Задание 23. Определение содержания аскорбиновой кислоты в растениях

Оборудование и реактивы: микробюретки с градуировкой на 0,01 мл, ступки фарфоровые, колбы мерные на 100 мл, колбы конические на 50 мл, воронки, фильтры, речной песок; 1%-ная HСl, аскорбиновая кислота кристаллическая, йодистый калий кристаллический, 1%-ный раствор крахмала, 0,001Н раствор йодата калия, 0,001Н раствор 2,6-дихлор­фенолин­дофенола.

Витамины – это низкомолекулярные органические соединения разнообразной химической природы, обладающие высокой физиологической активностью и принимающие широкое участие в процессах обмена веществ живых организмов.

Витамины тесно связаны с ферментами, и большинство из них входит в состав простетических групп двухкомпонентных ферментов. Растения способны самостоятельно синтезировать все необходимые для них витамины, а человек и животные не обладают такой способностью. Поэтому в пище человека и в корме животных обязательно должны содержаться все необходимые для них витамины в достаточных количествах. При недостатке или отсутствии в пище или корме какого-либо витамина развиваются тяжелые заболевания – цинга, рахит, полиневрит, пеллагра и др.

Определение содержания витаминов в растениях необходимо для оценки их пищевой и кормовой ценности, так как растения являются основными поставщиками витаминов для человека и животных.

Витамин С (аскорбиновая кислота) относится к водорастворимым витаминам. При его недостатке в пище развивается тяжелое заболевание – цинга. Суточная потребность человека в витамине С составляет 50-100 мг. Аскорбиновая кислота в организме человека принимает активное участие в окислительно-восстановительных реакциях. Это связано с тем, что при участии фермента аскорбатоксидазы она способна легко окисляться, превращаясь при этом в дегидроаскорбиновую кислоту. Эта реакция является обратимой:

Н еобратимое окисление аскорбиновой кислоты происходит в щелочной среде, а также под действием солей железа и меди. Нагревание и свет ускоряют процесс необратимого разрушения витамина С.

Метод основан на способности аскорбиновой кислоты восстанавливать 2,6-дихлорфенолиндофенол в кислой среде. При этом окрашенная форма 2,6-дихлорфенолиндофенола (синий цвет) превращается в лейкоформу:

По количеству 2,6-дихлорфенолиндофенола, пошедшего на титрование раствора с аскорбиновой кислотой, находят содержание последней.

Ход работы:

Навеску растительного материала (4-5 г) тщательно растирают в фарфоровой ступке с 2-3 г кварцевого песка и 2-3 мл 1% HСl. После растирания прибавляют еще 15 мл 1% HСl и всю смесь переносят в мерную колбу на 100 мл. Ступку споласкивают 3 раза дистиллированной водой, полученные растворы переносят в ту же мерную колбу. Объем раствора в колбе доводят до 100 мл дистиллированной водой. Содержимое колбы тщательно перемешивают и фильтруют через сухой складчатый фильтр в сухой стаканчик или колбу. Одновременно готовят контрольную смесь реактивов.

Берут по 10 мл фильтрата (работу проводят в трех повторностях), переносят его в конические колбочки и титруют 0,001 Н раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола до появления яркооранжевого окрашивания, не исчезающего в течение 30 секунд. Одновременно проводят контрольное определение, т.е. титрование смеси реактивов без аскорбиновой кислоты.

Вычисление результатов. Расчет содержания аскорбиновой кислоты в мг % (мг/100 г материала) производят по формуле:

,

где – количество аскорбиновой кислоты в мг %;

– количество индикатора, использованное на титрование опыта, мл;

– количество индикатора, использованное на титрование контроля, мл;

– титр 2,6-дихлорфенолиндофенола по аскорбиновой кислоте;

– общий объем раствора (100 мл);

– объем раствора, взятый для титрования (10 мл);

– навеска растительного материала, г.

Для определения титра 2,6-дихлорфенолиндофенола по аскорбиновой кислоте растворяют 1-2 мг аскорбиновой кислоты в 50 мл раствора 1% HСl. Добавляют в этот раствор 5-10 мг KI и 5 капель 1% раствора крахмала доводят до метки. Затем берут в 2 колбы по 5 мл этого раствора и титруют его: первую колбу из бюретки – 0,001 Н раствором 2,6- дихлорфенолиндофенола и 2-ю колбу 0,001 Н раствором KIO₃.

Титр 2,6- дихлорфенолиндофенола находят по формуле:

,

где – количество раствора KIO₃, пошедшего на титрование;

– количество раствора 2,6- дихлорфенолиндофенола , пошедшего на титрование;

0,088 – количество мг аскорбиновой кислоты, соответствующее 1 мл 0,001 н раствора KIO₃.

Результаты анализа записывают в таблицу:

Растительный материал	Навеска, г	Взято для титрования, мл	Количество индикатора, взятого для титрования	Содержа-ние вита-мина С, мг/100 г