6 курс / Гастроэнтерология / Российский_журнал_гастроэнтерологии,_гепатологии,_колопроктологии (34)

ми показателями позволяет использовать их значения для оценки активности заболевания, эффективности лечения и жизненного прогноза. Уровень

цитокина.

Список литературы

1.Голованова Е.В., Ильченко Л.Ю., Царегородцева Т.М. и др. Исследование профиля цитокинов при первичном билиарном циррозе // Экспер. и клин. гастроэнтерол. – 2003. – № 3. – С. 133.

2.Ивашкин В.Т., Буеверов А.О. Аутоиммунные заболевания печени в практике клинициста. – М.: М- Вести, 2001. – 102 с.

3.Лейшнер У. Аутоиммунные заболевания печени и перекрестный синдром. – М.: Анахарсис, 2005. – 174 с.

4.Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д.

Иммунология. – М.: Мир, 2000. – 432 с.

5.Хаитов Р.М., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология. –

IFNγ служит дополнительным критерием активности воспалительного процесса в печени, что можно учитывать при невозможности проведения биопсии

М.: Медицина, 2000. – 430 с.

6.Царегородцева Т.М., Серова Т.И.

Цитокины в гастроэнтерологии. – М.: Анахарсис, 2003. – 94 с.

7.Царегородцева Т.М. и др. Прогностическое значение интерлейкинов при хронических заболеваниях печени // Рос. гастроэнтерол. журн. – 2001. – № 2. – С. 156–157.

8.Шульпекова Ю.О. Цитокиновый профиль сыворотки больных хроническими вирусным гепатитом С: Дис. … канд. мед. наук. – М., 2001. – 170 с.

9.Chazouilleres O., Wendum D., Serfaty C. et al. Primary biliary cirrhosis – autoimmune hepatitis overlap syndrome: clinical features and response to therapy // J. Hepatol. – 1998. – Vol. 28. – P. 296–301.

10.Czaja A.J., Cookson S., Constantini P.K. et al. Cytokine

печени у пациентов с ПС, так как индекс гистологической активности имеет достоверную прямую связь с уровнем сывороточной концентрации данного

polymorphism’s associated with clinical features and treatment outcome in type 1 autoimmune hepatitis // Gastroenterology. – 1999. – Vol. 117. – P. 645–652.

11.Manns M.P. Autoimmune hepatitis

//Schiff’s diseases of the liver. 8th ed. – Lippincott-Raven, 1999. – P. 919–935.

12.Parziale A., Durazzo M., Solerio E. et al. Inheritance of low IL-10 and TNF-alpha producing genotypes is associated with a higher risk of liver failure in primary biliary cirrhosis

//J. Hepatol. – 2002. – Vol. 36 (suppl. 1). – P. 153.

13.Tanaka A., Quaranta S., Mattalia A. et al. The tumor necrosis factor-alpha promoter correlates with progression of primary biliary cirrhosis // J. Hepatol. – 1999. – Vol. 30. – P. 826–829.

Цитокины играют важную роль в развитии и течении различных заболева-

ний пищеварительной системы, в том числе ЯБЖ и ЯБДПК [1, 6, 8, 9, 22]. Представители семейства интерлейкина-1, являющиеся одними из широко экспрессирующихся цитокинов же- лудочно-кишечного тракта (ЖКТ), включают три структурно и функционально родственных белка: интерлейкин-1α, интерлейкин-1β и антагонист рецептора интерлейкина-1 [11, 12.]. Главным объектом для изучения патогенеза эрозивноязвенных поражений различных отделов ЖКТ как в зарубежных, так и в отечественных

исследованиях является IL-1β, представляющий собой многофункциональный цитокин с выраженным плейотропным (множественным) действием в различных тканях и играющий ключевую роль в развитии и регуляции неспецифической защиты в ответ на повреждающее действие множества патогенных факторов [9, 10, 12, 14–16, 21, 22]. В настоящее время IL-1β рассматривается в качестве одного из основных инициаторов местных воспалительных, иммунных и репарационных процессов в слизистой оболочке желудка и двенадцатиперстной кишки при язвенной болезни. Кроме того, он не только под-

держивает целостность эпителия различных отделов ЖКТ, но и регулирует двигательную и кислото-продуцирующую активность желудка – важные составляющие патогенеза эро- зивно-язвенных поражений гастродуоденальной зоны. [11, 12, 14, 17]. Существенным обстоятельством для понимания механизмов ульцерогенеза является тот факт, что при ЯБЖ и ЯБДПК обнаружено значительное повышение в крови содержания IL-1β [1, 3, 5, 8], молеку- лярно-генетические механизмы которого по-прежнему остаются не изученными. Интересно и то, что в промоторной области гена IL-1β выявлена точечная мута-

ция -511C/T, которая способствует усиленной продукции данного цитокина [10, 13, 14, 17]. Вследствие этого нам представлялось важным изучить связь данного полиморфизма с предрасположенностью к ЯБЖ и ЯБДПК, а также оценить его влияние на клинические проявления и течение заболевания.

Материал и методы исследования

Материалом для исследования послужили выборки, включающие 224 больных ЯБДПК и 153 больных ЯБЖ, находившихся на лечении в гастроэнтерологическом отделении областной клинической больницы г. Курска с 2003 по 2004 г. Контрольную группу составили 226 практически здоровых добровольцев. Все обследуемые были русской национальности и уроженцами Центрально-Чер- ноземного региона России. Диагноз заболевания подтверждался фиброгастродуоденоскопией (ФГДС) при поступлении в стационар. Язвенная болезнь характеризовалась хроническим рецидивирующим течением с длительностью заболевания не менее 5 лет. По полу и возрасту больные не отличались от контрольной группы (р>0,05).

У всех пациентов проводился забор венозной крови для генотипирования полиморфизма -511C/T гена интерлейкина-1β. Геномную ДНК выделяли стандартным методом фенольно-хло- роформной экстракции [4]. Амплификация интересуемого участка гена IL-1β осуществлялась методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) согласно протоколу, описанному C. Ferri и соавт. [13]. После завершения ПЦР к 10 мкл амплификационной смеси добавляли 5U эндонуклеазы Ama87I («Сибэнзим», Россия) и инкубировали в течение ночи при 37 °С. Продукты гидролиза фракционировали в 2% агарозном геле с этидиумбромидом и визуализировали

305 bp

190 bp

115 bp

Электрофоретическое разделение продуктов ПЦР гена IL 1β в 2% агароз ном геле. Слева обозначены размеры фрагментов ДНК гена (в парах нук леотидов). В нижней части геля цифрами обозначены генотипы: C/C – два фрагмента размерами 190 и 115 п.н.; T/T – единственный фрагмент размером 305 п.н.; C/T – все три фрагмента размерами 305, 190 и 115 п.н.

значимости Т аллеля промоторного полиморфизма гена IL-1β в отношении развития ЯБДПК и ЯБЖ в изучаемой популяции.

В рамках исследования определяли влияние -511C/T полиморфизма гена IL-1β на течение и особенности клинических проявлений язвенной болезни. Были изучены следующие показатели: возраст манифестации болезни, степень тяжести (без учета латентных форм), частота обострений (раз в год) и степень прогрессирования заболевания (рассчитывали как отношение частоты обострений в первые 3–5 лет болезни к частоте обострений в последние 3–5 лет). Кроме того, оценивали связь изучаемого ДНК-по- лиморфизма с осложненным характером течения язвенной болезни (кровотечение, перфорация, стеноз привратника). Из-за незначительного числа случаев язвенной болезни, осложнившейся пенетрацией (n=7), не удалось провести статистические расчеты по этому показателю. Все анализируемые показатели, характеризующие клинические проявления и течение заболевания, имели статистически значимое отклонение от закона нормального распределения (р<0,05). Поэтому для оценки влияния изучаемого ДНК-полиморфизма гена IL-1β на клинические проявления болезни использовали однофакторный непараметрический дисперсионный анализ по Крас- келу–Уоллису [7].

Таблица 2

Связь полиморфизма 511С/T гена IL 1β с особенностями течения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки

Таблица 3

Связь промоторного полиморфизма 511 С/T гена IL 1β с некоторыми клиническими проявлениями язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки

кислоты, лейкотриенов, тромбоксанов и простагландинов, вовлеченных в регуляцию процессов болевого восприятия. У больных ЯБЖ фенотипическое проявление экспрессии гена IL-1β было связано с развитием гипертрофического гастрита.

Согласно полученным нами данным, при ЯБЖ полиморфизм -511С/T гена IL-1β может рассматриваться как потенциальный генетический маркер развития желудочных кровотечений. Эта особенность, несомненно, имеет огромное клиническое значение для прогнозирования осложненного течения заболевания и определения тактики лечебнопрофилактических мероприятий. Промоторный полиморфизм гена IL-1β у больных ЯБДПК ассоциировался также с поражением печени, тогда как у больных ЯБЖ он сочетался с патологией желчевыводящих путей. Вероятно, механизмы неспецифической защиты, связанные с усилением выработки IL-1β, не ограничиваются слизистой оболочкой гастродуоденальной зоны и проявляются определенными патологическими изменениями в смежных органах, в частности, гепатобилиарной системы.

Суммируя изложенное, следует отметить, что у русских Цент- рально-Черноземного региона России промоторный полиморфизм гена IL-1β является частью генетической компоненты предрасположенности как к ЯБЖ, так и к ЯБДПК. Выявленные ассоциации, о которых шла речь в статье, были нами впервые обнаружены среди европеоидных популяций. Как показали результаты проведенного исследования, установленная связь имеет этническую специфичность, характерную, по крайней мере, для русских коренных жителей Центрального Черноземья, что может использоваться не только для доклинического прогнозирования развития и течения заболевания, но и для разработки методов его патогенетической терапии в данном регионе.

Список литературы

1.Дубцова Е.А., Соколова Г.Н., Трубицина И.Е. Содержание цитокинов при часто рецидивирующей форме язвенной болезни двенадцатиперстной кишки // Мед. иммунол. – 2002. – Т. 4, № 2. –

С.148.

2.Казаков А.А., Анциферова М.А.

Влияние IL-1 на функциональную активность фагоцитов // Мед. иммунол. – 2002. – Т. 4, № 2. –

С.122–123.

3.Коломиец А.Н., Волчек И.А., Логинов А.Ф., Калинин А.В. Особенности цитокинового профиля у H. pylori-положительных больных язвенной болезнью желудка с явлением кишечной метаплазии слизистой желудка и без нее // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. – 2002. –

Т. 12, № 5. – С. 28.

4.Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Д. Методы генной инженерии. Молекулярное клонирование. – М.: Мир, 1984. – 480 с.

5.Москалев А.В., Осипова О.Н., Панова Т.Ф. Продукция ИЛ-1β и ФНО α у больных хроническими эрозиями желудка // Иммунология. – 1998. – № 6. – С. 32.

6.Павленко В.В. Интерлейкин 1β и регенераторная активность слизистой оболочки толстого кишечника при язвенном колите // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол. – 2002. – Т. 12, № 5. – С. 58.

7.Реброва О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA. – М.: Медиа Сфера, 2003. – 312 с.

8.Соколова Г.Н., Царегородцева Т.М., Зотина М.М., Дубцова Е.А. Ин-

терлейкины при язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки // Рос. гастроэнтерология. – 2001. – № 2. – С. 147–148.

9.Царегородцева Т.М., Серова Т.И.

Цитокины в гастроэнтерологии. – М.: Анахарсис, 2003. – 96 с.

10.Chang Y.T., Wu M.S., Shun C.T. et. al. Association of polymorphism’s of interleukin-1 beta gene and Helicobacter pylori infection with the risk of gastric ulcer // Hepatogastroenterology. – 2002. – Vol. 49, N 47. – P. 1474–1476.

11.Dinarello C., Wolff S. The role of interleukin-1 in disease // N. Engl. J. Med. – 1993. – Vol. 328, N 2. – P. 106–113.

12.El-Omar E.M. The importance of interleukin 1β in Helicobacter pylori associated disease // Gut. – 2001. – Vol. 48. –P.743–747.

13.Ferri C., Sciacca F.L, Grimaldi L.M.E. et al. Lack of association between IL-1α and IL-1β promoter polymorphism’s and multiple sclerosis // J. Neurol. Neurosurg. Psychiatry. – 2000. – Vol. 69. – P. 564–565.

14.Furuta T., El-Omar E.M., Xiao F. et al. Interleukin 1 beta polymorphism’s increase risk of hypochlorhydria and atrophic gastritis and reduce risk of duodenal ulcer recurrence in Japan // Gastroenterology. – 2002. – Vol. 123, N 1. – P. 92–105.

15.Garcia-Gonzalez M.A., Lanas A., Santolaria S. et al. The polymorphic IL-1β and IL-1RN genes in the aetiopathogenesis of peptic ulcer // Clin. Exp. Immunol. – 2001. – Vol. 125, N 3. – P. 368.

16.Garcia-Gonzalez M.A., Lanas A., Savelkoul P.H. et al. Association of interleukin 1 gene family polymorphism’s with duodenal ulcer

disease // Clin. Exp. Immunol. – 2003. – Vol. 134, N 3. –

P.525–531.

17.Huang Z., Li T., Yu J.R., Ma D.L. The protective effect of IL-1 beta on stress-induced gastric mucosal damage in rat // Sheng Li Hsueh Pao. – 1995. – Vol. 47, N 4.

– P. 313–319.

18.Hutyrova B., Pantelidis P., Drabek J. et al. Interleukin-1 gene cluster polymorphism’s in sarcoidosis and idiopathic pulmonary fibrosis // Am. J. Respir. Crit. Care Med. – 2002. – Vol. 165, N 2. –

P.148–151.

19.Hwang I.R., Kodama T., Kikuchi

S.et al. Effect of interleukin 1 polymorphism’s on gastric mucosal interleukin 1 beta production in

Helicobacter pylori infection // Gastroenterology. – 2002. – Vol. 123, N 6. – P. 1793–1803.

20.Serrano M.T., Lanas A.I., Lorente

S.et al. Cytokine effects on pepsinogen secretion from human peptic cells // Gut. – 1997. – Vol. 40. – P. 42–48.

21.Takagi A., Deguchi R., Kobayashi K., Miwa T. Cytokine expressions and H. pylori-associated gastric mucosal lesion // Keio J. Med. – 2002. – Vol. 51 (suppl. 2). –

P.51–52.

22.Takahashi S., Kobayashi N., Okabe S. Regulation by endogenous interleukin-1 of mRNA expression of healing-related factors in gastric ulcers in rats // J. Pharmacol. Exp. Ther. – 1999. – Vol. 291, N 2. – P. 634–641.

23.Watanabe T., Arakawa T., Fukuda T. et. al. Role of neutrophils in a rat model of gastric ulcer recurrence caused by inter- leukin-1 beta // Am. J. Pathol. – Vol. 150. – P. 971–979.

больных, поэтому важным представляется анализ распространенности и механизмов развития НПВП-ассоциированных гастропатий при ОА.

В современных концепциях патогенеза эрозивно-язвенных поражений гастродуоденальной области, в том числе индуцированных НПВП, большое значение придают структурным изменениям в диффузной эндокринной системе (ДЭС) пищеварительного тракта [12]. Оксид азота, продуцируемый конститутивными NO-синтазами слизистой оболочки желудка, обладает широким спектром биологических эффектов, влияя на желу-

вали аденозиндифосфат в конечной концентрации 2,5 мкМ). Активность антитромбина III определяли методом R. Marbet, A. Winterstein (1959), модифицированным Ю.Л. Кацадзе и М.А. Котовщиковой [6], фибринолитическую активность плазмы крови – методом T. Astrup, S. Mulertz [13]. Функциональные (антитромбогенные) свойства сосудистой стенки оценивали по методу В.П. Балуды и соавт. [2]. Для статистической обработки результатов исследования применяли пакет программ «Statistica» с использованием критериев достоверности Стьюдента и Манна–Уитни. Исследование одобрено этическим комитетом Саратовского медицинского университета.

Результаты

исследования и их обсуждение

Результаты анкетирования 300 пациентов с ОА приведены в табл. 1. У 216 (72%) из них, принимавших неселективный НПВП, выявлены реакции со стороны ЖКТ: боль в эпигастрии (57,3%), изжога (42,7%), тошнота (35,7%), симптомы кишечной диспепсии (22%). НПВП-гастропатия чаще всего (72%) развивалась в течение первого года лечения, у 24% имела рецидивирующее течение. Более 50% больных по поводу диспепсии к врачу не обращались, но самостоятельно корригировали диету (37,3%) или эпизодически принимали невсасывающиеся антациды (31%). В трети случаев опрошенные не связывали появление симптомов с приемом НПВП и не были предупреждены врачом о такой возможности.

По результатам ЭГДС, проведенной на первом этапе исследований, у 95 (31,7%) пациентов, принимавших неселективный НПВП, выявлены эрозивно-язвенные поражения желудка и двенадцатиперстной кишки. Клинические проявле-

зистой оболочки желудка была связана с экспансией H. pylori. Достоверных различий по частоте обнаружения инфекции у пациентов с ОА, не получавших систематически НПВП (70%), принимавших диклофенак без развития НПВП-гастропатии (76,7%) и с НПВП-гастропатией (75,8%), выявлено не было. Полученные результаты согласуются с данными C.J. Hawkey и соавт. (2000) и подтверждают известное положение, что H. pylori и НПВП – независимые факторы риска ульцерации гастродуоденальной зоны [15, 18].

В ходе иммуногистохимических и морфометрических исследований установлено, что НПВП-гастропатия развивалась только у больных ОА, имеющих повышенную количественную плотность эпителиоцитов желудка, иммунопозитивных к эндоте- лину-1 и NO-синтазе (рис. 1 и 2). В то же время, у больных ОА, принимавших неселективный НПВП, но не имевших гастропатии, морфометрические показатели изучаемых компонентов ДЭС не отличались от соответствующих значений в группе пациентов с ОА, не принимавших систематически НПВП (табл. 3).

У пациентов с ОА и НПВПгастропатией отмечена существенно более низкая антиагрегационная, антикоагулянтная и фибринолитическая активность эндотелия сосудов, чем в контрольной группе и у 30 больных с ОА, принимавших неселективный НПВП без развития НПВП-гастропатии (табл. 4). У пациентов с НПВП-ассоцииро- ванной гастропатией способность сосудистой стенки синтезировать и освобождать вещества, обеспечивающие нетромбогенность эндотелия, истощается при рецидивировании эрозивноязвенного процесса в гастродуоденальной области. Об этом свидетельствует обратная корреляционная связь между индексами антиагрегационной, антикоагулянтной, фибринолитической активности сосудистой