетическими или приобретенными

кислот и тканевая экспрессия FXRα, вероятно,

дефектами транспорта или метаболизма ЖК.

относятся к факторам, которые в определенной

Важным регулятором гомеостаза желчных кислот

мере ограничивают тропизм этих двух вирусов,

служит фарнезоидный Х рецептор (J.J. Eloranta,

даже если механизм контроля вирусной репли-

G.A. Kullak-Ublick,

2008).

FXR

активируется

кации у них различается. FXRα применительно

хенодезоксихолевой кислотой и другими ЖК и

к HBV действует посредством FXRE в ключевых

угнетает de novo синтез желчных кислот на этапе

промоторных и энхенсерных регионах вирусного

превращения холестерола холестерол 7α-гидрок-

генома, регулирует транскрипцию вирусной РНК

силазой. Этот рецептор активирует элиминацию

и соответственно репликацию генома вирусной

ЖК в желчь путем прямой индукции транс-

ДНК. Применительно к HCV механизм регу-

крипции гена экспортной помпы солей желчных

ляции FXRα еще недостаточно ясен. Вероятно,

кислот (BSEP, ABCB11). Системы захвата ЖК

РЖГГК он-лайн – www.gastro-j.ru

11

Редакционная

4,

2010

угнетаются FXR опосредованно за счет негативно-

детоксикации желчных кислот сульфотрансфе-

го вмешательства репрессора транскрипции SHP с

разы 2а (SULT2a) и ряда транспортеров ЖК.

глюкокортикоидным рецептором (GR) в случае

Ядерный прегнановый Х рецептор (PXR) ока-

NTCP и с гепатоцитарным

ядерным

фактором

зывает защиту печени от повреждения холевой

1α (HNF1α) в случае ОАТР1В1 (J.J. Eloranta и

кислотой при сочетанном введении лиганда этого

соавт., 2006). ОАТР1В1 служит системой захва-

рецептора

PCN.

Последний активирует

PXR

та не только желчных кислот, но и различных

и индуцирует экспрессию генов-мишеней PXR

лекарственных препаратов, включая гепатотокси-

– MRP3 и CYP3a11 (S. Teng и соавт., 2007).

ческие агенты, такие как статины и троглитазон

В эксперименте показано угнетение экспрессии

(B. Hogenbuch, C. Gui, 2008).

ЯР PPARα при стеатогепатите, вызываемом аце-

FXR угнетает также опосредованно экспрес-

таминофеном (S. Donthamensetty и соавт., 2008).

сию других систем лекарственного захвата на

Предшествующее введение клофибрата, лиганда

базолатеральной мембране гепатоцитов, вклю-

PPARα, уменьшает повреждение печени благо-

чая ОСТ1 (переносчик метформина, циметидина,

даря ускорению восстановления ткани печени.

ганцикловира и др.), ОАТ2 (НПВП, аналоги

Активация PPARα сопровождается увеличением

противовирусных нуклеозидов, антибиотики) и

продукции NADPH и АТФ, необходимых для

CNT1 (нуклеозидные аналоги). Эти три транс-

выживания клеток за счет компенсации повреж-

портера активируются HNF4α на уровне генной

дения митохондрий. Следует также отметить, что

транскрипции (M. Saborowski и соавт., 2006).

ядерный рецептор CAR (constitutive androstane

SHP, индуцированный FXR, негативно влияет на

receptor) индуцирует экспрессию энзимов, мета-

трансактивацию генов через HNF4α и тем самым

болизирующих

ацетаминофен. Ингибирование

тормозит синтез транспортеров и соответственно

активности CAR посредством введения андроста-

захват печенью транспортных субстратов.

нола блокирует гепатотоксичность ацетамино-

Дефицит FXR сопровождается холестатичес-

фена у животных с диким геном CAR, но не у

ким повреждением печени при следующих услови-

животных с Car–/– (J. Zhang и соавт., 2002).

ях. Во-первых, при функциональных вариантах

Таким образом.RU, ингибирование CAR может слу-

предрасположенности гена FXR к внутрипече-

жить прототипом для разработок лекарственных

ночному холестазу беременных. Во-вторых, при

средств, уменьшающих токсические эффекты аце-

прогрессирующем

семейном

внутрипеченочном

таминофена и других гепатотоксических агентов.

холестазе 1 типа (PFIC1; progressive familial

intrahepatic cholestasis type 1), когда

снижают

.M

ся уровни мРНК

фарнезоидного Х

-VESTIЛиганды ядерных рецепторов

рецептора

Холангиопатии

и генов, трансактивируемых посредством FXR.

представлены

гетерогенной

Более того, дикий тип протеина FIC1 способству-

группой генетических и приобретенных синдро-

ет транслокации FXR в ядро посредством после-

мов поражения билиарного тракта, и они имеют

довательной цепи фосфорилирования протеинов,

значимое социальное звучание ввиду тяжести кли-

нацеленных на FXR. Это в целом указывает на

нического течения, высокой смертности и необхо-

возможность возникновения FIC1-ассоциирован-

димости трансплантации печени. Холангиопатии

ных болезней вследствие нарушеннойWWWспособнос-

охватывают синдромы и болезни разной этиологии

ти генетических вариантов FIC1 индуцировать

и разного патогенеза – от иммунных (первичный

экспрессию и функцию FXR (T. Frankenberg и

билиарный цирроз и первичный склерозирующий

соавт., 2008). В-третьих, на модели FXR–/–

холангит)

до

генетически детерминированных

мыши показано развитие печеночной аденомы и

(кистозный фиброз, прогрессирующий семейный

карциномы, и этот эффект потенцируется добав-

холестаз) и большую группу других, вызываемых

лением в корм 0,2% холевой кислоты (F. Yong

инфекцией, сосудистыми и токсическими агента-

и соавт., 2007). Следует отметить, что антихоле­

ми (D. Alvaro и соавт., 2008). Наконец, следует

статическое действие УДХК под контролем

учитывать рост неопластических холангиопатий,

FXR индуцирует гены таких переносчиков, как

в частности холангиокарциному с ее очень пло-

BSEP, MDR3 и MDR4 посредством независимо-

хим прогнозом. Холангиопатии в подавляющем

го от FXR механизма (H.U. Marshall и соавт.,

большинстве случаев неуклонно

прогрессируют

2007).

в направлении дуктопении, т. е. такого осложне-

Помимо FXR в реакции защиты или усиле-

ния, при котором исчезает более 50% междолько-

ния поражений печени вовлечены и другие ЯР.

вых желчных протоков и нарастают клинические

Печеночный Х рецептор α (LXRα) в экспери-

симптомы холестатического синдрома (зуд, жел-

менте оказывает противодействие холестатичес-

туха и т. д.). Первичной мишенью, поражаемой

кому повреждению печени, вызываемому лито-

при холангиопатиях, служит популяция холан-

холевой кислотой или лигированием желчного

гиоцитов – эпителиальных клеток, выстилающих

протока (H. Uppal и соавт., 2007). В этой моде-

билиарное дерево. Холангиоциты играют преиму-

ли у животного усиливается

экспрессия энзима

щественную роль в процессах образования желчи,

12

РЖГГК он-лайн – www.gastro-j.ru

4, 2010

Редакционная

пролиферации, репарации повреждений, фиброза,

У мужчин экспрессия ERα значительно выше,

ангиогенеза и регуляции кровотока (D. Alvaro и

чем у женщин, косвенно указывая на то, что

соавт., 2007).

доминирование женщин при ПБЦ и типичный

В последнее десятилетие были идентифици-

постменопаузальный клинический дебют могут

рованы различные подтипы (ERα, ERβ) эстро-

быть связаны с дефектом пролиферативного

геновых рецепторов (ER) на холангиоцитах, и

ответа холангиоцитов на эстрогены.

эстрогены продемонстрировали себя как лиганды

Приведенные факты могут иметь важное кли-

билиарного дерева, которые опосредуют проли-

ническое приложение, поскольку регуляция эстро-

феративную и секреторную активность холан-

геновых рецепторов может замедлять прогрессиро-

гиоцитов. Специфически эстрогены активируют

вание ПБЦ в направлении дуктопении. Например,

внутриклеточные сигнальные каскады, в част-

показано, что тамоксифен (смешанный агонист/

ности ERKЅ (extracellular regulate kinases Ѕ) и

антагонист ERα и антагонист ERβ) улучшает

PI3-киназу/АКТ (phosphatidylinoslitol-3′kinase/

биохимические показатели холестаза при ПБЦ.

AKT), которые типичны для таких факторов

Препарат может уменьшать проявления холес-

роста, как инсулиноподобный фактор роста

таза и посредством активации PXR, сопряжен-

(IGF1), фактор роста нервов (NGF) и васку-

ного с функциональной активностью цитохрома

лярный эндотелиальный фактор роста (VEGF).

Р450 и механизмами действия УДХК. Безусловно,

Кроме того, эстрогены стимулируют секрецию

при длительном применении тамоксифен обладает

различных факторов роста пролиферирующими

таким серьезным побочным эффектом, как повы-

холангиоцитами. В печени здорового человека

шение риска эндометриального рака. Вместе с

холангиоциты не экспрессируют ER. Однако при

тем препараты второго поколения (ралоксифен),

ряде патологических состояний, включающих

у которых не отмечена способность к индукции

ПБЦ, поликистозную болезнь печени и холан-

пролиферации в репродуктивных тканях, способ­

гиокарциному, посредством иммуногистохими-

ствуют нормализации биохимических показателей

ческого анализа

удается показать экспрессию

холестаза у пациентов с ПБЦ. При этом повыша-

-VESTI

ERα и ERβ (D. Alvaro и соавт., 2006, 2008). Все

ется минеральная.RU

плотность костей (D. Alvaro,

эти заболевания

характеризуются

реактивной

2009). Активация ERα опосредует многие другие

или неопластической пролиферацией холангио-

положительные эффекты, в частности повышает

цитов, что подтверждает участие эстрогенов и их

иммунную толерантность при аутоиммунных забо-

рецепторов в опосредовании пролиферативной

леваниях, а также ингибирует экспрессию провос-

активности холангиоцитов в течении этих забо

палительных генов за счет задержки транслокации

леваний.

.M

фактора NF-каппаβ в ядро.

Холангиоциты,

выстилающие

междольковые

Аутосомно-доминантная

поликистозная

желчные протоки у больных ПБЦ, но не у здо-

болезнь почек (АДПБП) имеет частоту 1:800

ровых лиц, экспрессируют ERα- и ERβ-подтипы.

индивидуумов. Кисты печени выступают наиболее

Экспрессия ER различается в разные стадии

частой экстрапочечной клинической манифестаци-

болезни и коррелирует с маркёрами пролифера-

ей болезни и нередко служат причиной обращения

ции (PCNA) и смерти (Tunel). Экспрессия ERα

к врачу. При АДПБП вероятность появления кист

возрастает с 1% холангиоцитовWWWпри I стадии

печени значительно выше у женщин – 92% среди

ПБЦ до 12% в стадии III, тогда как экспрессия

всех пациентов, которым осуществляется транс-

ERβ оказывается стабильно высокой (50–65%

плантация печени по поводу поликистозной болез-

холангиоцитов) на всех гистологических стадиях

ни. Число и размеры кист возрастают при менопа-

болезни. На стадиях I–III экспрессия ERα кор-

узальной заместительной гормональной терапии.

релирует и колокализуется с PCNA, что указы-

Причем у нерожавших женщин вероятность раз-

вает на наличие экспрессии ERα как индикатора

вития кист печени существенно ниже, чем у пов-

пролиферации холангиоцитов. Более того, на

торно рожавших, у которых масштаб кистозных

стадии IV ПБЦ, когда достигается максимальная

изменений коррелирует с числом беременностей.

выраженность дуктопении, холангиоциты пре-

Морфологическая и функциональная оценка эпи-

кращают экспрессировать ERα. Одновременно

телия кист печени у пациентов с АДПБП позво-

наблюдается очень низкое отношение PCNA/

лила иммуногистохимически обнаружить экспрес-

Tunel. Это позволяет говорить о возможности

сию ER, рецептора гормона роста, IGF1, IGF1-R,

возникновения относительной пролиферативной

ядерного антигена клеточной пролиферации и

недостаточности

холангиоцитов

на

финальной

pAKT. Эпителиальные клетки кист пролифери-

дуктопенической стадии ПБЦ, сопровождаю-

ровали при экспозиции с 17β-экстрадиолом и

щейся исчезновением ERα. В дополнение к

IGF1. Антагонисты ER или IGF1-R ингибировали

этому следует отметить, что экспрессия ERα на

указанные пролиферативные эффекты. Эти дан-

холангиоцитах у пациентов с ПБЦ заметно ниже

ные позволяют рассматривать эпителий печеноч-

по сравнению с больными первичным склерози-

ных кист при АДПБП как ткань, реагирующую

рующим холангитом и алкогольным

циррозом.

на эстрогены и факторы роста

(IGF1, VEGF).

РЖГГК он-лайн – www.gastro-j.ru

13

Редакционная

4, 2010

Их взаимодействие может определять патофизио-

Перспективы в создании новых

логию поликистозного процесса.

лечебных технологий

Холангиокарцинома имеет плохой

прогноз

(5-летняя выживаемость 78% случаев и средняя

Данные о применении активаторов ядерных

продолжительность жизни с момента установле-

рецепторов в лечении заболеваний печени пока

ния диагноза около 7 мес). Экспрессия ERα и ERβ

ограничены, но число исследований в этой облас-

обнаруживается практически у всех пациентов с

ти возрастает. Вероятно, это клиническое поле

этой опухолью и отношение ERα/ERβ существен-

будет быстро расширяться по мере открытия

но выше, чем в нормальных пролиферирующих

новых агентов и осмысления данных, получаемых

холангиоцитах. Воздействие 17β-эстадиолом и

в эксперименте на животных. Перечень описы-

IGF1 на культуру опухолевых холангиоцитов

ваемых ядерных рецепторов растет из месяца в

повышает экспрессию ERα, фосфорилирование

месяц. В список ЯР, относительно которых пока

CRJ-ERKЅ и pAKT, но снижает экспрессию ERβ.

нет сведений о их возможной роли при заболе-

Недавно показано, что эстрогены стимулируют

ваниях печени, входят: печеночный Х рецептор

рост холангиокарциномы посредством индукции

(LXR), рецептор ретиноевой кислоты (RAR) и

синтеза и выхода VEGF из холангиоцитов холан-

рецептор витамина D (VDR). Имеются данные о

гиокарциномы (A. Mancino и соавт., 2008).

рецепторах активации пероксисомной пролифера-

Таким образом, можно сделать заключение, что

ции (PPARγ и PPARα), конститутивном андроста-

ER играют важную роль в регуляции функций

новом рецепторе (CAR), прегнановом Х рецепторе

холангиоцитов в процессе формирования и течения

(PXR) и фарнезоидном Х рецепторе (FXR).

различных холангиопатий у человека. Поэтому

Среди модификаторов ядерных рецепторов,

подходы к фармакологической регуляции дан-

участие которых наиболее изучено в патогенезе

ных рецепторов могут оказаться перспективным

заболеваний печени, выделяются агонисты PPARγ.

направлением в лечении этих заболеваний.

Их роли при неалкогольной жировой болезни

Первичные ЖК – холевая и хенодезокси-

печени придают сегодня большое значение. Три

-VESTI

холевая образуются в печени из холестерина,

из них.исследованыRU

в клинике: трозиглитазон,

конъюгируются с глицином или таурином, что

розиглитазон и пиоглитазон. Агонисты PPARγ

повышает их гидрофильность, и секретируются в

уменьшают доставку жирных кислот из жировой

желчь. В кишечнике обе кислоты под влиянием

ткани в печень, ускоряют β-окисление жирных

кишечной микрофлоры претерпевают 7α-гидрок

кислот, повышают уровень адипонектина, угне-

силирование и превращаются во вторичные ЖК

тают продукцию провоспалительных цитокинов

.M

и с определенной вероятностью активацию стел-

– соответственно литохолевую и дезоксихолевую.

В подвздошной кишке обе вторичные ЖК реаб-

латных клеток. Все эти эффекты могут оказывать

сорбируются и транспортируются в печень. ЖК

положительное влияние при различных заболева-

не следует рассматривать лишь в качестве про-

ниях печени, но в основном при НАЖБП.

стых катаболитов холестерина, в реальности они

Трозиглитазон снят в настоящее время с

выступают как истинные регуляторные молекулы

фармакологического рынка ввиду обнаруженной

со своими специфическими рецепторами.

гепатотоксичности. Розиглитазон у пациентов с

ЖК контролируют экспрессиюWWWгенов посред­

НАСГ снижал степень выраженности стеатоза,

ством фарнезоидного Х рецептора α (FXRα).

временно уменьшал активность АсАТ и АлАТ,

Этот рецептор первично экспрессируется в печени

но не оказывал положительного влияния на про-

и кишечнике и активируется ЖК. Он транс-

цесс фиброза. Среди побочных эффектов заре-

активирует ряд генов, вовлеченных в метабо-

гистрированы значимая прибавка в массе тела,

лизм холестерина и желчных кислот. Определено

возрастание риска развития инфаркта миокарда

несколько групп печеночных генов-мишеней для

и снижение костной массы. Пиоглитазон приво-

FXRα: первая группа снижает внутриклеточную

дил у пациентов с НАСГ к снижению активности

концентрацию ЖК посредством уменьшения их

трансаминаз, умеренному подавлению активности

синтеза и увеличения экспорта; вторая – опос-

лобулярного воспаления, однако, как и в случае

редует уровень сывороточных липопротеинов и

с розиглитазоном, больные прибавляли в среднем

снижает плазменные концентрации триглицери-

2,8 кг к своей массе тела по сравнению с потерей

дов. FXRα связывается в форме гетеродимера

0,6 кг у лиц, получавших плацебо.

вместе с ретиноидным Х рецептором α (RХRα)

К классу PPAR относится и PPARα, который

к участкам ДНК, называемым элементами ответа

ингибирует NF-kB, уменьшает миграцию Т-кле-

FXRα (FXRE). ЖК активируют также МАРК-

ток в область воспаления и тормозит продук-

зависимые пути регуляции посредством сопряжен-

цию провоспалительных цитокинов IL-1 и IL-6.

ного с G-белком мембранного рецептора TGR5.

Свойства агонистов PPARα присущи фибра-

Последний повышает внутриклеточный

уровень

там, включая безафибрат, гемфиброзил и фено-

АМР и тем самым ингибирует активацию STAT1

фибрат. Действие этих соединений изучалось

интерфероном I типа.

лишь в небольших и кратковременных испыта-

14

РЖГГК он-лайн – www.gastro-j.ru

4, 2010

Редакционная

ниях на основе оценки изменения ряда биохими-

агонистов FXR, в частности соединения 6ECDCA

ческих параметров.

(Int-747). Критериями оценки служат динами-

Исследование эффектов рецептора CAR про-

ка уровня щелочной фосфатазы, выраженности

водилось в эксперименте на мышах на модели

воспаления и фиброза (гиалуроновая кислота,

неалкогольного стеатогепатита,

индуцированного

пропептид коллагена III типа, тканевой ингибитор

рационом с дефицитом метахолина (K. Lindor,

матриксных протеиназ, С-реактивный белок, жир-

2009). В этом исследовании активатор CAR

ные кислоты, TNFα, TGFβ и др.).

дихлорпиридоксибензен индуцировал

окисление

Завершая этот раздел, следует отметить, что

жирных кислот одновременно с уменьшением

широкий диапазон одних и тех же генов, нередко

выраженности стеатоза, апоптоза и воспаления.

контролируемых разными ядерными рецептора-

Другой ядерный рецептор, PXR, тесно сопря-

ми, представляет существенную проблему при

жен с CAR. Представляет интерес то, что рифам-

выборе или создании специфических лигандов

пицин и урсодезоксихолевая кислота способны

ЯР. Последующие фундаментальные исследо-

активировать FXR и CAR и ослаблять поврежде-

вания в этом направлении, возможно, позволят

ния печени, вызываемые литохолевой кислотой.

идентифицировать эффективные лиганды ядер-

В клинических исследованиях рифампицин ока-

ных рецепторов, которые можно будет применять

зывал более заметное положительное действие в

в клинической практике для лечения заболеваний

отношении щелочной фосфатазы и билирубина у

печени, в том числе холестаза, гепатотоксического

пациентов с первичным билиарным циррозом.

синдрома, жирной печени наряду с патологией

Хенодезоксихолевая кислота относится к числу

метаболизма, включая сахарный диабет, дисли-

наиболее эффективных лигандов FXR. В настоя-

пидемию и атеросклероз. Более того, ядерные

щее время проводится клиническое исследование

рецепторы могут оказаться подходящей терапев-

с включением пациентов с ПБЦ, нацеленное на

тической мишенью при лечении вирусных гепати-

определение

эффективности

одного

из

новых

тов, фиброза, цирроза и рака печени.

.

RU

Список литературы

by inducing the expression and secretion of vascular

1. Alvaro D., Barbaro B., Franchitto A. et

al. Estrogens

endothelial growth factor // Dig. Liver

Dis. – 2009.

– Vol. 41, N 2. – P. 156–163.

and insulin-like growth factor 1 modulate neoplastic cell

10. Meng Z., Wang Y., Wang L. et

al. FXR

regulates

growth in human cholangiocarcinoma // Am. J. Pathol.

liver repair after CCl4-induced

toxic injury

// Mol.

– 2006. – Vol. 169, N 3. – P. 877–888.

M.S

-VESTIEndocrinol. – 2010. – Vol. 24. – P. 886–897.

2. Donthamsetty S., Bhave V.S.,

Mitra

et al.

11. Ramiиre C., Scholtиs C., Diaz O. et al. Transactivation

Nonalcoholic steatohepatitic (NASH) mice are protected

of the hepatitis B virus core promoter by the nuclear

from higher

hepatotoxicity of

acetaminophen.Mupon

receptor FXRalpha // J. Virol. – 2008. – Vol. 82, N 21.

induction of

PPARalpha with

clofibrate

//

Toxicol.

– P. 10832–10840.

Appl. Pharmacol. – 2008. – Vol. 230, N 3. – P. 327–

12. Scholtes C., Diaz O., Icard V. et al. Enhancement of

337.

genotype 1 hepatitis C virus replication

by

bile acids

3. Elfaki D.A.H., Bjornsson E.,

Lindor K.D. Nuclear

through FXR // J. Hepatol. – 2008. – Vol. 48, N 2.

receptors and liver disease – current understanding and

– P. 192–199.

new therapeutic implications //

Aliment. Pharmacol.

13. Teng S., Piquette-Miller M.

Hepatoprotective role

Ther. – 2009. – Vol. 30, N 8. – P.WWW816–825.

of PXR activation and MRP3

in

cholic

acid-induced

4. Eloranta J.J., Kullak-Ublick G.A. The role of FXR in

cholestasis // Br. J. Pharmacol. –

2007.

–

Vol. 151,

disorders of bile acid homeostasis // Physiology. – 2008.

N 3. – P. 367–376.

– Vol. 23. – P. 286–295.

14. Uppal H., Saini S.P., Moschetta A. et al. Activation

5. Gui C., Miao Y., Thompson L. et al. Effect

of PXR

of LXRs prevents bile acid toxicity and

cholestasis in

ligands on transport mediated by human OATP1B1 and

female mice // Hepatology. – 2007. – Vol. 45, N 2.

OATP1B3 // Eur. J. Pharmacol. – 2008. – Vol. 584.

– P. 422–432.

– P. 57–65.

15. Yang F., Huang X., Yi T. et al. Spontaneous development

6. Hubbert M.L., Zhang Y., Lee F.Y., Edwards P.A.

of liver tumors in the absence of the bile acid receptor

Regulation of hepatic insig-2 by the farnesoid X receptor

farnesoid X receptor // Cancer Res. – 2007. – Vol. 67.

// Mol. Endocrinol. – 2007. – Vol. 21. – P. 1359–

– P. 863–867.

1369.

16. Yusuke Inoue, Ai-Ming Yu,

Sun

Hee

Yim et al.

7. Klein K.,

Kullak-Ublick G.A.,

Wagner M. et al.

Regulation of bile acid biosynthesis by hepatocyte nuclear

Hepatocyte

nuclear factor-4α and

bile acids

regulate

factor 4α // J. Lipid Res. – 2006. – Vol. 47. – P. 215–

human concentrative nucleoside

transporter-1 gene

227.

expression

// J. Physiol. Gastrointest. Liver

Physiol.

17. Zhang J., Huang W., Qatanani M. et al. The constitutive

– 2009. – Vol. 296. – P. 936–947.

androstane receptor and pregnane X receptor function

8. Lefebvre P.,

Cariou B., Lien

F. et al. Role

of bile

coordinately to prevent bile acid-induced hepatotoxicity

acids and bile acid receptors in metabolic regulation //

// J. Biol. Chem. – 2004. – Vol. 279,

N 47. –

Physiol. Rev. – 2009. – Vol. 89. – P. 147–191.

P. 49517–49522.

РЖГГК он-лайн – www.gastro-j.ru

15

Оригинальные исследования

4, 2010

(1Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования

«Хакасский государственный университет им. Н.Ф. Катанова», г. Абакан,

2Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования

«Сибирский государственный медицинский университет Росздрава», г. Томск,

3Государственное учреждение «Научно-исследовательский институт медицинских проблем Севера»

Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, г. Красноярск)

RU

.

Molecular genetic factors influencing outcomes of Helicobacter pylori

infection at Khakasia republic inhabitants

Ye.S. Ageyeva, O.V. Shtygasheva, N.V. Ryazantseva, V.V. Tsukanov

Цель исследования. Выявить молекуляр-

VESTI

Aim of investigation. To detect molecular-genetic

но-генетические особенности Helicobacter pylori и

features of Helicobacterpyloriand polymorphism of main

полиморфизма генов основных иммунорегулятор.M-

immunoregulatory interleukins genes at Khakases, to

ных интрелейкинов у хакасов, оценить их влияние на

estimate their effect on outcomes of infection pathogen.

исход инфицирования патогеном.

Material and methods. Investigation was carried

Материал и методы. Исследование проводили

out at native population of Khakasia with H. pylori-

при H. pylori-ассоциированных заболеваниях: язвен-

associated diseases: peptic ulcer and chronic gastritis.

ной болезни и хроническом гастрите у коренных

Prevalence of interleukins IL1β, IL1Ra, IL8 and CYP2C19

жителей Хакасии. РаспространенностьWWWполимор-

gene polymorphism was studied by restriction analysis,

физма генов интерлейкинов ИЛ1β, ИЛ1Ra, ИЛ8,

VacA +– and CagA +– subtypes of H. pylori – by poly-

CYP2C19 изучали методом рестрикционного анали-

merase chain reaction.

за, субтипов VacA+– и CagA+– H. pylori – с помощью

Results. Peptic ulcer was associated to S1S2 Vac A

полимеразной цепной реакции.

subtypes at Caucasians, while at Khakases – to Cag А

16

РЖГГК он-лайн – www.gastro-j.ru

4, 2010

Оригинальные исследования

ри

рассмотрении патогенеза язвенной

ностью ее с язвенной болезнью у коренных

болезни (ЯБ) большое внимание уделяется

и пришлых.RUжителей Хакасии свидетельствует

Пформированию локальных очагов повыше-

о наличии популяционно-наследуемых особенно­

ния кислотности в местах скопления возбудителя

стей, оказывающих влияние на характер взаимо-

Helicobacter pylori (факторы агрессии) и угне-

действия между микроорганизмом и организмом

тению защиты (нарушение непрерывности слоя

хозяина. В связи с этим интересным является

слизи, изолирующего эпителий от прямого контак

исследование молекулярно-генетических механиз-

-VESTI

та с агрессивным содержимым желудка, щелоч-

мов, реализация которых детерминирует исход

ных компонентов секрета эпителиальных клеток,

инфицирования H. pylori у хакасов.

.M

Целью работы являлось выявление молекуляр-

изменение регенераторной активности последних)

[3, 6, 7]. Несмотря на общность патогенетичес-

но-генетических особенностей патогена и организ-

ких механизмов, как сама заболеваемость, так и

ма человека, детерминирующих исход инфициро-

роль конкретных этиопатогенетических факторов

вания H. pylori у хакасов.

имеют выраженные популяционные различия.

При этом особое значение придаетсяWWWнаследуемым

Материал и методы исследования

иммунным факторам.

Известно, что VacA+ и CagA+ штаммы H. pylori

Объект исследования – больные язвенной

отличаются спектром гисто- и цитотоксических

болезнью. Группу сравнения составили лица,

эффектов,

что

обусловливает

их

патогенность

страдающие хроническим гастритом (ХГ).

и способность

к длительной

персистенции [4].

Обследованный контингент представлен двумя

В литературе описаны феномены

специфичности

популяциями: хакасы (монголоиды, корен-

VacA+иCagA+изолятовH.pyloriиихпривязанность

ные жители) и европеоиды (пришлые жители)

к разным популяциям человека [5, 10, 13].

Республики Хакасия. Средний возраст монголои-

Аналогичное явление было обнаружено при

дов составил 42,9 года, европеоидов – 43,6 года.

проведении

эпидемиологического

исследования

В исследовании приняло участие сопоставимое

распространенности ЯБ у коренных и пришлых

количество мужчин и женщин.

жителей Республики Хакасия. При высокой

H. pylori диагностировали при помощи четы-

инфицированности

H. pylori

(95,4% среди

рех методов: морфологического, быстрого уреаз-

европеоидов и 95,2% среди хакасов) были выявлены

ного, серологического (уровень специфических

выраженные различия показателей заболеваемости

IgG к H. pylori в сыворотке крови определяли

ЯБ среди двух популяций, проживающих на

методом твердофазного иммуноферментного ана-

территории Хакасии (8,1% у европеоидов и 4,5%

лиза) и полимеразной цепной реакции (ПЦР).

у хакасов) [2].

ДНК H. pylori выделяли из замороженных

В целом установленная закономерность между

биоптатов слизистой оболочки желудка с исполь-

распространенностью

H. pylori

и

ассоциирован-

зованием протеинкиназы К (Хеликопол «Литех»,

РЖГГК он-лайн – www.gastro-j.ru

17

4, 2010

Оригинальные исследования

Таблица 2

Распределение частот генотипов и аллелей гена –251 Т>А ИЛ-8 у хакасов, %

Здоровые

Больные

Показатель

Хронический гастрит

Язвенная болезнь

доноры (n=123)

(n=63)

(n=25)

Генотипы ТТ

42,8

45,4

44,8

Генотипы ТА

44,4

43,7

24,1*,**

Генотипы АА

12,8

10,9

31,0*,**,1

Аллель Т

65,1

67,2

56,9

Аллель А

34,9

32,8

43,1*,**

ной болезнью – с помощью критерия отношения

методики ПЦР. У пришлых жителей с язвенными

шансов (OR – odd ratio).

дефектами и без них Cag А наблюдался с одина-

ковой частотой.

Результаты исследования

Также интересные данные были получены и

для субтипов Vac A. S1-штаммы H. pylori опреде-

и их обсуждение

лялись у 20% пришлых лиц с гастритами и у 15%

Анализ распределения H. pylori в зависимости

пациентов с ЯБ (χ2=0,1; р>0,5). S1S2-штаммы

от их молекулярно-генетических особенностей

выявлены у 85% пришлых лиц с ЯБ и только у

среди коренных и пришлых показал гетероген-

40% пациентов с ХГ (χ2=6,4; р<0,05). В этой же

ность штаммов в обследованных когортах больных

популяции M1-штаммы H. pylori фиксировались

обеих популяций. Vac A-штаммы H. pylori наблю-

у 60% лиц.RUс гастритом и у 25% пациентов с ЯБ

дались у всех обследованных пациентов. Вместе с

(χ2=3,5; р>0,05), M1M2-штаммы H. pylori – соот-

тем субтипы Vac A распределялись среди евро-

ветственно у 10 и 40% (χ2=2,9; р>0,1). В пределах

пеоидов и монголоидов неодинаково. S2-субтипы

данного исследования нам не удалось обнаружить

Vac A отмечались у 14,3% европеоидов и у 39,1%

зависимости между распределением Ice А и Bab A

хакасов (χ2=4,1; р<0,05), S1S2-субтипы – у 70%

H. pylori и язвенной болезнью.

-VESTI

пришлых жителей и у 42,9% хакасов (χ2=3,8;

В популяциях Хакасии зарегистрирована ассо-

р<0,05). M1-субтип Vac A регистрировался у

циация инфекции с ЯБ. Установлено, что у

.M

европеоидов с ЯБ связаны S1S2-субтипы Vac A-

36,6% европеоидов и у 9,5% монголоидов (χ2=4,8;

р<0,05), M2-субтип – у 33,3% европеоидов и

штаммов H. pylori, а у хакасов – Cag А-штаммы

у 61,9% монголоидов (χ2=4,1; р<0,05). Cag А-

H. pylori.

штаммы H. pylori выявлены у 93,3%, а Ice A – у

Известно, что наиболее высокий уровень ИЛ-8

73,3% пришлых жителей. У коренного населения

определяется при инфицировании CagA-штамма-

эти показатели составляли соответственноWWW57,1%

ми H. pylori [8, 11, 12, 14]. Одним из факторов,

(р<0,01) и 28,6% (р<0,01). Эти данные были

играющих важную роль в регуляции H. pylori-

подтверждены при обследовании серологическим

ассоциированного воспаления, является ИЛ-8,

методом. Cag А-штаммы H. pylori обнаружи-

необходимый для дифференцировки и рекрути-

лись у 60% европеоидов и у 36,5% монголоидов

рования клеток-эффекторов в очаг воспаления [1,

(χ2=9,0; р<0,01). Bab A фиксировался у 17,9%

15]. Ген, кодирующий ИЛ-8, имеет несколько

европеоидов и у 21,7% хакасов.

аллельных вариантов, по-разному влияющих на

Результаты исследования связи между генети-

экспрессию гена. Наиболее часто встречающимся

ческими маркерами H. pylori и язвенной болез-

среди коренного населения как в группе боль-

нью также имели выраженные различия. При

ных, так и в группе здоровых является ТТ –251

использовании методики ПЦР среди пришлых

ИЛ-8. Нами при оценке распределения частот

жителей Cag А отмечался у 80%, Ice А – у 70%

генотипов ТА и АА –251 ИЛ-8 во всех обследо-

лиц с гастритом, а у пациентов с ЯБ эти показа-

ванных группах были выявлены различия встре-

тели были равны 100% (р>0,4) и 75% (р>0,8).

чаемости аллелей и генотипов (табл. 2). Так,

У хакасов с гастритом Cag А регистрировался

частота встречаемости высокоэкспрессирующего

в 50%, Ice А – в 27,8% случаев, а у пациентов

генотипа АА –251 ИЛ-8 у больных ЯБ – корен-

с ЯБ – соответственно в 100% (р>0,1) и 33,3%

ных жителей Хакасии была выше по сравнению

(р>0,6). При использовании серологической мето-

с таковой в группе ХГ и в контроле (р<0,05). В

дики Cag А определялся у 47,5% хакасов с ЯБ и

этой связи интересным, на наш взгляд, является

у 25% лиц с ХГ (χ2=4,4; р<0,05), т. е. сохраня-

выявленная взаимосвязь между CagA+ гено-

лась зависимость, полученная при применении

типом H. pylori и ассоциацией генотипа АА и

РЖГГК он-лайн – www.gastro-j.ru

19

Оригинальные исследования

4, 2010

Таблица 3

Распределение частот генотипов и аллелей гена C +3953 T ИЛ1β у хакасов, %

Здоровые

Больные

Показатель

доноры (n=123)

Хронический

Язвенная

гастрит (n=63)

болезнь (n=25)

Генотипы СС

73,2

63,5*

84,0*,**

Генотипы СТ

25,2

36,5*

16,0*,**

Генотипы ТТ

1,6

0

0

Аллель С

85,8

81,7

92,0*,**

Аллель Т

14,2

18,3

8,0*,**

риском развития ЯБ у хакасов (OR=3,1, 95% CI

хакасов, был вариант R4/R4 (75,4% – при ХГ,

1,1–8,8).

76% – при ЯБ и 79,6% – у здоровых доноров).

Другим фактором, замыкающим на себе клю-

Второй по частоте встречаемости – R3/R4,

чевые звенья патогенеза H. pylori-персистен-

доля которого у больных

ЯБ составила 20,0%,

ции в слизистой оболочке

желудка (воспале-

у пациентов с ХГ – 14,0%, в контрольной груп-

ние, апоптоз и гипохлоргидрия), является ИЛ1β.

пе – 10,7%, (р>0,05). Среди коренных жителей

Выраженность эффектов интерлейкина зависит

редкими генотипами были гомозиготы R3/R3 и

от уровня экспрессии как самого продукта, так и

R2/R2, а также гетерозиготы R2/R4 ИЛ1Ra.

антагониста рецептора интерлейкина, а значит, и

Установлено, что для хакасов характерна низкая

от полиморфизма генов.

частота аллеля R2 (2,6% – при ХГ, 2,9% – в конт-

В результате проведенного исследования выяв-

роле) и, наоборот, высокая доля R4 (83,4% – при

-VESTI

лено, что у хакасов имеет место увеличение час-

ХГ, 86,0%.RU– при ЯБ, 85,0% – в контроле) –

тоты встречаемости аллеля С +3953 гена ИЛ1β.

табл. 4.

Наиболее распространенным

генотипом были

Выявленные нами особенности распределе-

гомозиготы СС +3953 ИЛ1β. У больных ЯБ коли-

ния аллельных вариантов гена ИЛ1β у хакасов

чество гомозигот СС было достоверно выше, чем

показали, что наиболее распространены среди

у пациентов с ХГ и здоровых доноров (84,0, 63,5

них варианты СС +3953 ИЛ1β (84,0%) и R4/R4

.M

ИЛ1Ra (76%); они не характеризуются высоким

и 73,2% соответственно, р<0,05). Гетерозиготы

СТ встречались чаще у пациентов с ХГ (36,5%)

уровнем экспрессии. Вероятно, эта особенность

по сравнению с больными ЯБ (16,0%) и здоровы-

обеспечивает мягкий провоспалительный эффект,

ми донорами (25,2%), р<0,05. Гомозиготы ТТ в

а следовательно, и низкую по сравнению с евро-

нашем исследовании являлись редким генотипом

пеоидами заболеваемость ЯБ. В то же время

и были выявлены только у здоровых доноров

ИЛ1β является одним из самых сильных среди

(1,6%) – табл. 3.

известных ингибиторов кислотной продукции, что

При изучении полиморфизмаWWWгена ИЛ1Rа

достигается за счет цитопатического воздействия

обнаружено, что основным генотипом, который

на клетки желудка, в результате атрофии сли-

доминировал во всех группах обследования у

зистой оболочки. Наиболее выраженный эффект

Таблица 4

Распределение частот генотипов и аллелей гена VNTR ИЛ1Rа у хакасов, %

Здоровые доноры

Больные

Показатель

Хронический

Язвенная

(n=123)

гастрит (n=63)

болезнь (n=25)

Генотипы 2/2

2,9

1,7

0

Генотипы 2/4

0

1,7

0

Генотипы 3/3

6,8

7,0

4,0

Генотипы 3/4

10,7

14,0

20,0*,**

Генотипы 4/4

79,6

75,4

76,0

Аллель 2

2,9

2,6

0

Аллель 3

12,1

14,0

14,0

Аллель 4

85,0

83,4

86,0

20

РЖГГК он-лайн – www.gastro-j.ru