Добавил:
uma.mmva@gmail.com Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:

Ответы к 5 коллоквиуму

.pdf
Скачиваний:
18
Добавлен:
22.05.2020
Размер:
7.74 Mб
Скачать

Лабораторная диагностика

Для бактериологического исследования на газовую гангрену берут экссудат, кусочки измененной ткани из раны больного, а также кровь, отделяемое из раны м секционный материал. При пищевых токсикоинфекциях исследуют рвотные массы, фекалии и остатки пищевых продуктов. Все взятые материалы помещают в стерильную герметически закрывающуюся стеклянную посуду и немедленно пересылают в бактериологическую лабораторию. Все пробы подвергают микроскопии. Для этой цели готовят мазки-отпечатки и окрашивают их по Граму. Наличие в пробе большого количества крупных грамположительных палочек, имеющих споры, служит ориентировочным признаком для подозрения на клостридиальную инфекцию.

Взвесь исследуемого материала засевают на кровянойагар, агар Вильсона-Блэра.

Посевы инкубируют в анаэробных условиях при 37°С, просматривают на следующий день и затем через каждые 2 дня (до 7 суток) для выделения подозрительных колоний.

ЖЕЛЕЗО-СУЛЬФИТНЫЙ АГАР используется для выделения анаэробных бактерий. Готовится из питательного агара, к которому добавляют 1% глюкозы, хлорид железа и сульфит натрия. Анаэробные клостридии (Clostridiumperfringens) образуют на среде колонии черного цвета за счет образования соединений железа с серой.

КА - питательная среда для выявления гемолитических свойств бактерий. К расплавленному остуженному (до 4550 гр С) питательному агаруасептически добавляют 5-10% дефибринированной крови.Вокруг выросших колоний отчетливо видны прозрачные зоны гемолиза. Колонии, вызывающие гемолиз проверяют на чистоту и наличие грамположительных палочек (путем микроскопии), и затем отсевают в пробирки на анаэробную среду КиттаТароцци.

СРЕДА КИТТА-ТАРОЦЦИ обеспечивает рост многих спорообразующих и строгих аспорогенных анаэробов. Ее используют для культивирования и хранения клостридий. Состоит из питательного бульона, 2% глюкозы и кусочков печени или мясного фарша для адсорбции кислорода. Перед посевом среду прогревают на кипящей водяной бане в течение 10-15 минут для удаления воздуха. После посева среду заливают небольшим слоем вазелинового масла. Выросшие анаэробы вызывают помутнение питательной среды, а обильное газообразование приводит к всплытию кусочков печени или фарша.

Выделенные чистые культуры идентифицируют по биохимическим и антигенным свойствам и проверяют на токсичность (реакция преципитации в геле), а также проводят биологическую пробу на лабораторных животных (мышах, морских свинках).

Полуавтоматический микробиологический анализатор. Проводит идентификацию микроорганизмов и определение чувствительности к антибактериальным препаратам за 24 часа. Идентификацию грибов ,нейсерий и анаэробов возможно проводить за 4 часа.

Лечение газовой гангрены

1.Хирургическое

2.Антитоксические сыворотки – направлено на нейтрализацию гангренозных токсинов. Местно – обкалывание, орошение.

3.Антибиотики – местно и парентерально, комплексно.

4.Гипербарическая оксигенация

СТОЛБНЯК – тяжелая раневая инфекция, характеризуется поражением нервной системы, приступами тонических и клонических судорог.

Характеристика возбудителя

Cl.tetani – гр+ палочки с закругленными концами и терминально расположенной спорой (барабанная палочка).

Перетрих.

Строгие анаэробы

Широко распространены в природе, прежде всего в почве. Нередко обнаруживаются в кишечнике человека и животных, где не исключена и вегетация. Но при этом столбняк никогда не возникает при всасывании токсина из кишечника.

ПАТОГЕНЕЗ

Столбняк развивается как раневая инфекция, но далеко не каждое ранение создает условия для прорастания спор и размножения бактерий.

Опасны раны, в глубине которых протекает анаэробиоз (колотые).

Даже малые повреждения могут стать причиной столбняка (у 20% больных отсутствуют указания на травму).

Возбудитель лишен инвазивности (т.е.не покидает места первичного заражения) и заболевание всегда протекает как интоксикация на фоне малосимптомной очаговой инфекции.

Столбнячные споры могут персистировать в тканях

Основным фактором патогенности являются экзотоксины – тетаноспазмин и тетанолизин.

Органом-мишенью является нервная ткань.

По биологической активности уступают только ботулиническому токсину.

Способность к токсинообразованию неодинаково выражена у разных штаммов. Токсин накапливается внутри клетки и высвобождается при аутолизе и спорообразовании.

Токсин поступает в кровь и разносится по организму по кровеносным и лимфатическим сосудам.

Этапность интоксикации

Белок токсина состоит из двух цепей (тяжелой и легкой) и активируется собственными и тканевыми протеазами

Тяжелая цепь активированного токсина рецептируется нервными окончаниями в нервно-мышечных синапсах, эндоцитируется, поступает в поток ретроградного внутриаксонального транспорта и достигает передних рогов спинного мозга.

Здесь токсин снова подвергается эндоцитозу тормозными нейронами, а его легкая субъединица инактивирует факторы, необходимые для секреции тормозных медиаторов (ГАМК, глицина), блокирующих возбуждение мотонейронов.

Клинические проявления интоксикации

У человека последовательность мышечных поражений не связана с зоной первичного токсинообразования.

Всегда имеет характер нисходящего процесса – tetanusdescendens.

Начинается со сведения жевательных мышц (тризм) и затылочной мускулатуры, затем спазмируется мимическая мускулатура (сардоническая улыбка) и далее – мускулатура туловища и конечностей (опистотонус).

Лабораторная диагностика

Лабораторная диагностика столбняка имеет второстепенное значение. При появлении клинических симптомов болезни диагноз не представляет труда.

В отдельных случаях применяются бактериологические методы (микроскопия мазков-отпечатков, гистологическое исследование тканей, иссекаемых при хирургической обработке ран, посевы раневого отделяемого на питательные среды в анаэробных условиях) для обнаружения возбудителя в месте расположения входных ворот инфекции.

Используется биологический метод для определения токсинообразования на белых мышах – реакция нейтрализации с противостолбнячной антитоксической сывороткой.

Специфическая профилактика

Плановая иммунизация проводится военнослужащим, сельхозработникам, строителям путём введения столбнячного анатоксина по определённой схеме. Для иммунизации детей до 12 лет применяют АКДС, АДС, АДС- м, АС или секстаанатосин.

Экстренная профилактика столбняка у привитых людей заключается в однократном введении 0,5 мл анатоксина, у непривитых - во введении 1 мл анатоксина и 3000 МЕ сыворотки. Через месяц необходимо ввести ещё 0,5 мл анатоксина и для создания прочного иммунитета через год ещё 0,5 мл анатоксина.

Ботулизм

Это острая пищевая токсикоифекция, протекающая с преимущественным поражением центральной и вегетативной нервной системы

Естественный резервуар и источник возбудителя инфекции – почва и различные животные.

Повышенную заболеваемостьотмечают в регионах с теплым климатом. Механизм передачи – фекальнооральный.

Возбудитель ботулизма Clostridiumbotulinum относится к роду Clostridium, семейству Bacillaceae.

Это подвижная, спорообразующая палочка размерами (0,6—1,0)х(4—9) мкм. В мазках имеет вид палочек с закруглёнными концами, располагающиеся беспорядочными скоплениями или небольшими цепочками. Образуют субтерминально расположенные споры, диаметр которых превышает поперечник вегетативной формы. Из-за спор возбудитель имеет форму теннисной ракетки (чем характерно отличается от других клостридий).

Не образуют капсулы. Подвижны, перитрихи. Облигатные анаэробы.

Характеристика токсина

Основной фактор патогенности – ботулотоксин. Относительно термостабилен (80о – 40 мин, 100о – 10 мин.)

Антигеннй состав токсина различен. Выделяют 8 сероваров токсина – A, B, C1-2, D, E, F, G.

Является сильнейшим ядом, но чувствительность разных животных к его вариантам неодинакова. Человек поражается только токсинами A, B, Eи F.

Наиболее опасен токсин А (смертельная доза для человека – 10-8 г., т.е. 6 кг. Достаточно, чтобы отравить все человечество.)

Возбудитель не размножается в организме и не продуцирует в нем токсин, поэтому свежие продукты безопасны. Угроза возникает при прорастании спор и размножении возбудителя, при этом продукция токсина не влияет на вкусовые качества пищи.

В нативном виде малотоксичен.

Патогенез

Активность токсина возрастает под влиянием трипсина, тканевых и собственных протеиназ. Они расщепляют молекулу на 2 субкомпонента (легкий и тяжелый)

После всасывания из тонкого кишечника тяжелая субъединица связывается с мотонейронами, вызывая эндоцитоз всей молекулы нервными окончаниями.

Легкая субъединица разрушает факторы, необходимые для синтеза ацетилхолина. Это обрывает нервные импульсы от мотонейронов к мышечным волокнам, приводя к необратимой релаксации последних.

Клинические проявления

Инкубационный период 6 ч. – 3 сут.

Иногда первыми симптомами могут быть расстройства со стороны ЖКТ – тошнота, рвота, боль в животе)

Действие токсина начинается с n.oculomotorius (диплопия, анизокория, блефароптоз), n.

glossofaringeus(осиплость, нарушение саливации, глотания, афония)

Затем возникает парез и паралич мышц шеи, конечностей, дыхательной мускулатуры и сердечной мышцы.

Профилактика и лечение

В очаге ботулизма всем лицам, употреблявшим вместе сзаболевшим пищевые продукты, которые могли быть причиной отравления, профилактически вводят поливалентную противоботулиническую сыворотку. За этими лицами устанавливается медицинское наблюдение в течение 10 дней.

До установления типа токсина, вызвавшего заболевание, вводят внутривенно или внутримышечно поливалентную противоботулиническую сыворотку. Как правило, сыворотка вводится однократно. После установления типа возбудителя при необходимости вводят соответствующую моновалентную сыворотку. Наряду с сывороткой назначают антибиотики.

№ 1 Место микробиологии и иммунологии в современной медицине. Роль

№ 2 Основные этапы развития микробиологии и иммунологии. Работы Л.

№ 3 Роль И. И. Мечникова в формировании учения об иммунитете.

микробиологии и иммунологии в подготовке врачей-клиницистов и

Пастера, Р. Коха и их значение для развития микробиологии и

Значение открытия Д. И. Ивановского. Роль отечественных ученых (И. Ф.

врачей профилактической службы.

 

 

 

 

 

иммунологии.

 

 

 

 

 

 

 

Гамалея, П. Ф. Здродовский, А. А. Смородинцев, М. П. Чумаков, 3. В.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Ермольева, В. М. Жданов и др.) в развитии микробиологии и

Микробиология — наука, изучающая строение, жизнедеятельность и

Основные этапы развития микробиологии и имунологии.

 

вирусологии.

экологию микроорганизмов — мельчайших форм жизни растительного или

Историю развития микробиологии можно разделить на пять этапов:

 

животного происхождения, не видимых невооруженным глазом.

эвристический, морфологический, физиологический, иммунологический и

После работ Л. Пастера появилось множество исследований, в которых

Микробиология изучает всех представителей микромира (бактерии, грибы,

молекулярно-генетический.

 

 

 

 

 

 

пытались объяснить причины и механизмы формирования иммунитета после

простейшие, вирусы). По своей сути микробиология является биологической

Пастер сделал ряд выдающихся открытий. За короткий период с 1857 по 1885

вакцинации. Выдающуюся роль в этом сыграли работы И. И. Мечникова и П.

фундаментальной наукой. Для изучения микроорганизмов она использует

г. он доказал, что брожение (молочнокислое, спиртовое, уксуснокислое) не

Эрлиха.

методы других наук, прежде всего физики, биологии, биоорганической химии,

является химическим процессом, а его вызывают микроорганизмы; опроверг

Исследования И. И. Мечникова (1845—1916) показали, что большую роль в

молекулярной биологии, генетики, цитологии, иммунологии. Как и всякая

теорию самозарождения; открыл явление анаэробиоза, т.е. возможность жизни

формировании иммунитета играют особые клетки — макро- и микрофаги. Эти

наука, микробиология подразделяется на общую и частную. Общая мик-

микроорганизмов в отсутствие кислорода; заложил основы дезинфекции,

клетки поглощают и переваривают чужеродные частицы, в том числе

робиология изучает закономерности строения и жизнедеятельности

асептики и антисептики; открыл способ предохранения от инфекционных

бактерии. Исследования И. И. Мечникова по фагоцитозу убедительно

микроорганизмов на всех уровнях — молекулярном, клеточном,

болезней с помощью вакцинации.

 

 

 

 

 

доказали, что, помимо гуморального, существует клеточный иммунитет. И. И.

популяционном; генетику и взаимоотношения их с окружающей средой.

Многие открытия Л. Пастера принесли человечеству огромную практическую

Мечников, ближайший помощник и последователь Л. Пастера, заслуженно

Предметом изучения частной микробиологии являются отдельные

пользу. Путем прогревания (пастеризации) были побеждены болезни пива и

считается одним из основоположников иммунологии. Его работы положили

представители микромира в зависимости от проявления и влияния их на

вина, молочнокислых продуктов, вызываемые микроорганизмами; для

начало изучению иммунокомпетентных клеток как морфологической основы

окружающую среду, живую природу, в том числе человека. К частным

предупреждения гнойных осложнений ран введена антисептика; на основе

иммунной системы, ее единства и биологической сущности.

разделам

микробиологии

относятся:

 

медицинская,

ветеринарная,

принципов Л. Пастера разработаны многие вакцины для борьбы с

Д.И.Ивановский (1864— 1920) открыл вирусы — представителей царства

сельскохозяйственная, техническая (раздел биотехнологии), морская,

инфекционными болезнями.

 

 

 

 

 

 

vira. Один из основоположников вирусологии. Впервые открыл

космическая микробиология.

 

 

 

 

 

 

Однако значение трудов Л. Пастера выходит далеко за рамки только этих

проходящий через бактериологические фильтры возбудитель табачной

Многочисленные открытия в области микробиологии, изучение

практических достижений. Л. Пастер вывел микробиологию и иммунологию

мозаики, названный впоследствии вирусом. Труды по фитопатологии и

взаимоотношений между макро- и микроорганизмами во второй половине XIX

на принципиально новые позиции, показал роль микроорганизмов в жизни

физиологии растений.

в. способствовали началу бурного развития иммунологии. Вначале

людей, экономике, промышленности, инфекционной патологии, заложил

Гамалея - выдающийся микробиолог. Вместе с И. И. Мечниковым в 1886 году

иммунология рассматривалась как наука о невосприимчивости организма к

принципы, по которым развиваются микробиология и иммунология и в наше

организовал в Одессе первую в России бактериологическую станцию. Автор

инфекционным болезням. В настоящее время она стала общемедицинской и

время.

 

 

 

 

 

 

 

многих работ по микробиологии и иммунологии (по профилактике холеры,

общебиологической наукой. Доказано, что иммунная система служит для

Л. Пастер был, кроме того, выдающимся учителем и организатором науки.

чумы, оспы, паразитарных тифов, бешенства). Открыл бактериолизины,

защиты организма не только от микробных агентов, но и от любых

Работы Л. Пастера по вакцинации открыли новый этап в развитии

возбудители холеры птиц. Обосновал значение дезинсекции для ликвидации

генетически чужеродных организму веществ с целью сохранения постоянства

микробиологии, по праву получивший название иммунологического.

сыпного и возвратного тифов. В 1888 году ученый издал книгу "О прививках

внутренней среды организма, т.е. гомеостаза.

 

 

Принцип аттенуации (ослабления) микроорганизмов с помощью пассажей

против сибирской язвы".

Иммунология является основой для разработки лабораторных методов

через восприимчивое животное или при выдерживании микроорганизмов в

Здровский (1890-1976 года), российский микробиолог, иммунолог и

диагностики, профилактики и лечения инфекционных и многих

неблагоприятных условиях (температура, высушивание) позволил Л. Пастеру

эпидемиолог, академик АМН. Исследования по проблемам тропических

неинфекционных болезней, а также разработки иммунобиологических

получить вакцины против бешенства, сибирской язвы, куриной холеры; этот

болезней, бруцеллеза и др. Под руководством Здродовского разработаны

препаратов (вакцин, иммуноглобулинов, иммуномодуляторов, аллергенов,

принцип до настоящего времени используется при приготовлении вакцин.

методы вакцинации против столбняка, дифтерии и др. инфекций. Автор книги

диагностических

препаратов).

Разработкой

и

производством

Следовательно, Л. Пастер является основоположником научной иммунологии,

"Учение о риккетсиях и риккетсиозах"

иммунобиологических препаратов занимается иммунобиотехнология —

хотя и до него был известен метод предупреждения оспы путем заражения

Смородинцев, российский вирусолог и иммунолог. Труды по этиологии и

самостоятельный раздел иммунологии.

 

 

 

 

людей коровьей оспой, разработанный английским врачом Э. Дженнером.

профилактике гриппа, энцефалитов и др. вирусных инфекций. Совместно с М.

Современная медицинская микробиология и иммунология достигли

Однако этот метод не был распространен на профилактику других болезней.

П. Чумаковым разработал и внедрил вакцину против полиомиелита.

больших успехов и играют огромную роль в диагностике, профилактике и

Роберт Кох. Физиологический период в развитии микробиологии связан также

Ермольева, российский микробиолог. Получила первые отечественные

лечении инфекционных и многих не инфекционных болезней, связанных с

с именем немецкого ученого Роберта Коха, которому принадлежит разработка

образцы антибиотиков - пенициллина, стрептомицина и др.; интерферона.

нарушением иммунной системы (онкологические, аутоиммунные болезни,

методов получения чистых культур бактерий, окраски бактерий при

Жданов, российский вирусолог. Труды по вирусным инфекциям,

трансплантация органов и тканей и др.).

 

 

 

 

микроскопии, микрофотографии. Известна также сформулированная Р. Кохом

молекулярной биологии и классификации вирусов, эволюции инфекционных

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

триада Коха, которой до сих пор пользуются при установлении возбудителя

болезней.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

болезни.

 

 

 

 

 

 

 

 

№ 4 Основные принципы классификации микробов.

 

 

№ 5 Принципы классификации бактерий.

 

 

 

 

№ 6 Принципы классификации грибов.

Микробы, или микроорганизмы (бактерии, грибы, простейшие, вирусы),

Для бактерий рекомендованы следующие таксономические категории: класс,

Грибы относятся к царству Fungi (Mycetes, Mycota). Это многоклеточные или

систематизированы по их сходству, различиям и взаимоотношениям между

отдел, порядок, семейство, род, вид. Название вида соответствует бинарной

одноклеточные нефотосинтезирующие (бес-хлорофильные) эукариотические

собой. Этим занимается специальная наука — систематика микроорганизмов.

номенклатуре, т. е. состоит из двух слов. Например, возбудитель сифилиса

микроорганизмы с клеточной стенкой.

Систематика включает три части: классификацию, таксономию и идентифика-

пишется как Treponema pallidum. Первое слово — название рода и пишется с

Классификация грибов. Грибы можно разделить на 7 классов:

цию. В основу таксономии микроорганизмов положены их морфологические,

прописной буквы, второе слово обозначает вид и пишется со строчной буквы.

хитридиомицеты, гифохитридиомицеты, оомицеты, зигомицеты, аскомицеты,

физиологические, биохимические и молекулярно-биологические свойства.

При повторном упоминании вида родовое название сокращается до начальной

базидиомицеты, дейтеромицеты.

Различают следующие таксономические категории: царство, подцарство,

буквы, например: Т. pallidum.

 

 

 

 

 

 

Среди фикомицетов различают: хитридиомицеты, или водные грибы,

отдел, класс, порядок, семейство, род, вид, подвид и др. В рамках той или иной

Бактерии относятся к прокариотам, т. е. доядерным организмам, поскольку у

ведущие сапрофитический образ жизни или поражающие водоросли;

таксономической категории выделяют таксоны — группы организмов,

них имеется примитивное ядро без оболочки, ядрышка, гистонов, а в

гифохитридиомицеты, имеющие сходство с хитридиомицетами и оомицетами;

объединенные по определенным однородным свойствам.

 

 

цитоплазме отсутствуют высокоорганизованные органеллы (митохондрии,

оомицеты — паразиты высших растений и водяные плесени; зигомицеты

Микроорганизмы представлены доклеточными формами (вирусы — царство

аппарат Гольджи, лизосомы и др.).

 

 

 

 

 

включают представителей рода Mucor, распространенных в почве и воздухе и

Vira) и клеточными формами (бактерии, архебактерии, грибы и простейшие).

Бактерии делят на 2 домена: «Bacteria» и «Archaea».

 

 

способных (например, грибы рода Mucor) вызывать мукоромикоз легких, го-

Различают 3 домена (или «империи»): «Bacteria», «Archaea» и «Eukarya»:

В домене «Bacteria» можно выделить следующие бактерии:

 

ловного мозга и других органов. При бесполом размножении на плодоносящей

□ домен «Bacteria» — прокариоты, представленные настоящими бактериями

1) бактерии с тонкой клеточной стенкой, грамотрицательные;

 

гифеспорангиеносце образуется спорангий — шаровидное утолщение с

(эубактериями);

 

 

 

 

 

 

 

 

2) бактерии с толстой клеточной стенкой, грамположительные;

 

оболочкой, содержащее многочисленные споры (спорангиоспоры). Половое

□ домен «Archaea» — прокариоты, представленные архебактериями;

3) бактерии без клеточной стенки (класс Mollicutes — микоплазмы)

размножение (оогамия) у зигомицетов осуществляются путем образования

□ домен «Eukarya» — эукариоты, клетки которых имеют ядро с ядерной

Архебактерии не содержат пептидогликан в клеточной стенке. Они имеют

зигоспор, или ооспор.

оболочкой и ядрышком, а цитоплазма состоит из высокоорганизованных

особые рибосомы и рибосомные РНК (рРНК).

 

 

 

 

Эумицеты представлены аскомицетами и базидиомицетами (совершенные

органелл — митохондрий, аппарата Гольджи и др. Домен «Eukarya» включает:

Среди тонкостенных грамотрицательных эубактерий различают:

 

грибы), а также дейтеромицетами (несовершенные грибы). Аскомицеты (или

царство Fungi (грибы); царство животных Animalia (включает прстейшие –

сферические формы, или кокки (гонококки, менингококки, вейлонеллы);

сумчатые грибы) объединяют группу грибов, имеющих септированный

подцарство Protozoa); царство растений Plante. Домены включают царства,

извитые формы — спирохеты и спириллы;

 

 

 

 

мицелий и отличающихся способностью к половому размножению. Свое

типы, классы, порядки, семейства, роды, виды.

 

 

палочковидные формы, включая риккетсии.

 

 

 

 

название аскомицеты получили от основного органа плодоношения — сумки,

Вид. Одной из основных таксономических категорий является вид (species).

К толстостенным грамположительным эубактериям относят:

 

или аска, содержащего 4 или 8 гаплоидных половых спор (аскоспор). К

Вид — это совокупность особей, объединенных по близким свойствам, но от-

сферические формы, или кокки (стафилококки, стрептококки, пневмококки);

аскомицетам относятся представители родов Aspergillus, Penicillium и др.,

личающихся от других представителей рода.

 

 

 

 

• палочковидные формы, а также актиномицеты (ветвящиеся, нитевидные

отличающиеся особенностями формирования плодоносящих гиф. У Aspergillus

Чистая культура. Совокупность однородных микроорганизмов, выделенных

бактерии), коринебактерии (булавовидные бактерии), микобактерии и

(леечная плесень) на концах плодоносящих гифконидиеносцев имеются

на питательной среде, характеризующихся сходными морфологическими,

бифидобактерии.

 

 

 

 

 

 

утолщения — стеригмы, на которых образуются цепочки спор — конидии.

тинкториальными

(отношение

к

красителям),

 

культуральными,

Тонкостенные грамотрицательные бактерии: Менингококки, гонококки,

Некоторые виды аспергилл могут вызывать аспергиллезы и афлатоксикозы.

биохимическими и антигенными свойствами, называется чистой культурой.

Вейлонеллы, Палочки, Вибрионы, Кампилобактерии, Хеликобактерии,

Плодоносящая гифа у грибов рода Penicillium (кистевик) напоминает кисточку,

Штамм. Чистая культура микроорганизмов, выделенных из определенного

Спириллы, Спирохеты, Риккетсии, Хламидии.

 

 

 

 

так как из нее (на конидиеносце) образуются утолщения, разветвляющиеся на

источника и отличающихся от других представителей вида, называется

Толстостенные

грамположительные

 

бактерии:

Пневмококки,

более мелкие структуры — стеригмы, на которых находятся цепочки конидий.

штаммом. Штамм — более узкое понятие, чем вид или подвид.

Стрептококки,

Стафилококки,

Палочки,

Бациллы,

Клостридии,

Пеницициллы могут вызывать заболевания (пенициллинозы). Многие виды

Клон. Близким к понятию штамма является понятие клона. Клон представляет

Коринебактерии, Микобактерии, Бифидобактерии, Актиномицеты.

аскомицетов являются продуцентами антибиотиков.

собой совокупность потомков, выращенных из единственной микробной

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Представителями аскомицетов являются и дрожжи — одноклеточные грибы,

клетки.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

утратившие способность к образованию истинного мицелия. Дрожжи имеют

Для обозначения некоторых совокупностей микроорганизмов, отличающихся

 

 

 

 

 

 

 

 

 

овальную форму клеток, диаметр которых 3—15 мкм. Они размножаются поч-

по тем или иным свойствам, употребляется суффикс var (разновидность)

 

 

 

 

 

 

 

 

 

кованием, бинарным делением (делятся на две равные клетки) или половым

вместо ранее применявшегося type.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

путем с образованием аскоспор. Дрожжи используют в биотехнологических

№ 7 Принципы классификации простейших.

 

 

№ 8 Принципы классификации вирусов.

 

 

 

 

процессах. Заболевания, вызываемые некоторыми видами дрожжей, получили

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

название дрожжевых микозов. К аскомицетам относится и возбудитель

Простейшие представлены 7 типами, из которых четыре типа

В основу классификации вирусов положены следующие категории:

эрготизма, или спорыньи (Claviceps purpurea), паразитирующий на злаках.

(Sarcomastigophora, Apicomplexa, Ciliopkora, Microspora) включают

тип нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК), ее структура, количество нитей

Базидиомицеты — шляпочные грибы с септированным мицелием.

возбудителей заболеваний у человека.

 

 

 

 

 

(одна или две), особенности воспроизводства вирусного генома;

 

Дейтеромицеты — несовершенные грибы (Fungi imperfecti) — являются

Тип Sarcomastigophora. Подтип Mastigophora (жгутиконосцы) включает

размер и морфология вирионов, количество капсомеров и тип симметрии;

условным классом грибов, объединяющим грибы с септированным мицелием,

следующих патогенных представителей: трипаносому — возбудителя

• наличие суперкапсида;

 

 

 

 

 

 

не имеющих полового размножения. Они размножаются только бесполым

африканского трипаносомоза (сонная болезнь); лейшмании — возбудителей

чувствительность к эфиру и дезоксихолату;

 

 

 

 

путем, образуя конидии.

кожной и висцеральной форм лейшманиозов; трихомонады, передающиеся

место размножения в клетке;

 

 

 

 

 

 

К несовершенным грибам относятся грибы рода Candida, поражающие кожу,

половым путем и паразитирующие в толстой кишке человека; лямблию —

антигенные свойства и пр.

 

 

 

 

 

 

слизистые оболочки и внутренние органы (кандидоз). Они имеют овальную

возбудителя лямблиоза. Эти простейшие характеризуются наличием жгутиков:

Вирусы имеют уникальный геном, так как содержат либо ДНК, либо РНК.

форму, диаметр 2—5 мкм; делятся почкованием (бластоспоры), образуют

один — у лейшмании, четыре свободных жгутика и короткая ундулирующая

Поэтому различают ДНК-содержащие и РНК-содержащие вирусы. Они обычно

псевдомицелий (почкующиеся клетки из ростковой трубочки вытягиваются в

мембрана — у трихомонад.

 

 

 

 

 

 

гаплоидны, т.е. имеют один набор генов. Геном вирусов представлен

нить), на концах которого находятся хламидоспоры. Эти грибы называют

К подтипу Sarcodina (саркодовые) относится дизентерийная амеба —

различными видами нуклеиновых кислот: двунитчатыми, однонитчатыми,

дрожжеподобными. Истинные дрожжи (аскомицеты) образуют аскоспоры, не

возбудитель амебной дизентерии человека. Морфологически сходна с ней

линейными, кольцевыми, фрагментированными. Среди РНКсодержащих

имеют псевдомицелия и хламидоспор.

непатогенная кишечная амеба. Эти простейшие передвигаются путем

вирусов различают вирусы с положительным (плюс-нить РНК) геномом.

Подавляющее большинство грибов, вызывающих заболевания у человека

образования псевдоподий. Питательные вещества захватываются и

Плюс-нить РНК этих вирусов выполняет наследственную функцию и функцию

(микозы), относятся к несовершенным грибам.

погружаются в цитоплазму клеток. Половой путь размножения у амеб

информационной РНК (иРНК). Имеются также РНК-содержащие вирусы с

 

отсутствует. При неблагоприятных условиях они образуют цисту.

отрицательным (минус-нить РНК) геномом. Минус-нить РНК этих вирусов

 

Тип Apicomplexa. В классе Sporozoa (споровики) патогенными

выполняет только наследственную функцию.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

представителями являются возбудители токсоплазмоза, кокцидиоза,

Вирусы — мельчайшие микробы, не имеющие клеточного строения,

 

саркоцистоза и малярии. Жизненный цикл возбудителей малярии

белоксинтезирующей системы, содержащие только ДНК или РНК. Относятся к

 

характеризуется чередованием полового размножения (в организме комаров

царству Vira. Являясь облигатными внутриклеточными паразитами, вирусы

 

Anopheles) и бесполого (в клетках тканей и эритроцитах человека они раз-

размножаются в цитоплазме или ядре клетки. Они — автономные

 

множаются путем множественного деления). Токсоплазмы имеют форму

генетические

структуры.

Отличаются

особым

разобщенным

 

полулуний. Токсоплазмозом человек заражается от животных. Токсоплазмы

(дисъюнктивным) способом размножения (репродукции): в клетке отдельно

 

могут передаваться через плаценту и поражать центральную нервную систему

синтезируются нуклеиновые кислоты вирусов и их белки, затем происходит их

 

и глаза плода.

 

 

 

 

 

 

 

 

сборка в вирусные частицы. Сформированная вирусная частица называется

 

Тип Ciliophora. Патогенный представитель — возбудитель балантидиаза —

вирионом.

 

 

 

 

 

 

 

 

поражает толстый кишечник человека. Балантидии имеют многочисленные

Морфологию вирусов изучают с помощью электронной микроскопии, так как

 

реснички и поэтому подвижны.

 

 

 

 

 

 

их размеры малы (18-400 нм) и сравнимы с толщиной оболочки бактерий.

 

Тип Microspora включает микроспоридии — маленькие (0,5—10 мкм)

Форма вирионов может быть различной: палочковидной (вирус табачной

 

облигатные внутриклеточные паразиты, широко распространенные среди

мозаики), пулевидной (вирус бешенства), сферической (вирусы полиомиелита,

 

животных и вызывающие у ослабленных людей диарею и гнойно-

ВИЧ), нитевидной (филовирусы), в виде сперматозоида (многие

 

воспалительные заболевания.

 

 

 

 

 

 

бактериофаги). Различают просто устроенные и сложно устроенные вирусы.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Простые, или безоболочечные, вирусы состоят из нуклеиновой кислоты и

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

белковой оболочки, называемой капсидом. Капсид состоит из повторяющихся

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

морфологических субъединиц — капсомеров. Нуклеиновая кислота и капсид

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

взаимодействуют друг с другом, образуя нуклеокапсид.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Сложные, или оболочечные, вирусы снаружи капсида окружены ли-

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

попротеиновой оболочкой (суперкапсидом, или пеплосом). Эта оболочка

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

является производной структурой от мембран вирус-инфицированной клетки.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

На оболочке вируса расположены

гликопротеиновые

шипы,

или шипики

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

(пепломеры). Под оболочкой некоторых вирусов находится матриксный М-

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

белок.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Тип симметрии. Капсид или нуклеокапсид могут иметь спиральный,

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

икосаэдрический (кубический) или сложный тип симметрии. Икосаэдрический

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

тип симметрии обусловлен образованием изометрически полого тела из

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

капсида, содержащего вирусную нуклеиновую кислоту (например, у вирусов

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

гепатита А, герпеса, полиомиелита). Спиральный тип симметрии обусловлен

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

винтообразной структурой нуклеокапсида (например, у вируса гриппа).

 

№ 9 Морфологические и тинкториальные свойства бактерий. Методы

№ 10 Структура и химический состав бактериальной клетки. Особенности

№ 11 Морфология грибов

 

 

 

 

 

окраски.

строения грамположительных и грамотрицательных бактерий.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Грибы относятся к царству Fungi (Mycetes, Mycota). Это многоклеточные или

Морфологические свойства бактерий. Бактерии — микроорганизмы, не

Бактериальная клетка состоит из клеточной стенки, цитоплазматической

одноклеточные нефотосинтезирующие (бесхлорофильные) эукариотические

имеющие оформленного ядра (прокариоты).

мембраны, цитоплазмы с включениями и ядра, называемого нуклеоидом.

микроорганизмы с клеточной стенкой.

 

 

 

 

Бактерии имеют разнообразную форму и довольно сложную структуру,

Имеются дополнительные структуры: капсула, микрокапсула, слизь, жгутики,

Грибы имеют ядро с ядерной оболочкой, цитоплазму с органеллами,

определяющую многообразие их функциональной деятельности. Для бактерий

пили. Некоторые бактерии в неблагоприятных условиях способны

цитоплазматическую мембрану и многослойную, ригидную клеточную стенку,

характерны четыре основные формы: сферическая (шаровидная),

образовывать споры.

 

 

 

 

состоящую из нескольких типов полисахаридов, а также белка, липидов и др.

цилиндрическая (палочковидная), извитая и нитевидная.

Клеточная стенка. В клеточной стенке грамположительных бактерий

Некоторые грибы образуют капсулу. Цитоплазматическая мембрана содержит

Бактерии шаровидной формы кокки — в зависимости от плоскости деления

содержится небольшое количество полисахаридов, липидов, белков. Основным

гликопротеины,

фосфолипиды

и

эргостеролы.

Грибы

являются

и расположения относительно друг друга отдельных особей подразделяются на

компонентом толстой клеточной стенки этих бактерий является многослойный

грамположительными

микробами,

 

вегетативные

клетки

не-

микрококки (отдельно лежащие кокки), диплококки (парные кокки),

пептидогликан (муреин, мукопептид), составляющий 40-90 % массы клеточной

кислотоустойчивые.

 

 

 

 

 

 

стрептококки (цепочки кокков), стафилококки (имеющие вид виноградных

стенки. С пептидогликаном клеточной стенки грамположительных бактерий

Грибы состоят из длинных тонких нитей (гиф), сплетающихся в грибницу,

гроздьев), тетракокки (образования из четырех кокков) и сарцины (пакеты из 8

ковалентно связаны тейхоевые кислоты (от греч. teichos — стенка).

или мицелий. Гифы низших грибов — фикомицетов — не имеют перегородок.

или 16 кокков).

В состав клеточной стенки грамотрицательных бактерий входит наружная

У высших грибов — эуми-цетов — гифы разделены перегородками; их

Палочковидные бактерии располагаются в виде одиночных клеток, диплоили

мембрана, связанная посредством липопротеина с подлежащим слоем

мицелий многоклеточный.

 

 

 

 

 

стрептобактерий.

пептидогликана. На ультратонких срезах бактерий наружная мембрана имеет

Различают гифальные и дрожжевые формы грибов.

 

 

 

Извитые формы бактерий вибрионы и спириллы, а также спирохеты.

вид волнообразной трехслойной структуры, сходной с внутренней мембраной,

Гифальные (плесневые) грибы образуют ветвящиеся тонкие нити (гифы),

Вибрионы имеют вид слегка изогнутых палочек, спириллы извитую форму

которую называют цитоплазматической. Основным компонентом этих

сплетающиеся в грибницу, или мицелий (плесень). Гифы, врастающие в

с несколькими спиральными завитками.

мембран является бимолекулярный (двойной) слой липидов. Внутренний слой

питательный субстрат, называются вегетативными гифами (отвечают за

Размеры бактерий колеблются от 0,1 до 10 мкм. В состав бактериальной клетки

наружной мембраны представлен фосфолипидами, а в наружном слое

питание гриба), а растущие над поверхностью субстрата — воздушными или

входят капсула, клеточная стенка, цитоплаз-матическая мембрана и

расположен липополисахарид.

 

 

 

 

репродуктивными гифами (отвечают за бесполое размножение).

 

 

цитоплазма, в которой содержатся нук-леоид, рибосомы и включения.

Функции клеточной стенки:

 

 

 

 

Гифы низших грибов не имеют перегородок. Они представлены

Некоторые бактерии снабжены жгутиками и ворсинками. Ряд бактерий

1. Обусловливает форму клетки.

 

 

 

многоядерными клетками и называются ценоцитными.

 

 

 

образуют споры, которые располагаются терминально, субтерминально или

2. Защищает клетку от механических повреждений извне и выдерживает

Гифы высших грибов разделены перегородками, или септами с отверстиями.

 

центрально; превышая поперечный размер клетки, споры придают ей

значительное внутреннее давление.

 

 

 

Дрожжевые грибы (дрожжи), в основном, имеют вид отдельных овальных

веретенообразную форму.

3. Обладает свойством полупроницаемости, поэтому через нее избирательно

клеток (одноклеточные грибы). По типу полового размножения они

Методы окраски. Окраску мазка производят простыми или сложными

проникают из среды питательные вещества.

 

 

 

распределены среди высших грибов — аскомицет и базидиомицет. При

методами. Простые заключаются в окраске препарата одним красителем;

4. Несет на своей поверхности рецепторы для бактериофагов и различных

бесполом размножении дрожжи образуют почки или делятся, что приводит к

сложные методы (по Граму, Цилю — Нильсену и др.) включают последо-

химических веществ.

 

 

 

 

одноклеточному росту. Могут образовывать псевдогифы и ложный мицелий

вательное использование нескольких красителей и имеют дифференциально-

Метод выявления клеточной стенки - электронная микроскопия, плазмолиз.

(псевдомицелий) в виде цепочек удлиненных клеток — «сарделек». Грибы,

диагностическое значение. Отношение микроорганизмов к красителям

L-формы бактерий, их медицинское значение

 

 

аналогичные дрожжам, но не имеющие полового способа размножения,

расценивают как тинкториальные свойства. Существуют специальные методы

L-формы - это бактерии, полностью или частично лишенные клеточной стенки

называют дрожжеподобными. Они размножаются только бесполым способом

окраски, которые используют для выявления жгутиков, клеточной стенки,

(протопласт +/- остаток клеточной стенки), поэтому имеют своеобразную

— почкованием или делением.

 

 

 

 

 

нуклеоида и разных цитоплазматических включений.

морфологию в виде крупных и мелких сферических клеток. Способны к

Грибы размножаются спорами половым и бесполым способами, а также

При простых методах мазок окрашивают каким-либо одним красителем, ис-

размножению.

 

 

 

 

 

вегетативным путем (почкование или фрагментация гиф). Грибы,

пользуя красители анилинового ряда (основные или кислые). Если красящий

Цитоплазматическая мембрана располагается под клеточной стенкой (между

размножающиеся половым и бесполым путем, относятся к совершенным.

ион (хромофор) — катион, то краситель обладает основными свойствами, если

ними - периплазматическое пространство). По строению является сложным

Несовершенными называют грибы, у которых отсутствует или еще не описан

хромофор - анион, то краситель имеет кислые свойства. Кислые красители —

липидобелковым комплексом, таким же, как у клеток эукариот (универсальная

половой путь размножения. Бесполое размножение осуществляется у грибов с

эритрозин, кислый фуксин, эозин. Основные красители — генциановый

мембрана).

 

 

 

 

 

помощью эндогенных спор, созревающих внутри круглой структуры —

фиолетовый, кристаллический фиолетовый, метиленовый синий, основной

Функции цитоплазматической мембраны:

 

 

 

спорангия, и экзогенных спор — конидий, формирующихся на кончиках

фуксин. Преимущественно для окраски микроорганизмов используют

1. Является основным осмотическим и онкотическим барьером.

 

плодоносящих гиф.

 

 

 

 

 

 

 

основные красители, которые более интенсивно связываются кислыми

2. Участвует в энергетическом метаболизме и в активном транспорте

Типы грибов. Выделяют 3 типа грибов, имеющих половой способ

компонентами клетки. Из сухих красителей, продающихся в виде порошков,

питательных веществ в клетку, так как является местом локализации пермеаз и

размножения (так называемые совершенные грибы): зигомицеты (Zygomycota),

готовят насыщенные спиртовые растворы, а из них — водно-спиртовые,

ферментов окислительного фосфорилирования.

 

 

 

аскомицеты (Ascomycota) и базидиомицеты (Basidiomycota). Отдельно

которые и служат для окрашивания микробных клеток. Микроорганизмы

3. Участвует в процессах дыхания и деления.

 

 

 

выделяют условный, формальный тип/группу грибов — дейтеромицеты

окрашивают, наливая краситель на поверхность мазка на определенное время.

4. Участвует в синтезе компонентов клеточной клетки (пептидогликана).

(Deiteromycota), у которых имеется только бесполый способ размножения (так

Окраску основным фуксином ведут в течение 2 мин, метиленовым синим —

5. Участвует в выделении из клетки токсинов и ферментов.

 

называемые несовершенные грибы).

 

 

 

 

 

5—7 мин. Затем мазок промывают водой до тех пор, пока стекающие струи

Цитоплазматическая мембрана выявляется только при электронной

 

 

 

 

 

 

 

 

воды не станут бесцветными, высушивают осторожным промоканием

микроскопии.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

фильтровальной бумагой и микроскопируют в иммерсионной системе. Если

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

мазок правильно окрашен и промыт, то поле зрения совершенно прозрачно, а

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

клетки интенсивно окрашены.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Сложные методы окраски применяют для изучения структуры клетки и

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

дифференциации микроорганизмов. Окрашенные мазки микроскопируют в

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

иммерсионной системе. Последовательно нанести на препарат определенные

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

красители, различающиеся по химическому составу и цвету, протравы, спирты,

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

кислоту и др.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Существуют несколько основных окрасок: по Граму, по Цилю-Нельсону, по

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Ауески, Нейссера, Бури-Гинса.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

№ 12 Морфология простейших

№ 13 Особенности биологии вирусов

 

 

 

№ 14 Структура и химический состав вирусов и бактериофагов

 

 

Простейшие — эукариотические одноклеточные микроорганизмы,

Вирусы — мельчайшие микробы, не имеющие клеточного строения,

Вирусы — мельчайшие микробы, не имеющие клеточного строения,

составляющие подцарство Protozoa царства животных (Animalia). Простейшие

белоксинтезирующей системы, содержащие только ДНК или РНК. Относятся к

белоксинтезирующей системы, содержащие только ДНК или РНК. Относятся к

включают 7 типов, из которых четыре типа (Sarcomastigophora, Apicomplexa,

царству Vira. Являясь облигатными внутриклеточными паразитами, вирусы

царству Vira. Являясь облигатными внутриклеточными паразитами, вирусы

Ciliophora, Microspora) имеют представителей, вызывающих заболевания у

размножаются в цитоплазме или ядре клетки. Они — автономные

размножаются в цитоплазме или ядре клетки. Они — автономные генетические

человека. Размеры простейших колеблются в среднем от 5 до 30 мкм.

генетические

структуры.

Отличаются

особым

разобщенным

структуры. Отличаются особым — разобщенным (дисъюнктивным) способом

Снаружи простейшие окружены мембраной (пелликулой) — аналогом

(дисъюнктивным) способом размножения (репродукции): в клетке отдельно

размножения (репродукции): в клетке отдельно синтезируются нуклеиновые

цитоплазматической мембраны клеток животных. Некоторые простейшие

синтезируются нуклеиновые кислоты вирусов и их белки, затем происходит их

кислоты вирусов и их белки, затем происходит их сборка в вирусные частицы.

имеют опорные фибриллы.

сборка в вирусные частицы. Сформированная вирусная частица называется

Сформированная вирусная частица называется вирионом.

 

 

 

Цитоплазма и ядро соответствуют по строению эукариотическим клеткам:

вирионом.

 

 

 

 

 

Морфологию и структуру вирусов изучают с помощью электронного

цитоплазма состоит из эндоплазматического ретикулума, митохондрий,

Морфологию и структуру вирусов изучают с помощью электронного

микроскопа, так как их размеры малы и сравнимы с толщиной оболочки

лизосом, многочисленных рибосом и др.; ядро имеет ядрышко и ядерную

микроскопа, так как их размеры малы и сравнимы с толщиной оболочки

бактерий.

 

 

 

 

 

 

 

оболочку.

бактерий.

 

 

 

 

 

Форма вирионов может быть различной: палочковидной (вирус табачной

Передвигаются простейшие посредством жгутиков, ресничек и путем

Форма вирионов может быть различной: палочковидной (вирус табачной

мозаики), пулевидной (вирус бешенства), сферической (вирусы полиомиелита,

образования псевдоподий.

мозаики), пулевидной (вирус бешенства), сферической (вирусы полиомиелита,

ВИЧ), в виде сперматозоида (многие бактериофаги). Различают просто

Простейшие могут питаться в результате фагоцитоза или образования

ВИЧ), в виде сперматозоида (многие бактериофаги). Различают просто

устроенные и сложно устроенные вирусы.

 

 

 

особых структур. Многие простейшие при неблагоприятных условиях

устроенные и сложно устроенные вирусы.

 

 

 

Простые, или безоболочечные, вирусы состоят из нуклеиновой кислоты и

образуют цисты — покоящиеся стадии, устойчивые к изменению температуры,

Простые, или безоболочечные, вирусы состоят из нуклеиновой кислоты и

белковой оболочки, называемой капсидом. Капсид состоит из повторяющихся

влажности и др.

белковой оболочки, называемой капсидом. Капсид состоит из повторяющихся

морфологических субъединиц — капсомеров. Нуклеиновая кислота и капсид

Простейшие окрашиваются по Романовскому—Гимзе (ядро — красного, ци-

морфологических субъединиц — капсомеров. Нуклеиновая кислота и капсид

взаимодействуют друг с другом, образуя нуклеокапсид.

 

 

 

топлазма — синего цвета).

взаимодействуют друг с другом, образуя нуклеокапсид.

 

 

Сложные, или оболочечные, вирусы снаружи капсида окружены ли-

Тип Sarcomastigophora. Подтип Mastigophora (жгутиконосцы) включает

Сложные, или оболочечные, вирусы снаружи капсида окружены ли-

попротеиновой оболочкой (суперкапсидом, или пеплосом). Эта оболочка

следующих патогенных представителей: трипаносому — возбудителя

попротеиновой оболочкой (суперкапсидом, или пеплосом). Эта оболочка

является производной структурой от мембран вирус-инфицированной клетки.

африканского трипаносомоза (сонная болезнь); лейшмании — возбудителей

является производной структурой от мембран вирус-инфицированной клетки.

На оболочке вируса

расположены

гликопротеиновые

шипы, или

шипики

кожной и висцеральной форм лейшманиозов; трихомонады, передающиеся

На оболочке

вируса расположены гликопротеиновые

шипы,

или шипики

(пепломеры). Под оболочкой некоторых вирусов находится матриксный М-

половым путем и паразитирующие в толстой кишке человека; лямблию —

(пепломеры). Под оболочкой некоторых вирусов находится матриксный М-

белок.

 

 

 

 

 

 

 

возбудителя лямблиоза. Эти простейшие характеризуются наличием жгутиков:

белок.

 

 

 

 

 

Капсид и суперкапсид защищают вирионы от влияния окружающей среды,

один — у лейшмании, четыре свободных жгутика и короткая ундулирующая

Тип симметрии. Капсид или нуклеокапсид могут иметь спиральный,

обусловливают избирательное взаимодействие (адсорбцию) с клетками,

мембрана — у три-хомонад.

икосаэдрический (кубический) или сложный тип симметрии. Икосаэдрический

определяют антигенные и иммуногенные свойства вирионов. Внутренние

К подтипу Sarcodina (саркодовые) относится дизентерийная амеба —

тип симметрии обусловлен образованием изометрически полого тела из

структуры вирусов называются сердцевиной.

 

 

 

возбудитель амебной дизентерии человека. Морфологически сходна с ней

капсида, содержащего вирусную нуклеиновую кислоту (например, у вирусов

Тип симметрии. Капсид или нуклеокапсид могут иметь спиральный,

непатогенная кишечная амеба. Эти простейшие передвигаются путем

гепатита А, герпеса, полиомиелита). Спиральный тип симметрии обусловлен

икосаэдрический (кубический) или сложный тип симметрии. Икосаэдрический

образования псевдоподий. Питательные вещества захватываются и

винтообразной структурой нуклеокапсида (например, у вируса гриппа).

тип симметрии обусловлен образованием изометрически полого тела из

погружаются в цитоплазму клеток. Половой путь размножения у амеб

Включения — скопление вирионов или отдельных их компонентов в

капсида, содержащего вирусную нуклеиновую кислоту (например, у вирусов

отсутствует. При неблагоприятных условиях они образуют цисту.

цитоплазме или ядре клеток, выявляемые под микроскопом при специальном

гепатита А, герпеса, полиомиелита). Спиральный тип симметрии обусловлен

Тип Apicomplexa. В классе Sporozoa (споровики) патогенными

окрашивании. Вирус натуральной оспы образует цитоплазмати-ческие

винтообразной структурой нуклеокапсида (например, у вируса гриппа).

 

представителями являются возбудители токсоплазмоза, кокцидиоза,

включения — тельца Гварниери; вирусы герпеса и аденовирусы —

Включения — скопление вирионов или отдельных их компонентов в

саркоцистоза и малярии. Жизненный цикл возбудителей малярии

внутриядерные включения.

 

 

 

 

цитоплазме или ядре клеток, выявляемые под микроскопом при специальном

характеризуется чередованием полового размножения (в организме комаров

Размеры вирусов определяют с помощью электронной микроскопии, методом

окрашивании. Вирус натуральной оспы образует цитоплазмати-ческие

Anopheles) и бесполого (в клетках тканей и эритроцитах человека они раз-

ультрафильтрации через фильтры с известным диаметром пор, методом

включения — тельца Гварниери; вирусы герпеса и аденовирусы —

множаются путем множественного деления). Токсоплазмы имеют форму

ультрацентрифугирования. Одним из самых мелких вирусов является вирус

внутриядерные включения.

 

 

 

 

 

полулуний. Токсоплазмозом человек заражается от животных. Токсоплазмы

полиомиелита (около 20 нм), наиболее крупным — натуральной оспы (около

Размеры вирусов определяют с помощью электронной микроскопии, методом

могут передаваться через плаценту и поражать центральную нервную систему

350 нм).

 

 

 

 

 

ультрафильтрации через фильтры с известным диаметром пор, методом

и глаза плода.

Вирусы имеют уникальный геном, так как содержат либо ДНК, либо РНК.

ультрацентрифугирования. Одним из самых мелких вирусов является вирус

Тип Ciliophora. Патогенный представитель — возбудитель ба-лантидиаза —

Поэтому различают ДНК-содержащие и РНК-содержащие вирусы. Они обычно

полиомиелита (около 20 нм), наиболее крупным — натуральной оспы (около

поражает толстый кишечник человека. Балантидии имеют многочисленные

гаплоидны, т.е. имеют один набор генов. Геном вирусов представлен

350 нм).

 

 

 

 

 

 

 

реснички и поэтому подвижны.

различными видами нуклеиновых кислот: двунитчатыми, однонитчатыми,

Вирусы имеют уникальный геном, так как содержат либо ДНК, либо РНК.

Тип Microspora включает микроспоридии — маленькие (0,5—10 мкм)

линейными, кольцевыми, фрагментированными. Среди РНК-содержащих

Поэтому различают ДНК-содержащие и РНК-содержащие вирусы. Они обычно

облигатные внутриклеточные паразиты, широко распространенные среди

вирусов различают вирусы с положительным (плюс-нить РНК) геномом.

гаплоидны, т.е. имеют один набор генов. Геном вирусов представлен

животных и вызывающие у ослабленных людей диарею и гнойно-

Плюс-нить РНК этих вирусов выполняет наследственную функцию и функцию

различными видами нуклеиновых кислот: двунитчатыми, однонитчатыми,

воспалительные заболевания.

информационной РНК (иРНК). Имеются также РНК-содержащие вирусы с

линейными, кольцевыми, фрагментированными. Среди РНК-содержащих

 

отрицательным (минус-нить РНК) геномом. Минус-нить РНК этих вирусов

вирусов различают вирусы с положительным (плюс-нить РНК) геномом.

 

выполняет только наследственную функцию.

 

 

 

Плюс-нить РНК этих вирусов выполняет наследственную функцию и функцию

 

Вирусы поражают позвоночных и беспозвоночных животных, а также

информационной РНК (иРНК). Имеются также РНК-содержащие вирусы с

 

растения и бактерии. Являясь основными возбудителями инфекционных

отрицательным (минус-нить РНК) геномом. Минус-нить РНК этих вирусов

 

заболеваний человека, вирусы также участвуют в процессах канцерогенеза,

выполняет только наследственную функцию.

 

 

 

 

могут передаваться различными путями, в том числе через плаценту (вирус

Геном вирусов способен включаться в состав генетического аппарата клетки в

 

краснухи, цитомега ловирус и др.), поражая плод человека. Они могут

виде провируса, проявляя себя генетическим паразитом клетки. Нуклеиновые

 

приводить к постинфекционным осложнениям — развитию миокардитов, пан-

кислоты некоторых вирусов (вирусы герпеса и др.) могут находиться в

 

креатитов, иммунодефицитов и др.

 

 

 

цитоплазме инфицированных клеток, напоминая плазмиды.

 

 

 

Кроме обычных вирусов, известны и так называемые неканонические вирусы

 

 

 

 

 

 

 

 

 

— прионы — белковые инфекционные частицы, являющиеся агентами

 

 

 

 

 

 

 

 

 

белковой природы, имеющие вид фибрилл размером 10—20x100—200 нм.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Прионы, по-видимому, являются одновременно индукторами и продуктами

 

 

 

 

 

 

 

 

 

автономного гена человека или животного и вызывают у них энцефалопатии в

 

 

 

 

 

 

 

 

 

условиях медленной вирусной инфекции (болезни Крейтц-фельдта—Якоба,

 

 

 

 

 

 

 

 

 

куру и др.).

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Другими необычными агентами, близкими к вирусам, являются вироиды —

 

 

 

 

 

 

 

 

 

небольшие молекулы кольцевой, суперспи-рализованной РНК, не содержащие

 

 

 

 

 

 

 

 

 

белка, вызывающие заболевания у растений.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

№ 15 Методы микроскопии (люминесцентная, темнопольная, фазово-

№ 16 Рост и размножение бактерий. Фазы размножения.

 

 

 

№ 17 Способы получения энергии бактериями (дыхание, брожение).

контрастная, электронная).

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Методы культивирования анаэробов.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Жизнедеятельность бактерий характеризуется ростом — формированием

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Люминесцентная (или флюоресцентная) микроскопия. Основана на

структурно-функциональных компонентов клетки и увеличением самой

Дыхание, или биологическое окисление, основано на окислительно-

явлении фотолюминесценции.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

бактериальной клетки, а также размножением — самовоспроизведением,

восстановительных реакциях, идущих с образованием АТФ-универсального

Люминесценция — свечение веществ, возникающее после воздействия на них

приводящим к увеличению количества бактериальных клеток в популяции.

 

аккумулятора химической энергии. Энергия необходима микробной клетке для

каких-либо

источников

 

энергии:

 

световых,

электронных

лучей,

Бактерии размножаются путем бинарного деления пополам, реже путем

ее жизнедеятельности. При дыхании происходят процессы окисления и

ионизирующего излучения. Фотолюминесценция — люминесценция объекта

почкования. Актиномицеты, как и грибы, могут размножаться спорами.

восстановления: окисление — отдача донорами (молекулами или атомами) во-

под влиянием света. Если освещать люминесцирующий объект синим светом,

Актиномицеты, являясь ветвящимися бактериями, размножаются путем

дорода или электронов; восстановление — присоединение водорода или

то он испускает лучи красного, оранжевого, желтого или зеленого цвета. В ре-

фрагментации нитевидных клеток. Грамположительные бактерии делятся

электронов к акцептору. Акцептором водорода или электронов может быть

зультате возникает цветное изображение объекта.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

путем врастания синтезирующихся перегородок деления внутрь клетки, а

молекулярный кислород (такое дыхание называется аэробным) или нитрат,

Темнопольная микроскопия. Микроскопия в темном поле зрения основана

грамотрицательные — путем перетяжки, в результате образования гантелевид-

сульфат, фумарат (такое дыхание называется анаэробным — нитратным,

на явлении дифракции света при сильном боковом освещении взвешенных в

ных фигур, из которых образуются две одинаковые клетки.

 

 

 

 

сульфатным, фумаратным).

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

жидкости мельчайших частиц (эффект Тиндаля). Эффект достигается с

Делению клеток предшествует репликация бактериальной хромосомы по

Анаэробиоз (от греч. аег — воздух + bios — жизнь) — жизнедеятельность,

помощью параболоидили кардиоидконденсора, которые заменяют обычный

полуконсервативному типу (двуспиральная цепь ДНК раскрывается и каждая

протекающая при отсутствии свободного кислорода. Если донорами и

конденсор в биологическом микроскопе .

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

нить достраивается комплементарной нитью), приводящая к удвоению

акцепторами водорода являются органические соединения, то такой процесс

Фазово-контрастная микроскопия.

Фазово-контрастное

приспособление

молекул ДНК бактериального ядра — нуклеоида.

 

 

 

 

 

 

называется брожением. При брожении происходит ферментативное

дает возможность увидеть в микроскоп прозрачные объекты. Они приобретают

Репликация ДНК происходит в три этапа: инициация, элонгация, или рост

расщепление органических соединений, преимущественно углеводов, в

высокую контрастность изображения, которая может быть позитивной или

цепи, и терминация.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

анаэробных условиях. С учетом конечного продукта расщепления углеводов

негативной. Позитивным фазовым контрастом называют темное изображение

Размножение бактерий в жидкой питательной среде. Бактерии, засеянные в

различают спиртовое, молочнокислое, уксуснокислое и другие виды брожения.

объекта в светлом поле зрения, негативным — светлое изображение объекта на

определенный, не изменяющийся объем питательной среды, размножаясь,

По отношению к молекулярному кислороду бактерии можно разделить на три

темном фоне.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

потребляют питательные элементы, что приводит в дальнейшем к истощению

основные группы: облигатные, т.е. обязательные, аэробы, облигатные

Для фазово-контрастной микроскопии используют обычный микроскоп и

питательной среды и прекращению роста бактерий. Культивирование бактерий

анаэробы и факультативные анаэробы.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

дополнительное фазово-контрастное устройство, а также специальные

в такой системе называют периодическим культивированием, а культуру —

Методы культивирования анаэробов.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

осветители.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

периодической. Если же условия культивирования поддерживаются путем

Для культивирования анаэробов необходимо понизить окислительно-

Электронная микроскопия. Позволяет наблюдать объекты, размеры которых

непрерывной подачи свежей питательной среды и оттока такого же объема

восстановительный потенциал среды, создать условия анаэробиоза, т. е.

лежат за пределами разрешающей способности светового микроскопа (0,2

культуральной жидкости, то такое культивирование называется непрерывным,

пониженного содержания кислорода в среде и окружающем ее пространстве.

мкм). Электронный микроскоп применяется для изучения вирусов, тонкого

а культура — непрерывной.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Это достигается применением физических, химических и биологических

строения различных микроорганизмов, макромолекулярных структур и других

При выращивании бактерий на жидкой питательной среде наблюдается

методов.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

субмикроскопических объектов.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

придонный, диффузный или поверхностный (в виде пленки) рост культуры.

Физические методы. Основаны на выращивании микроорганизмов в

№ 18 Типы и механизмы питания бактерий.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Рост периодической культуры бактерий, выращиваемых на жидкой

безвоздушной среде, что достигается:

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

питательной среде, подразделяют на несколько фаз, или периодов:

 

1) посевом в среды, содержащие редуцирующие и легко окисляемые вещества;

Типы питания. Микроорганизмы нуждаются в углеводе, азоте, сере, фосфоре,

1. лаг-фаза;

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

2) посевом микроорганизмов в глубину плотных питательных сред;

 

 

 

 

калии и других элементах. В зависимости от источников углерода для питания

2. фаза логарифмического роста;

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

3) механическим удалением воздуха из сосудов, в которых выращиваются

бактерии делятся на аутотрофы, использующие для построения своих клеток

3. фаза стационарного роста, или максимальной концентрации

 

 

 

анаэробные микроорганизмы;

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

диоксид углерода С02 и другие неорганические соединения, и гетеротрофы,

бактерий;

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

4) заменой воздуха в сосудах каким-либо индифферентным газом.

 

 

 

 

питающиеся за счет готовых органических соединений. Аутотрофными

4. фаза гибели бактерий.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

В качестве редуцирующих веществ обычно используют кусочки (около 0,5 г)

бактериями являются нитрифицирующие бактерии, находящиеся в почве;

Эти фазы можно изобразить графически в виде отрезков кривой размножения

животных или растительных тканей (печень, мозг, почки, селезенка, кровь,

серобактерии, обитающие в воде с сероводородом; железобактерии, живущие в

бактерий, отражающей зависимость логарифма числа живых клеток от

картофель, вата). Эти ткани связывают растворенный в среде кислород и

воде с закисным железом, и др.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

времени их культивирования.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

адсорбируют бактерии. Чтобы уменьшить содержание кислорода в

Гетеротрофы, утилизирующие органические остатки отмерших организмов в

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

питательной среде, ее перед посевом кипятят 10—15 мин, а затем быстро

окружающей среде, называются сапрофитами. Гетеротрофы, вызывающие

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

охлаждают и заливают сверху небольшим количеством стерильного вазе-

заболевания у человека или животных, относят к патогенным и условно-

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

линового масла. Высота слоя масла в пробирке около 1 см.

 

 

 

 

 

 

патогенным. Среди патогенных микроорганизмов встречаются облигатные и

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

В качестве легко окисляемых веществ используют глюкозу, лактозу и

факультативные паразиты (от греч. parasitos — нахлебник). Облигатные

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

муравьинокислый натрий.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

паразиты способны существовать только внутри клетки, например риккетсии,

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Лучшей жидкой питательной средой с редуцирующими веществами является

вирусы и некоторые простейшие.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

среда Китта — Тароцци, которая используется с успехом для накопления

В зависимости от окисляемого субстрата, называемого донором электронов

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

анаэробов при первичном посеве из исследуемого материала и для

или водорода, микроорганизмы делят на две группы. Микроорганизмы,

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

поддержания роста выделенной чистой культуры анаэробов.

 

 

 

 

 

 

использующие в качестве доноров водорода неорганические соединения,

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Посев микроорганизмов в глубину плотных сред производят по способу

называют литотрофны-ми (от греч. lithos — камень), а микроорганизмы,

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Виньяль — Вейона, который состоит в механической защите посевов

использующие в качестве доноров водорода органические соединения, —

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

анаэробов от кислорода воздуха. Берут стеклянную трубку длиной 30 см и диа-

органотрофами.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Лаг-фаза

— период между

посевом бактерий и началом размножения.

метром

3—6

мм. Один

конец

трубки

вытягивают

в

капилляр в

виде

Учитывая источник энергии,

среди

бактерий

различают

фототрофы,

т.е.

пастеровской пипетки,

а у другого конца делают перетяжку.

В оставшийся

Продолжительность

лаг-фазы в

среднем

4—5

ч.

Бактерии

при этом

фотосинтезирующие

(например,

 

сине-зеленые

водоросли,

использующие

широкий

конец

трубки

вставляют

ватную

пробку.

В

пробирки

с

 

увеличиваются в

размерах и

готовятся к

делению;

нарастает

количество

энергию света),

и

хемотрофы,

 

нуждающиеся

в

химических

источниках

расплавленным

и

охлажденным

до

50°С

питательным

агаром

засевают

 

нуклеиновых кислот, белка и других компонентов.

 

 

 

 

 

 

энергии.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

исследуемый материал. Затем насасывают засеянный агар в стерильные трубки

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Фаза логарифмического (экспоненциального) роста является периодом ин-

Механизмы

питания. Поступление

различных

веществ в

бактериальную

Виньяль — Вейона. Капиллярный конец трубки запаивают в пламени горелки

тенсивного

деления

бактерий. Продолжительность

ее около

5— 6 ч. При

клетку зависит от величины и растворимости их молекул в липидах или воде,

и трубки помещают в термостат.

Так создаются благоприятные условия для

оптимальных условиях роста бактерии могут делиться каждые 20—40 мин. Во

рН

среды,

концентрации

веществ,

различных

факторов

проницаемости

роста самых строгих анаэробов.

Для выделения отдельной колонии трубку

время этой

фазы

бактерии

наиболее ранимы, что

объясняется высокой

мембран и др.

Клеточная стенка пропускает небольшие молекулы и ионы,

чувствительностью компонентов метаболизма интенсивно растущей клетки к

надрезают напильником, соблюдая правила асептики, на уровне колонии, ло-

задерживая

макромолекулы

массой более

600

Д.

 

Основным

регулятором

мают, а колонию захватывают стерильной петлей и переносят в пробирку с

 

ингибиторам синтеза белка, нуклеиновых кислот и др.

 

 

 

 

 

поступления

веществ

в

клетку

является

цитоплазматическая

мембрана.

 

 

 

 

 

питательной средой для дальнейшего выращивания и изучения в чистом виде.

Затем наступает фаза стационарного роста, при которой количество жиз-

Условно можно выделить четыре механизма проникновения питательных

неспособных клеток остается без изменений, составляя максимальный уровень

Удаление воздуха

производят путем

его

механического откачивания

из

веществ в

бактериальную

клетку:

это

простая

 

диффузия,

облегченная

специальных

приборов — анаэроста-тов,

в

которые

помещают

чашки

с

 

(М-концентрация). Ее продолжительность выражается в часах и колеблется в

диффузия, активный транспорт, транслокация групп.

 

 

 

 

 

 

 

 

посевом анаэробов. Переносный анаэростат представляет собой толстостенный

 

 

 

 

 

 

 

 

зависимости от вида бактерий, их особенностей и культивирования.

 

 

Наиболее простой

механизм

поступления

веществ

в

клетку

простая

 

 

металлический

цилиндр

с

хорошо

притертой

крышкой

 

резиновой

Завершает

процесс

роста

бактерий фаза

гибели,

характеризующаяся

 

диффузия, при которой перемещение веществ происходит вследствие разницы

прокладкой),

снабженный

отводящим

краном

и

вакуумметром.

После

отмиранием бактерий в условиях истощения источников питательной среды и

их концентрации по обе стороны цитоплазматической мембраны.

Вещества

размещения засеянных чашек или пробирок воздух из анаэростата удаляют с

накопления в ней продуктов метаболизма бактерий.

Продолжительность ее

проходят через липид-ную часть цитоплазматической мембраны (органические

помощью вакуумного насоса.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

колеблется от 10 ч до нескольких недель. Интенсивность роста и размножения

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

молекулы, лекарственные препараты) и реже по заполненным водой каналам в

Замену

воздуха

индифферентным

газом

(азотом,

водородом,

аргоном,

бактерий

зависит

от

многих

факторов, в

том

числе

оптимального состава

цитоплазматической

мембране.

Пассивная

диффузия

осуществляется

без

углекислым

газом)

можно

производить

в

тех

же

анаэростатах

путем

питательной

среды,

окислительно-восстановительного

потенциала,

рН,

затраты энергии.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

вытеснения его газом из баллона.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

температуры и др.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Облегченная

диффузия

происходит

также

 

в

 

результате

разницы

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Химические

методы.

Основаны

на

поглощении

кислорода

воздуха

в

 

 

Размножение бактерий на плотной питательной среде. Бактерии, растущие

концентрации веществ по обе стороны цитоплазматической мембраны. Однако

герметически закрытом сосуде (анаэро-стате, эксикаторе) такими веществами,

на плотных питательных средах, образуют изолированные колонии округлой

этот

процесс

 

осуществляется

с

 

помощью

 

молекул-переносчиков,

как пирогаллол или гидросульфит натрия Na2S204.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

формы с

ровными

или

неровными

краями

(S-

и

R-формы),

различной

 

 

 

 

 

 

 

 

 

локализующихся

в

цитоплазматической

мембране

и

 

обладающих

Биологические методы. Основаны на совместном выращивании анаэробов со

 

консистенции и цвета, зависящего от пигмента бактерий.

 

 

 

 

специфичностью.

Каждый

переносчик

транспортирует

через

мембрану

 

 

 

 

строгими аэробами. Для этого из застывшей агаровой пластинки по диаметру

Пигменты,

растворимые

в воде,

диффундируют

в

питательную среду и

соответствующее

 

вещество

 

или

 

передает

 

 

другому

 

компоненту

чашки вырезают стерильным скальпелем полоску агара шириной около 1 см.

 

 

 

 

 

 

окрашивают её. Другая группа пигментов нерастворима в воде, но растворима

цитоплазматической

мембраны

 

собственно

 

переносчику.

Белками-

Получается два агаровых полудиска в одной чашке. На одну сторону агаровой

 

 

в

органических

растворителях.

И,

наконец,

существуют

пигменты,

не

переносчиками

 

могут

быть

пермеазы,

место

 

синтеза

которых

пластинки засевают аэроб, например часто используют S. aureus или Serratia

 

 

растворимые ни в воде, ни в органических соединениях.

 

 

 

 

 

цитоплазматическая мембрана. Облегченная диффузия протекает без затраты

Наиболее

распространены среди

микроорганизмов

такие

пигменты,

как

marcescens. На другую сторону засевают анаэроб.

Края чашки

заклеивают

энергии, вещества перемещаются от более высокой концентрации к более

пластилином

или

заливают

расплавленным

парафином

и

помещают

в

каротины,

ксантофиллы и меланины.

Меланины являются нерастворимыми

низкой.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

термостат. При наличии подходящих условий в чашке начнут размножаться

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

пигментами черного,

коричневого или красного цвета,

синтезирующимися из

Активный транспорт происходит с помощью пермеаз и направлен на перенос

фенольных соединений. Меланины наряду с каталазой, супероксидцисмутазой

аэробы.

После

того, как весь кислород

в

пространстве

чашки

будет ими

веществ от меньшей концентрации в сторону большей, т.е. как бы против

использован, начнется рост анаэробов (через 3—4 сут). В целях сокращения

и

пероксидазами

защищают

микроорганизмы

от

воздействия

токсичных

течения, поэтому данный про цесс сопровождается затратой метаболической

воздушного

пространства

в чашке

питательную

среду наливают

возможно

перекисных

радикалов

кислорода.

Многие

пигменты

обладают

ан-

энергии (АТФ),

образующейся в результате окислительно-восстановительных

более толстым слоем.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

тимикробным, антибиотикоподобным действием.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

реакций в клетке.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Комбинированные методы. Основаны на сочетании физических, химических

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Перенос (транслокация) групп сходен с активным транспортом, отличаясь

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

и биологических методов создания анаэробиоза.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

тем, что переносимая молекула видоизменяется в процессе переноса, например

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

фосфорилируется.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Выход веществ из клетки осуществляется за счет диффузии и при участии

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

транспортных систем.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

№ 19 Основные принципы культивирования бактерий.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Универсальным инструментом для производства посевов является

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

бактериальная петля. Кроме нее, для посева уколом применяют специальную

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

бактериальную иглу, а для посевов на чашках Петри — металлические или

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

стеклянные шпатели. Для посевов жидких материалов наряду с петлей

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

используют пастеровские и градуированные пипетки. Первые предварительно

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

изготовляют из стерильных легкоплавких стеклянных трубочек, которые

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

вытягивают на пламени в виде капилляров. Конец капилляра сразу же

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

запаивают для сохранения стерильности. У пастеровских и градуированных

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

пипеток широкий конец закрывают ватой, после чего их помещают в

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

специальные пеналы или обертывают бумагой и стерилизуют.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

При пересеве бактериальной культуры берут пробирку в левую руку, а

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

правой, обхватив ватную пробку IV и V пальцами, вынимают ее, пронося над

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

пламенем горелки. Удерживая другими пальцами той же руки петлю,

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

набирают ею посевной материал, после чего закрывают пробирку пробкой.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Затем в пробирку со скошенным агаром вносят петлю с посевным материалом,

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

опуская ее до конденсата в нижней части среды, и

зигзагообразным

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

движением

распределяют

мате риал по скошенной поверхности агара. Вынув

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

петлю, обжигают край пробирки и закрывают ее пробкой. Петлю стерилизуют

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

в пламени горелки и ставят в штатив. Пробирки с посевами надг писывают,

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

указывая дату посева и характер посевного материала

(номер исследования

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

или название культуры).

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Посевы «газоном» производят шпателем на питательный агар в чашке Петри.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Для этого, приоткрыв левой рукой крышку, петлей или пипеткой наносят

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

посевной материал на поверхность питательного агара. Затем проводят

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

шпатель через пламя горелки, остужают его о внутреннюю сторону крышки и

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

растирают материал по всей поверхности среды. После инкубации посева

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

появляется равномерный сплошной рост бактерий.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

№ 20 Искусственные питательные среды, их классификация. Требования,

№ 21 Принципы и методы выделения чистых культур бактерий.

 

№ 22 Ферменты бактерий. Идентификация бактерий по ферментативной

предъявляемые к питательным средам.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

активности.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Чистой культурой называется популяция бактерий одного вида или одной

 

 

 

 

 

 

Питательной средой в микробиологии называют среды, содержащие

разновидности, выращенная на питательной среде. Многие виды бактерий

В основе всех метаболических реакций в бактериальной клетке лежит

различные соединения сложного или простого состава, которые применяются

подразделяют по одному признаку на биологические варианты — биовары.

деятельность ферментов, которые принадлежат к 6 классам: оксиредуктазы,

для размножения бактерий или других микроорганизмов в лабораторных или

Биовары, различающиеся по биохимическим свойствам, называют

трансферазы, гидролазы, лигазы, лиазы, изомеразы. Ферменты, образу-

промышленных условиях.

 

 

 

 

 

хемоварами, по антигенным свойствам — сероварами, по чувствительности к

емые бактериальной клеткой, могут локализоваться как внутри клетки —

Питательные среды готовят из продуктов животного или растительного

фагу — фаговарами. Культуры микроорганизмов одного и того же вида, или

эндоферменты, так и выделяться в окружающую среду — экзоферменты.

происхождения. Большое значение имеет наличие в питательной среде

биовара, выделенные из различных источников или в разное время из одного и

Экзоферменты играют большую роль в обеспечении бактериальной клетки

ростовых факторов, которые катализируют метаболические процессы

того же источника, называют штаммами, которые обычно обозначаются

доступными для проникновения внутрь источниками углерода и энергии.

микробной клетки (витамины группы В, никотиновая кислота и др.).

 

номерами или какими-либо символами. Чистые культуры бактерий в

Большинство гидролаз является экзоферментами, которые, выделяясь в

Искусственные среды готовят по определенным рецептам из различных

диагностических

бактериологических

лабораториях

получают

из

окружающую среду, расщепляют крупные молекулы пептидов, полисахаридов,

настоев или отваров животного или растительного происхождения с

изолированных колоний, пересевая их петлей в пробирки с твердыми или,

липидов до мономеров и димеров, способных проникнуть внутрь клетки. Ряд

добавлением неорганических солей, углеводов и азотистых веществ.

 

реже, жидкими питательными средами.

 

 

 

 

экзоферментов, например гиалуронидаза, коллагеназа и другие, являются

В бактериологической практике чаще всего используют сухие питательные

Колония представляет собой видимое изолированное скопление особей

ферментами

агрессии.

Некоторые

ферменты

локализованы

в

среды, которые получают на основе достижений современной биотехнологии.

одного вида микроорганизмов, образующееся в результате размножения одной

периплазматическом пространстве бактериальной клетки. Они участвуют в

Для их приготовления используют экономически рентабельное непищевое

бактериальной клетки на плотной питательной среде (на поверхности или в

процессах переноса веществ в бактериальную клетку. Ферментативный спектр

сырье: утратившие срок годности кровезаменители (гидролизин—кислотный

глубине ее). Колонии бактерий разных видов отличаются друг от друга по

является таксономическим признаком, характерным для семейства, рода и — в

гидролизат крови животных, аминопептид — ферментативный гидролизат

своей морфологии, цвету и другим признакам.

 

 

 

некоторых случаях — для видов. Поэтому определением спектра

крови; продукты биотехнологии (кормовые дрожжи, кормовой лизин,

Чистую культуру бактерий получают для проведения диагностических

ферментативной активности пользуются при установлении таксономического

виноградная мука, белколизин). Сухие питательные среды могут храниться в

исследований — идентификации, которая достигается путем определения

положения бактерий. Наличие экзоферментов можно определить при помощи

течение длительного времени, удобны при транспортировке и имеют

морфологических, культуральных, биохимических и других признаков

дифференциально-диагностических сред, поэтому для идентификации

относительно стандартный состав.

 

 

 

 

микроорганизма.

 

 

 

 

 

 

бактерий разработаны специальные тест-системы, состоящие из набора

По консистенции питательные среды могут быть жидкими, полужидкими,

Морфологические и тинкториальные признаки бактерий изучают при

дифференциально-диагностических сред.

 

 

 

плотными. Плотные среды готовят путем добавления к жидкой среде 1,5—2%

микроскопическом исследовании мазков, окрашенных разными методами, и

Идентификация бактерий по ферментативной активности.

 

агара, полужидкие — 0,3— 0,7 % агара. Агар представляет собой продукт

нативных препаратов.

 

 

 

 

 

Наиболее часто определяют ферменты класса гидролаз и оксидоредуктаз,

переработки особого вида морских водорослей, он плавится при температуре

Культуральные свойства характеризуются питательными потребностями,

используя специальные методы и среды.

 

 

 

80—86 °С, затвердевает при температуре около 40 °С и в застывшем состоянии

условиями и типом роста бактерий на плотных и жидких питательных средах.

Для определения протеолитической активности микроорганизмы засевают в

придает среде плотность. В некоторых случаях для получения плотных

Они устанавливаются по морфологии колоний и особенностям роста культуры.

столбик желатина уколом. Через 3—5 дней посевы просматривают и отмечают

питательных сред используют желатин (10—15%). Ряд естественных

Биохимические признаки бактерий определяются набором конститутивных и

характер разжижения желатина. При разложении белка некоторыми

питательных сред (свернутая сыворотка крови, свернутый яичный белок) сами

индуцибельных ферментов, присущих определенному роду, виду, варианту. В

бактериями могут выделяться специфические продукты — индол,

по себе являются плотными.

 

 

 

 

 

бактериологической практике таксономическое значение имеют чаще всего

сероводород, аммиак. Для их определения служат специальные индикаторные

По целевому назначению среды подразделяют на основные, элективные и

сахаролитические и протеолитические ферменты бактерий, которые определя-

бумажки, которые помещают между горлышком и ватной пробкой в пробирку

дифференциально-диагностические.

 

 

 

 

ют на дифференциально-диагностических средах.

 

 

 

с МПБ или (и) пептонной водой, засеянными изучаемыми микроорганизмами.

К основным относятся среды, применяемые для выращивания многих

При идентификации бактерий до рода и вида обращают внимание на

Индол (продукт разложения триптофана) окрашивает в розовый цвет полоску

бактерий. Это триптические гидролизаты мясных,

рыбных продуктов, крови

пигменты, окрашивающие колонии и культуральную среду в разнообразные

бумаги, пропитанной насыщенным раствором щавелевой кислоты. Бумага,

животных или казеина, из которых готовят жидкую среду — питательный

цвета. Например, красный пигмент образуют Serratia marcescens, золотистый

пропитанная раствором ацетата свинца, в присутствии сероводорода чернеет.

бульон и плотную — питательный агар. Такие среды служат основой для

пигмент Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк), сине-зеленый

Для определения аммиака используют красную лакмусовую бумажку.

 

приготовления сложных питательных сред — сахарных, кровяных и др.,

пигмент — Pseu-domonas aeruginosa.

 

 

 

 

Для многих микроорганизмов таксономическим признаком служит

удовлетворяющих пищевые потребности патогенных бактерий.

 

Для установления

биовара

(хемовара,

серовара,

фаготипа) проводят

способность разлагать определенные углеводы с образованием кислот и

Элективные питательные среды предназначены для избирательного выделения

дополнительные исследования по выялвениб соответствующего маркера –

газообразных продуктов. Для выявления этого используют среды Гисса, со-

и накопления микроорганизмов определенного вида (или определенной

определению фермента, антигена, чувствительности к Фанам.

 

 

держащие различные углеводы (глюкозу, сахарозу, мальтозу, лактозу и др.).

группы) из материалов, содержащих разнообразную постороннюю

Методы выделения чистых культур бактерий.

 

 

 

Для обнаружения кислот в среду добавлен реактив Андреде, который изменяет

микрофлору. При создании элективных питательных сред исходят из

Универсальным инструментом для производства посевов является

свой цвет от бледно-желтого до красного в интервале рН 7,2—6,5, поэтому

биологических особенностей, которые отличают данные микроорганизмы от

бактериальная петля. Кроме нее, для посева уколом применяют специальную

набор сред Гисса с ростом микроорганизмов называют «пестрым рядом».

 

большинства других. Например, избирательный рост стафилококков на-

бактериальную иглу, а для посевов на чашках Петри — металлические или

Для обнаружения газообразования в жидкие среды опускают поплавки или

блюдается при повышенной концентрации хлорида натрия, холерного

стеклянные шпатели. Для посевов жидких материалов наряду с петлей

используют полужидкие среды с 0,5% агара.

 

 

 

вибриона — в щелочной среде и т. д.

 

 

 

 

используют пастеровские и градуированные пипетки. Первые предварительно

Для того чтобы определить интенсивное кислотообразование, характерное для

Дифференциально-диагностические питательные среды применяются для

изготовляют из стерильных легкоплавких стеклянных трубочек, которые

брожения смешанного типа, в среду с 1% глюкозы и 0,5% пептона (среда

разграничения отдельных видов (или групп) микроорганизмов. Принцип

вытягивают на пламени в виде капилляров. Конец капилляра сразу же

Кларка) добавляют индикатор метиловый красный, который имеет желтый

построения этих сред основан на том, что разные виды бактерий различаются

запаивают для сохранения стерильности. У пастеровских и градуированных

цвет при рН 4,5 и выше, и красный —при более низких значениях рН.

 

между собой по биохимической активности вследствие неодинакового набора

пипеток широкий конец закрывают ватой, после чего их помещают в

Гидролиз мочевины определяют по выделению аммиака (лакмусовая бумажка)

ферментов.

 

 

 

 

 

 

специальные пеналы или обертывают бумагой и стерилизуют.

 

 

и подщелачиванию среды.

 

 

 

 

Особую группу составляют синтетические и полусинтетические питательные

При пересеве бактериальной культуры берут пробирку в левую руку, а

При идентификации многих микроорганизмов используют реакцию Фогеса —

среды. В состав синтетических сред входят химически чистые вещества:

правой, обхватив ватную пробку IV и V пальцами, вынимают ее, пронося над

Проскауэра на ацетоин — промежуточное соединение при образовании

аминокислоты, минеральные соли, углеводы, витамины. В полусинтетические

пламенем горелки. Удерживая другими пальцами той же руки петлю,

бутандиола из пировиноградной кислоты. Положительная реакция свиде-

среды дополнительно включают пептон, дрожжевой экстракт и другие

набирают ею посевной материал, после чего закрывают пробирку пробкой.

тельствует о наличии бутандиолового брожения.

 

 

питательные вещества. Эти среды чаще всего применяют в научно-исследова-

Затем в пробирку со скошенным агаром вносят петлю с посевным материалом,

Обнаружить каталазу можно по пузырькам кислорода, которые начинают

тельской работе и в микробиологической промышленности при получении

опуская ее до конденсата в нижней части среды,

и

зигзагообразным

выделяться сразу же после смешивания микробных клеток с 1 % раствором

антибиотиков, вакцин и других препаратов.

 

 

 

 

движением распределяют мате риал по скошенной поверхности агара. Вынув

перекиси водорода.

 

 

 

 

В последние годы в целях экономии питательных сред и ускоренной

петлю, обжигают край пробирки и закрывают ее пробкой. Петлю стерилизуют

Для определения цитохромоксидазы применяют реактивы: 1) 1% спиртовый

идентификации некоторых микроорганизмов (энтеробактерии, стафилококки,

в пламени горелки и ставят в штатив. Пробирки с посевами надг писывают,

раствор сс-нафтола-1; 2) 1% водный раствор N-диметил-р-фенилендиамина

стрептококки и др.) применяются так называемые микротест-системы (МТС).

указывая дату посева и характер посевного материала

(номер исследования

дигидро-хлорида. О наличии цитохромоксидазы судят по синему

Они представляют собой полистироловые пластины с лунками, в которых

или название культуры).

 

 

 

 

 

окрашиванию, появляющемуся через 2—5 мин.

 

 

содержатся

стерильные

дифференциально-диагностические

среды.

Посевы «газоном» производят шпателем на питательный агар в чашке Петри.

Для определения нитритов используют реактив Грисса: Появление красного

Стерилизацию МТС проводят УФ-облучением. Микротест-системы особенно

Для этого, приоткрыв левой рукой крышку, петлей или пипеткой наносят

окрашивания свидетельствует о наличии нитритов.

 

 

удобны при массовых бактериологических исследованиях в практических

посевной материал на поверхность питательного агара. Затем проводят

 

 

 

 

 

 

лабораториях.

 

 

 

 

 

 

шпатель через пламя горелки, остужают его о внутреннюю сторону крышки и

 

 

 

 

 

 

Требования, предъявляемые к питательным средам.

 

 

растирают материал по всей поверхности среды. После инкубации посева

 

 

 

 

 

 

Любая питательная среда должна отвечать следующим требованиям:

появляется равномерный сплошной рост бактерий.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

содержать все необходимые для размножения микроорганизмов вещества в

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

легкоусвояемой форме; иметь оптимальные влажность, вязкость, рН, быть

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

изотоничной и по возможности прозрачной. Каждую питательную среду

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

стерилизуют определенным способом в зависимости от ее состава.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

№ 23 Внутривидовая идентификация бактерий (эпидемиологическое

№ 24 Особенности физиологии грибов.

 

 

 

 

№ 25 Особенности физиологии простейших.

 

 

маркирование).

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Грибы относятся к царству Fungi (Mycetes, Mycota). Это многоклеточные или

Простейшие — эукариотические одноклеточные микроорганизмы,

С целью выявления эпидемической цепочки заболевания, в т. ч. для

одноклеточные нефотосинтезирующие (бес-хлорофильные) эукариотические

составляющие подцарство Protozoa в царстве животных (Animalia); являются

обнаружения

источника

инфекции,

осуществляют

внутривидовую

микроорганизмы с клеточной стенкой.

 

 

 

 

одноклеточными животными.

 

 

 

 

идентификацию

бактерий,

к-рая заключается в

определении

фаготипа

Грибы по типу питания — гетеротрофы, по отношению к кислороду —

Снаружи простейшие окружены мембраной (пелликулой) — аналогом

(фаговара), изучении антигенных и других свойств выделенных бактерий.

аэробы и факультативные анаэробы. Растут в широких диапазонах температур

цитоплазматической мембраны клеток животных. Они содержат: ядро с

Определение фаготипа - фаготипирование производят при стафилококковой

(оптимальная температура 25—30 °С), имеют половой и бесполый способы

ядерной оболочкой и ядрышком; цитоплазму,

состоящую

из

инфекции, брюшном тифе, паратифе В.

 

 

 

 

размножения. Поэтому грибы широко распространены в окружающей среде,

эндоплазматического ретикулума, митохондрий, лизосом, многочисленных

Фаготипирование — один из методов эпидемиологического маркирования.

особенно в почве. Грибы вместе с сине-зелеными водорослями образуют

рибосом и др.

 

 

 

 

 

Применяется для выявления источника инфекции. Выделение бактерий одного

симбиоз в виде лишайника. В этом симбиозе грибы поглощают воду и

Размеры простейших колеблются в среднем от 2 до 100 мкм. Снаружи они

фаговара от разных больных указывает на общий источник их заражения.

растворимые в ней вещества, а сине-зеленые водоросли поставляют грибам

окружены мембраной (пелликулой) — аналогом цитоплазматической мембраны

Предварительно фаготируется.

 

 

 

 

органические соединения. Другой вид взаимоотношений — микориза —

клеток животных.

 

 

 

 

При внутривидовой идентификации бактерий, т. е. при определении фаговара

симбиоз грибов и корней высших растений.

 

 

 

 

Простейшие представлены 7 типами, из которых четыре типа

(фаготипа) бактерий с помощью фаготи-пирования, на чашку с плотной

Грибы культивируют в течение нескольких суток на сусле-агаре или жидком

(Sarcomastigophora, Apicomplexa, Ciliopkora, Microspora) включают

питательной средой, засеянную чистой культурой возбудителя в виде «газона»,

сусле, среде Сабуро, Чапека и др. Для этой цели можно использовать

возбудителей заболеваний у человека.

 

 

 

наносят капли различных диагностических типоспецифических фагов. Бакте-

лабораторных животных.

 

 

 

 

 

Простейшие имеют: органы движения (жгутики, реснички, псевдоподии),

рии, чувствительные к фагу, лизируются

(образуется

стерильное пятно,

Некоторые грибы обладают диморфизмом, т. е. способностью образовывать

питания (пищеварительные вакуоли) и выделения (сократительные вакуоли);

«бляшка» или так называемая негативная колония фага).

 

 

нитчатые и дрожжевые формы в зависимости от условий роста.

могут питаться в результате фагоцитоза или образования особых структур.

На засеянные «газоном» стафилококки наносятся капли взвеси

Дрожжеподобные формы часто образуются in vivo, т. е. при инфицировании

Некоторые простейшие имеют опорные фибриллы. Размножаются бесполым

стафилококковых бактериофагов. Через сутки после инкубации в термостате

человека грибами.

 

 

 

 

 

 

путем — двойным делением или множественным делением (шизогония), а

видны стерильные зоны отсутствия роста бактерий (стерильные «бляшки») в

Размножение грибов происходит половым и бесполым (вегетативным)

некоторые и половым путем (спорогония). Многие из них при

результате размножения бактериофагов, вызывающих лизис этих бактерий.

способами.

 

 

 

 

 

 

неблагоприятных условиях образуют цисты — покоящиеся стадии, устойчивые

 

 

 

 

 

 

 

Половое размножение грибов происходит с образованием гамет, половых спор

к изменению температуры, влажности и др. При окраске по Романовскому—

 

 

 

 

 

 

 

и других половых форм. Половые формы называются телеоморфами.

 

Гимзеядро простейших окрашивается в красный, а цитоплазма—в голубой

 

 

 

 

 

 

 

Бесполое (вегетативное) размножение грибов происходит с образованием

цвет.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

соответствующих форм, называемых анаморфами.

 

 

 

По типу питания они могут быть гетеротрофами или ауто-трофами. Многие

 

 

 

 

 

 

 

Типы грибов. Выделяют 3 типа грибов, имеющих половой способ

простейшие (дизентерийная амеба, лямблии, трихомонады, лейшмании,

 

 

 

 

 

 

 

размножения (так называемые совершенные грибы): зигомицеты (Zygomycota),

балантидии) могут расти на питательных средах, содержащих нативные белки

 

 

 

 

 

 

 

аскомицеты (Ascomycota) и базидиомицеты (Basidiomycota). Отдельно

и аминокислоты. Для их культивирования используются также культуры

 

 

 

 

 

 

 

выделяют условный, формальный тип/группу грибов — дейтеромицеты

клеток, куриные эмбрионы и лабораторные животные.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

(Deiteromycota), у которых имеется только бесполый способ размножения (так

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

называемые несовершенные грибы).

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

№ 26 Типы взаимодействия вируса с клеткой. Стадии репродукции

 

№ 27 Бактериофаги. Взаимодействие фага с бактериальной клеткой.

№ 29 Методы культивирования вирусов.

 

 

 

вирусов.

 

Умеренные и вирулентные бактериофаги. Лизогения.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Для культивирования вирусов используют культуры клеток, куриные

Типы взаимодействия вируса с клеткой. Различают три типа

 

Бактериофаги — вирусы бактерий, обладающие способностью специфически

эмбрионы и чувствительных лабораторных животных. Эти же методы

взаимодействия вируса с клеткой: продуктивный, абортивный и ин-

 

проникать в бактериальные клетки, репродуцироваться в них и вызывать их

используют и для культивирования риккетсий и хламидий — облигатных

тегративный.

 

растворение (лизис).

 

 

 

внутриклеточных бактерий, которые не растут на искусственных питательных

Продуктивный тип — завершается образованием нового поколения вирионов и

 

Взаимодействие фага с бактериальной клеткой. По механизму

средах.

 

 

 

 

 

гибелью (лизисом) зараженных клеток (цитоли-тическая форма). Некоторые

 

взаимодействия различают вирулентные и умеренные фаги.

Культуры клеток. Культуры клеток готовят из тканей животных или

вирусы выходят из клеток, не разрушая их (нецитолитическая форма).

 

Вирулентные фаги, проникнув в бактериальную клетку, автономно

человека. Культуры подразделяют на первичные (неперевиваемые),

Абортивный тип — не завершается образованием новых вирионов, поскольку

 

репродуцируются в ней и вызывают лизис бактерий. Процесс взаимодействия

полуперевиваемые и перевиваемые.

 

 

 

инфекционный процесс в клетке прерывается на одном из этапов.

 

вирулентного фага с бактерией протекает в виде нескольких стадий и весьма

Приготовление первичной культуры клеток складывается из нескольких

Интегративный тип, или вирогения — характеризуется встраиванием

 

схож с процессом взаимодействия вирусов человека и животных с клеткой

последовательных этапов: измельчения ткани, разъединения клеток путем

(интеграцией) вирусной ДНК в виде провируса в хромосому клетки и их

 

хозяина. Однако для фагов, имеющих хвостовой отросток с сокращающимся

трипсинизации, отмывания полученной однородной суспензии изолированных

совместным сосуществованием (совместная репликация).

 

чехлом, он имеет особенности. Эти фаги адсорбируются на поверхности

клеток от трипсина с последующим суспендированием клеток в питательной

Репродукция вирусов осуществляется в несколько стадий, последовательно

 

бактериальной клетки с помощью фибрилл хвостового отростка. В результате

среде, обеспечивающей их рост, например в среде 199 с добавлением телячьей

сменяющих друг друга: адсорбция вируса на клетке; проникновение вируса в

 

активации фагового фермента АТФазы происходит сокращение чехла

сыворотки крови.

 

 

 

 

 

клетку; «раздевание» вируса; биосинтез вирусных компонентов в клетке;

 

хвостового отростка

и внедрение стержня в

клетку. В процессе

Перевиваемые культуры в отличие от первичных адаптированы к условиям,

формирование вирусов; выход вирусов из клетки.

 

«прокалывания» клеточной стенки бактерии принимает участие фермент

обеспечивающим им постоянное существование in vitro, и сохраняются на

Адсорбция. Взаимодействие вируса с клеткой начинается с процесса

 

лизоцим, находящийся на конце хвостового отростка. Вслед за этим ДНК фага,

протяжении нескольких десятков пассажей.

 

 

 

адсорбции, т. е. прикрепления вирусов к поверхности клетки. Это

 

содержащаяся в головке, проходит через полость хвостового стержня и ак-

Перевиваемые

однослойные

культуры

клеток

приготовляют

из

высокоспецифический процесс. Вирус адсорбируется на определенных

 

тивно впрыскивается в цитоплазму клетки. Остальные структурные элементы

злокачественных и нормальных линий клеток, обладающих способностью

участках клеточной мембраны — так называемых рецепторах. Клеточные

 

фага (капсид и отросток) остаются вне клетки.

 

 

длительно размножаться in vitro в определенных условиях. К ним относятся

рецепторы могут иметь разную химическую природу, представляя собой

 

После биосинтеза фаговых компонентов и их самосборки в бактериальной

злокачественные клетки HeLa, первоначально выделенные из карциномы

белки, углеводные компоненты белков и липидов, липиды. Число

 

клетке накапливается до 200 новых фаговых частиц. Под действием фагового

шейки матки, Нер-3 (из лимфоидной карциномы), а также нормальные клетки

специфических рецепторов на поверхности одной клетки колеблется от 104 до

 

лизоцима и внутриклеточного осмотического давления происходит

амниона человека, почек обезьяны и др.

 

 

 

105. Следовательно, на клетке могут адсорбироваться десятки и даже сотни

 

разрушение клеточной стенки, выход фагового потомства в окружающую

К полуперевиваемым культурам относятся диплоидные клетки человека. Они

вирусных частиц.

 

среду и лизис бактерии. Один литический цикл (от момента адсорбции фагов

представляют собой клеточную систему, сохраняющую в процессе 50

Проникновение в клетку. Существует два способа проникновения вирусов

 

до их выхода из клетки) продолжается 30—40 мин. Процесс бактериофагии

пассажей (до года) диплоидный набор хромосом, типичный для соматических

животных в клетку: виропексис и слияние вирусной оболочки с клеточной

 

проходит несколько циклов, пока не будут лизированы все чувствительные к

клеток используемой ткани. Диплоидные клетки человека не претерпевают

мембраной. При виропексисе после адсорбции вирусов происходят

 

данному фагу бактерии.

 

 

 

злокачественного перерождения и этим выгодно отличаются от опухолевых.

 

инвагинация (впячивание) участка клеточной мембраны и образование

 

Взаимодействие фагов с бактериальной клеткой характеризуется определенной

О размножении (репродукции) вирусов в культуре клеток судят по

внутриклеточной вакуоли, которая содержит вирусную частицу. Вакуоль с

 

степенью специфичности. По специфичности действия различают

цитопатическому действию (ЦПД), которое может быть обнаружено

вирусом может транспортироваться в любом направлении в разные участки

 

поливалентные фаги, способные взаимодействовать с родственными видами

микроскопически и характеризуется морфологическими изменениями клеток.

цитоплазмы или ядро клетки. Процесс слияния осуществляется одним из

 

бактерий, моновалентные фаги, взаимодействующие с бактериями

Характер ЦПД вирусов используют как для их обнаружения (индикации), так и

поверхностных вирусных белков капсидной или суперкапсидной оболочки.

 

определенного вида, и типовые фаги, взаимодействующие с отдельными

для ориентировочной идентификации, т. е. определения их видовой

По-видимому, оба механизма проникновения вируса в клетку не исключают, а

 

вариантами (типами) данного вида бактерий.

 

 

принадлежности.

 

 

 

 

 

дополняют друг друга.

 

Умеренные фаги лизируют не все клетки в популяции, с частью из них они

Один из методов индикации вирусов основан на способности поверхности

«Раздевание». Процесс «раздевания» заключается в удалении защитных

 

вступают в симбиоз, в результате чего ДНК фага встраивается в хромосому

клеток, в которых они репродуцируются, адсорбировать эритроциты —

вирусных оболочек и освобождении внутреннего компонента вируса,

 

бактерии. В таком случае геномом фага называют профаг. Профаг, ставший

реакция гемадсорбции. Для ее постановки в культуру клеток, зараженных

способного вызвать инфекционный процесс. «Раздевание» вирусов происходит

 

частью хромосомы клетки, при ее размножении реплицируется синхронно с

вирусами, добавляют взвесь эритроцитов и после некоторого времени контакта

постепенно, в несколько этапов, в определенных участках цитоплазмы или

 

геном бактерии, не вызывая ее лизиса, и передается по наследству от клетки к

клетки промывают изотоническим раствором хлорида натрия. На поверхности

ядра клетки, для чего клетка использует набор специальных ферментов. В

 

клетке неограниченному числу потомков.

 

 

пораженных вирусами клеток остаются прилипшие эритроциты.

 

случае проникновения вируса путем слияния вирусной оболочки с клеточной

 

Биологическое явление

симбиоза микробной клетки

с умеренным фагом

Другой метод — реакция гемагглютинации (РГ). Применяется для

мембраной процесс проникновения вируса в клетку сочетается с первым

 

(профагом) называется лизогенией, а культура бактерий, содержащая профаг,

обнаружения вирусов в культуральной жидкости культуры клеток либо

этапом его «раздевания». Конечными продуктами «раздевания» являются

 

получила название лизогенной. Это название отражает способность профага

хорионаллантоисной или амниотической жидкости куриного эмбриона.

 

сердцевина, нуклеокапсид или нуклеиновая кислота вируса.

 

самопроизвольно или под действием ряда физических и химических факторов

Количество вирусных частиц определяют методом титрования по ЦПД в

Биосинтез компонентов вируса. Проникшая в клетку вирусная нуклеиновая

 

исключаться из хромосомы клетки и переходить в цитоплазму, т. е. вести себя

культуре клеток. Для этого клетки культуры заражают десятикратным

кислота несет генетическую информацию, которая успешно конкурирует с

 

как вирулентный фаг, лизирующий бактерии.

 

 

разведением вируса. После 6—7-дневной инкубации их просматривают на

генетической информацией клетки. Она дезорганизует работу клеточных

 

Лизогенные культуры по своим основным свойствам не отличаются от

наличие ЦПД. За титр вируса принимают наибольшее разведение, которое

систем, подавляет собственный метаболизм клетки и заставляет ее

 

исходных, но они невосприимчивы к повторному заражению гомологичным

вызывает ЦПД в 50 % зараженных культур. Титр вируса выражают

синтезировать новые вирусные белки и нуклеиновые кислоты, идущие на

 

или близкородственным фагом и, кроме того, приобретают дополнительные

количеством цитопатических доз.

 

 

 

 

построение вирусного потомства.

 

свойства, которые находятся под контролем генов профага. Изменение свойств

Более точным количественным методом учета отдельных вирусных частиц

Реализация генетической информации вируса осуществляется в соответствии с

 

микроорганизмов под влиянием профага получило название фаговой

является метод бляшек.

 

 

 

 

процессами транскрипции, трансляции и репликации.

 

конверсии. Последняя имеет место у многих видов микроорганизмов и

Некоторые вирусы можно обнаружить и идентифицировать по включениям,

Формирование (сборка) вирусов. Синтезированные вирусные нуклеиновые

 

касается различных их свойств: культуральных, биохимических, токсигенных,

которые они образуют в ядре или цитоплазме зараженных клеток.

 

кислоты и белки обладают способностью специфически «узнавать» друг друга

 

антигенных, чувствительности к антибиотикам и др. Кроме того, переходя из

Куриные эмбрионы. Куриные эмбрионы

по сравнению с культурами

и при достаточной их концентрации самопроизвольно соединяются в

 

интегрированного состояния в вирулентную форму, умеренный фаг может

клеток значительно реже бывают контаминированы вирусами и микоплазмами,

результате гидрофобных, солевых и водородных связей.

 

захватить часть хромосомы клетки и при лизисе последней переносит эту часть

а также обладают сравнительно высокой жизнеспособностью и устойчивостью

Существуют следующие общие принципы сборки вирусов, имеющих разную

 

хромосомы в другую клетку. Если микробная клетка станет лизогенной, она

к различным воздействиям.

 

 

 

 

структуру:

 

приобретает новые свойства. Таким образом, умеренные фаги являются

Для получения чистых культур риккетсий, хламидий. и ряда вирусов в

1. Формирование вирусов является многоступенчатым процессом с

 

мощным фактором изменчивости микроорганизмов.

 

 

диагностических целях, а также для приготовления разнообразных препаратов

образованием промежуточных форм;

 

№ 28 Применение фагов в биотехнологии, микробиологии и медицине.

(вакцины, диагностикумы) используют 8—12-дневные куриные эмбрионы. О

2. Сборка просто устроенных вирусов заключается во взаимодействии молекул

 

 

 

 

 

размножении упомянутых микроорганизмов судят по морфологическим из-

вирусных нуклеиновых кислот с капсидными белками и образовании

 

Практическое применение фагов. Бактериофаги используют в лабораторной

менениям, выявляемым после вскрытия эмбриона на его оболочках.

 

нуклеокапсидов (например, вирусы полиомиелита). У сложно устроенных

 

диагностике инфекций при внутривидовой идентификации бактерий, т. е.

О репродукции некоторых вирусов, например гриппа, оспы, можно судить по

вирусов сначала формируются нуклеокапсиды, с которыми взаимодействуют

 

определении фаговара (фаготипа). Для этого применяют метод

реакции гемагглютинации (РГА) с куриными или другими эритроцитами.

 

белки суперкапсидных оболочек (например, вирусы гриппа);

 

фаготипирования, основанный на строгой специфичности действия фагов: на

К недостаткам данного метода относятся невозможность обнаружения

3. Формирование вирусов происходит не во внутриклеточной жидкости, а на

 

чашку с плотной питательной средой, засеянной «газоном» чистой культурой

исследуемого микроорганизма без предварительного вскрытия эмбриона, а

ядерных или цитоплазматических мембранах клетки;

 

возбудителя, наносят капли различных диагностических типоспецифических

также наличие в нем большого количества белков и других соединений,

4. Сложно организованные вирусы в процессе формирования включают в свой

 

фагов. Фаговар бактерии определяется тем типом фага, который вызвал ее

затрудняющих последующую очистку риккетсий или вирусов при

состав компоненты клетки-хозяина (липиды, углеводы).

 

лизис (образование стерильного пятна, «бляшки», или «негативной колонии»,

изготовлении различных препаратов.

 

 

 

Выход вирусов из клетки. Различают два основных типа выхода вирусного

 

фага). Методику фаготипирования используют для выявления источника и

Лабораторные животные. Видовая чувствительность животных к

потомства из клетки. Первый тип — взрывной — характеризуется

 

путей распространения инфекции (эпидемиологическое маркирование).

определенному вирусу и их возраст определяют репродуктивную способность

одновременным выходом большого количества вирусов. При этом клетка

 

Выделение бактерий одного фаговара от разных больных указывает на общий

вирусов. Во многих случаях только новорожденные животные чувствительны

быстро погибает. Такой способ выхода характерен для вирусов, не имеющих

 

источник их заражения.

 

 

 

к тому или иному вирусу (например, мыши-сосунки — к вирусам Коксаки).

 

суперкапсидной оболочки. Второй тип — почкование. Он присущ вирусам,

 

По содержанию бактериофагов в объектах окружающей среды (например, в

Преимущество данного метода перед другими состоит в возможности

имеющим суперкапсидную оболочку. На заключительном этапе сборки нук-

 

воде) можно судить о присутствии в них соответствующих патогенных

выделения тех вирусов, которые плохо репродуцируются в культуре или

леокапсиды сложно устроенных вирусов фиксируются на клеточной

 

бактерий. Подобные исследования проводят при эпидемиологическом анализе

эмбрионе. К его недостаткам относятся контаминация организма подопытных

плазматической мембране, модифицированной вирусными белками, и

 

вспышек инфекционных болезней.

 

 

животных посторонними вирусами и микоплазмами, а также необходимость

постепенно выпячивают ее. В результате выпячивания образуется «почка»,

 

Фаги применяют также для лечения и профилактики ряда бактериальных

последующего заражения культуры клеток для получения чистой линии данно-

содержащая нуклеокапсид. Затем «почка» отделяется от клетки. Таким

 

 

 

го вируса, что удлиняет сроки исследования.

 

 

 

 

инфекций. Производят брюшнотифозный, сальмонеллезный, дизентерийный,

 

 

 

образом, внешняя оболочка этих вирусов формируется в процессе их выхода из

 

синегнойный, стафилококковый, стрептококковый фаги и комбинированные

 

 

 

 

 

 

клетки. При таком механизме клетка может продолжительное время продуци-

 

препараты (колипротейный, пиобактериофаги и др). Бактериофаги назначают

 

 

 

 

 

 

ровать вирус, сохраняя в той или иной мере свои основные функции.

 

по показаниям перорально, парентерально или местно в виде жидких, таблети-

 

 

 

 

 

 

Время, необходимое для осуществления полного цикла репродукции вирусов,

 

рованных форм, свечей или аэрозолей.

 

 

 

 

 

 

 

 

варьирует от 5—6 ч (вирусы гриппа, натуральной оспы и др.) до нескольких

 

Бактериофаги широко применяют в генной инженерии и биотехнологии в

 

 

 

 

 

 

суток (вирусы кори, аденовирусы и др.). Образовавшиеся вирусы способны

 

качестве векторов для получения рекомбинантных ДНК.

 

 

 

 

 

 

инфицировать новые клетки и проходить в них указанный выше цикл репро-

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

дукции.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

№ 30 Нормальная микрофлора организма человека и ее функции.

 

№ 31 Дисбиозы. Дисбактериозы. Препараты для восстановления

№ 32 Действие физических и химических факторов на микроорганизмы.

 

 

 

 

 

 

 

 

нормальной микрофлоры: пробиотики, эубиотики.

 

 

 

 

Понятие о стерилизации, дезинфекции, асептике и антисептике.

Организм человека заселен (колонизирован) более чем 500 видов

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

микроорганизмов, составляющих нормальную микрофлору человека,

Состояние эубиоза динамического равновесия нормальной микрофлоры и

Влияние физических факторов.

 

 

находящихся в состоянии равновесия (эубиоза) друг с другом и организмом

организма человека — может нарушаться под влиянием факторов окружающей

Влияние температуры. Различные группы микроорганизмов развиваются при

человека. Микрофлора представляет собой стабильное сообщество

среды, стрессовых воздействий, широкого и бесконтрольного применения

определенных диапазонах температур. Бактерии, растущие при низкой

микроорганизмов, т.е. микробиоценоз. Она колонизирует поверхность тела и

антимикробных

препаратов,

лучевой

терапии

и

химиотерапии,

температуре, называют психрофилами, при средней (около 37 °С) —

полости, сообщающиеся с окружающей средой. Место обитания сообщества

нерационального питания, оперативных вмешательств и т. д. В результате

мезофилами, при высокой — термофилами.

 

микроорганизмов называется биотопом. В норме микроорганизмы отсутству-

нарушается колонизационная резистентность. Аномально размножившиеся

К психрофильным микроорганизмам относится большая группа сапрофитов —

ют в легких и матке. Различают нормальную микрофлору кожи, слизистых

транзиторные микроорганизмы продуцируют токсичные продукты метабо-

обитателей почвы, морей, пресных водоемов и сточных вод (железобактерии,

оболочек рта, верхних дыхательных путей, пищеварительного тракта и

лизма — индол, скатол, аммиак, сероводород.

 

 

 

 

 

псевдомонады, светящиеся бактерии, бациллы). Некоторые из них могут

мочеполовой системы. Среди нормальной микрофлоры выделяют резидентную

Состояния, развивающиеся в результате утраты нормальных функций

вызывать порчу продуктов питания на холоде. Способностью расти при низких

и транзиторную микрофлору. Резидентная (постоянная) облигатная

микрофлоры, называются дисбактериозом и дисбиозом.

 

 

температурах обладают и некоторые патогенные бактерии (возбудитель

микрофлора представлена микроорганизмами, постоянно присутствующими в

При дисбактериозе происходят стойкие количественные и качественные

псевдотуберкулеза размножается при температуре 4 °С). В зависимости от

организме. Транзиторная (непостоянная) микрофлора не способна к

изменения бактерий, входящих в состав нормальной микрофлоры. При

температуры культивирования свойства бактерий меняются. Интервал

длительному существованию в организме.

 

 

 

 

 

дисбиозе изменения происходят и среди других групп микроорганизмов (виру-

температур, при котором возможен рост психрофильных бактерий, колеблется

Микрофлора кожи имеет большое значение в распространении

сов, грибов и др.). Дисбиоз и дисбактериоз могут приводить к эндогенным

от -10 до 40 °С, а температурный оптимум — от 15 до 40 °С, приближаясь к

микроорганизмов в воздухе. На коже и в ее более глубоких слоях (волосяные

инфекциями.

 

 

 

 

 

 

 

температурному оптимуму мезофильных бактерий.

 

мешочки, просветы сальных и потовых желез) анаэробов в 3—10 раз больше,

Дисбиозы классифицируют по этиологии (грибковый, стафилококковый,

Мезофилы включают основную группу патогенных и условно-патогенных

чем аэробов. Кожу колонизируют пропионибактерии, коринеформные бак-

протейный и др.) и по локализации (дисбиоз рта, кишки, влагалища и т. д.).

бактерий. Они растут в диапазоне температур 10— 47 °С; оптимум роста для

терии, стафилококки, стрептококки, дрожжи Pityrosporum, дрож-жеподобные

Изменения в составе и функциях нормальной микрофлоры сопровождаются

большинства из них 37 °С.

 

 

грибы Candida, редко микрококки, Мус. fortuitum. На 1 см2 кожи приходится

различными нарушениями: развитием инфекций, диарей, запоров, синдрома

При более высоких температурах (от 40 до 90 °С) развиваются термофильные

менее 80 000 микроорганизмов. В норме это количество не увеличивается в

мальабсорбции, гастритов, колитов, язвенной болезни, злокачественных

бактерии. На дне океана в горячих сульфидных водах живут бактерии,

результате действия бактерицидных стерилизующих факторов кожи.

 

новообразований,

аллергий,

мочекаменной

болезни,

гипо-

и

развивающиеся при температуре 250—300 °С и давлении 262 атм.

В верхние дыхательные пути попадают пылевые частицы, нагруженные

гиперхолестеринемии, гипо- и гипертензии, кариеса, артрита, поражений

Термофилы обитают в горячих источниках, участвуют в процессах

микроорганизмами, большая часть которых задерживается в носо- и

печени и др.

 

 

 

 

 

 

 

самонагревания навоза, зерна, сена. Наличие большого количества термофилов

ротоглотке. Здесь растут бактероиды, коринеформные бактерии, гемофильные

Нарушения нормальной микрофлоры человека определяются следующим

в почве свидетельствует о ее загрязненности навозом и компостом. Поскольку

палочки, пептококки, лактобактерии, стафилококки, стрептококки,

образом:

 

 

 

 

 

 

 

навоз наиболее богат термофилами, их рассматривают как показатель

непатогенные нейссерии и др. Трахея и бронхи обычно стерильны.

 

1. Выявление видового и количественного состава представителей

загрязненности почвы.

 

 

 

Микрофлора

пищеварительного

тракта

 

является

наиболее

микробиоценоза определенного биотопа (кишки, рта, влагалища, кожи и т. д.)

Хорошо выдерживают микроорганизмы действие низких температур. Поэтому

представительной по своему качественному и количественному составу. При

— путем высева из разведений исследуемого материала или путем отпечатков,

их можно долго хранить в замороженном состоянии, в том числе при

этом микроорганизмы свободно обитают в полости пищеварительного тракта,

смыва на соответствующие питательные среды (среда Блаурокка — для

температуре жидкого газа (—173 °С).

 

 

а также колонизируют слизистые оболочки.

 

 

 

 

 

бифидобактерий; среда МРС-2 — для лактобактерий; анаэробный кровяной

Высушивание. Обезвоживание вызывает нарушение функций большинства

В полости рта обитают актиномицеты, бактероиды, бифи-цобактерии,

агар — для бактероидов; среда Левина или Эндо — для энтеробактерий;

микроорганизмов. Наиболее чувствительны к высушиванию патогенные

эубактерии,

фузобактерии,

лактобактерии,

гемофильные

палочки,

желчно-кровяной агар — для энтерококков; кровяной агар — для

микроорганизмы (возбудители гонореи, менингита, холеры, брюшного тифа,

лептотрихии, нейссерии, спирохеты, стрептококки, стафилококки, вейлонеллы

стрептококков и гемофилов; мясопептонный агар с фурагином — для

дизентерии и др.). Более устойчивыми являются микроорганизмы,

и др. Обнаруживаются также грибы рода Candida и простейшие. Ассоцианты

синегнойной палочки, среда Сабуро — для грибов и др.).

 

 

 

защищенные слизью мокроты.

 

 

нормальной микрофлоры и продукты их жизнедеятельности образуют зубной

2. Определение в исследуемом материале микробных метаболитов — маркеров

Высушивание под вакуумом из замороженного состояния — лиофилизацию —

налет.

 

 

 

 

 

 

 

дисбио-за (жирных кислот, гидроксижирных кислот, жирнокислотных

используют

для

продления

жизнеспособности,

консервирования

Микрофлора желудка представлена лактобациллами и дрожжами,

альдегидов, ферментов и др.). Например, обнаружение в фекалиях бета-

микроорганизмов. Лиофилизированные культуры микроорганизмов и

единичными грамотрицательными бактериями. Она несколько беднее, чем,

аспартил-глицина и бета-аспартиллизина свидетельствует о нарушении

иммунобиологические препараты длительно (в течение нескольких лет)

например, кишечника, так как желудочный сок имеет низкое значение рН,

кишечного микробиоценоза, так как в норме эти дипеп-тиды

сохраняются, не изменяя своих первоначальных свойств.

 

неблагоприятное для жизни многих микроорганизмов. При гастритах,

метаболизируются кишечной анаэробной микрофлорой.

 

 

 

Действие излучения. Неионизирующее излучение — ультрафиолетовые и

язвенной болезни желудка обнаруживаются изогнутые формы бактерий —

Для восстановления нормальной микрофлоры: а) проводят селективную

инфракрасные лучи солнечного света, а также ионизирующее излучение —

Helicobacter pylori, которые являются этиологическими факторами

деконтами-нацию; б) назначают препараты пробиотиков (эубиотиков),

гамма-излучение радиоактивных веществ и электроны высоких энергий

патологического процесса.

 

 

 

 

 

 

полученные из лиофильно высушенных живых бактерий — представителей

губительно действуют на микроорганизмы через короткий промежуток

В тонкой кишке микроорганизмов больше, чем в желудке; здесь

нормальной микрофлоры кишечника — бифидобактерий (бифидумбактерин),

времени. УФ-лучи применяют для обеззараживания воздуха и различных

обнаруживаются бифидобактерии, клостридии, эубактерии, лактобациллы,

кишечной палочки (колибактерин), лактобактерий (лактобактерин) и др.

 

предметов в больницах, родильных домах, микробиологических лабораториях.

анаэробные кокки.

 

 

 

 

 

 

Пробиотики — препараты, оказывающие при приеме per os

С этой целью используют бактерицидные лампы УФ-излучения с длиной

Наибольшее количество микроорганизмов накапливается в толстой кишке. В

нормализирующее действие на организм человека и его микрофлору.

 

волны 200—450 нм.

 

 

 

1 г фекалий содержится до 250 млрд микробных клеток. Около 95 % всех

 

 

 

 

 

 

 

 

Ионизирующее излучение применяют для стерилизации одноразовой

видов микроорганизмов составляют анаэробы. Основными представителями

 

 

 

 

 

 

 

 

пластиковой микробиологической посуды, питательных сред, перевязочных

микрофлоры толстой кишки являются: грамположительные анаэробные

 

 

 

 

 

 

 

 

материалов, лекарственных препаратов и др. Однако имеются бактерии,

палочки (бифидобактерии, лактобациллы, эубактерии); грамположительные

 

 

 

 

 

 

 

 

устойчивые к действию ионизирующих излучений, например Micrococcus

спорообразующие анаэробные палочки (клостридии, перфрингенс и др.);

 

 

 

 

 

 

 

 

radiodurans была выделена из ядерного реактора.

 

энтерококки; грамотрицательные анаэробные палочки (бактероиды);

 

 

 

 

 

 

 

 

Действие химических веществ. Химические вещества могут оказывать

грамотрицательные факультативно-анаэробные палочки (кишечные палочки и

 

 

 

 

 

 

 

 

различное действие на микроорганизмы: служить источниками питания; не

сходные с ними бактерии.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

оказывать какого-либо влияния; стимулировать или подавлять рост.

Микрофлора толстой кишки — своеобразный экстракорпоральный орган.

 

 

 

 

 

 

 

 

Химические вещества, уничтожающие микроорганизмы в окружающей среде,

Она является антагонистом гнилостной микрофлоры, так как продуцирует

 

 

 

 

 

 

 

 

называются дезинфицирующими. Антимикробные химические вещества могут

молочную, уксусную кислоты, антибиотики и др. Известна ее роль в водно-

 

 

 

 

 

 

 

 

обладать бактерицидным, вирулицидным, фунгицидным действием и т.д.

солевом обмене, регуляции газового состава кишечника, обмене белков,

 

 

 

 

 

 

 

 

Химические вещества, используемые для дезинфекции, относятся к различным

углеводов, жирных кислот, холестерина и нуклеиновых кислот, а также

 

 

 

 

 

 

 

 

группам, среди которых наиболее широко представлены вещества,

продукции биологически активных соединений — антибиотиков, витаминов,

 

 

 

 

 

 

 

 

относящиеся к хлор-, йод- и бромсодержащим соединениям и окислителям.

токсинов и др. Морфокинетическая роль микрофлоры заключается в ее

 

 

 

 

 

 

 

 

Антимикробным действием обладают также кислоты и их соли (оксолиновая,

участии в развитии органов и систем организма; она принимает участие также

 

 

 

 

 

 

 

 

салициловая, борная); щелочи (аммиак и его соли,

 

в физиологическом воспалении слизистой оболочки и смене эпителия,

 

 

 

 

 

 

 

 

Стерилизация – предполагает полную инактивацию микробов в объектах,

переваривании и детокси-кации экзогенных субстратов и метаболитов, что

 

 

 

 

 

 

 

 

подвергшихся обработке.

 

 

сравнимо с функцией печени. Нормальная микрофлора выполняет, кроме того,

 

 

 

 

 

 

 

 

Дезинфекция — процедура, предусматривающая обработку загрязненного

антимутагенную роль, разрушая канцерогенные вещества.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

микробами предмета с целью их уничтожения до такой степени, чтобы они не

Пристеночная микрофлора кишечника колонизирует слизистую оболочку в

 

 

 

 

 

 

 

 

смогли вызвать инфекцию при использовании данного предмета. Как правило,

виде микроколоний, образуя своеобразную биологическую пленку, состоящую

 

 

 

 

 

 

 

 

при дезинфекции погибает большая часть микробов (в том числе все

из микробных тел и экзополи-сахаридного матрикса. Экзополисахариды

 

 

 

 

 

 

 

 

патогенные), однако споры и некоторые резистентные вирусы могут остаться в

микроорганизмов, называемые гликокаликсом, защищают микробные клетки

 

 

 

 

 

 

 

 

жизнеспособном состоянии.

 

 

от разнообразных физико-химических и биологических воздействий.

 

 

 

 

 

 

 

 

Асептика – комплекс мер, направленных на предупреждение попадания

Слизистая оболочка кишечника также находится под защитой биологической

 

 

 

 

 

 

 

 

возбудителя инфекции в рану, органы больного при операциях, лечебных и

пленки.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

диагностических процедурах. Методы асептики применяют для борьбы с

Важнейшей функцией нормальной микрофлоры кишечника является ее

 

 

 

 

 

 

 

 

экзогенной инфекцией, источниками которой являются больные и

участие в колонизационной резистентности, под которой понимают

 

 

 

 

 

 

 

 

бактерионосители.

 

 

 

совокупность

защитных

факторов

организма

и

конкурентных,

 

 

 

 

 

 

 

 

Антисептика – совокупность мер, направленных на уничтожение микробов в

антагонистических и других особенностей анаэробов кишечника, придающих

 

 

 

 

 

 

 

 

ране, патологическом очаге или организме в целом, на предупреждение или

стабильность микрофлоре и предотвращающих колонизацию слизистых

 

 

 

 

 

 

 

 

ликвидацию воспалительного процесса.

 

оболочек посторонними микроорганизмами.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Нормальная микрофлора влагалища включает бактероиды, лактобактерии,

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

пептострептококки и клостридии.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Представители нормальной микрофлоры при снижении сопротивляемости

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

организма могут вызвать гнойно-воспалительные процессы, т.е. нормальная

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

микрофлора может стать источником аутоинфекции, или эндогенной

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

инфекции. Она также является источником генов, например генов

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

лекарственной устойчивости к антибиотикам.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

№ 33 Методы стерилизации, аппаратура.

 

№ 34 Методы санитарно-микробиологического исследования воды.

№ 36 Строение генома бактерий. Понятие о генотипе и фенотипе. Виды

 

 

 

 

 

 

 

 

 

изменчивости. Подвижные генетические элементы, их роль в эволюции

Стерилизация предполагает полную инактивацию микробов в объектах,

Загрязненность воды определяется по общей микробной обсемененности и

бактерий.

 

 

 

 

подвергающихся обработке.

 

 

 

обнаружению санитарно-показательных микроорганизмов — индикаторов

 

 

 

 

 

Существует три основных метода стерилизации: тепловой, лучевой,

наличия выделений человека или животных. В воде регистрируют кишечную

Бактериальный геном состоит из генетических элементов, способных к

химической.

 

 

 

 

 

палочку, БГКП (колиформные палочки), энтерококк, стафилококки;

самостоятельной репликации, т. е. репликонов. Репликонами являются

Тепловая стерилизация основана на чувствительности микробов к высокой

На основании количественного выявления этих санитарно-показательных бак-

бактериальная хромосома и плазмиды.

 

 

 

температуре. При 60 "С и наличии воды происходит денатурация белка,

терий вычисляются индекс БГКП (число БГКП в 1 л воды), перфрингенс-титр,

Наследственная информация хранится у бактерий в форме последовательности

деградация нуклеиновых кислот, липидов, вследствие чего вегетативные фор-

титр энтерококка и т.д. Так, например, титр энтерококка воды — это

нуклеотидов ДНК, которые определяют последовательность аминокислот в

мы микробов погибают. Споры, содержащие очень большое количество воды в

наименьшее количество воды, в котором определяется энтерококк.

белке. Каждому белку соответствует свой ген, т. е. дискретный участок на

связанном состоянии и обладающие плотными оболочками, инактивируются

К бактериям группы кишечной палочки относят грамотрицательные

ДНК, отличающийся числом и специфичностью последовательности

при 160—170 °С.

 

 

 

 

 

палочки, сбраживающие с образованием кислоты и газа лактозу или глюкозу

нуклеотидов.

 

 

 

 

Для тепловой стерилизации применяют, в основном, сухой жар и пар под

при температуре 37°С в течение 24-48 ч и не обладающие оксидазной

Бактериальная хромосома представлена одной двухцепочечной молекулой

давлением.

 

 

 

 

 

активностью. Наиболее часто этот показатель применяют как индикатор

ДНК кольцевой формы. Размеры бактериальной хромосомы у различных

Стерилизацию сухим

жаром

осуществляют в воздушных

стерилизаторах

фекального загрязнения воды. Другой сходный показатель фекального

представителей царства Procaryotae варьируют. Бактериальная хромосома

(прежнее название — «сухожаровые шкафы или печи Пастера»). Воздушный

загрязнения — общие колиформные бактерии: грамотрицательные, оксида-

формирует компактный нуклеоид бактериальной клетки. Бактериальная

стерилизатор представляет собой металлический плотно закрывающийся

заотрицательные палочки, ферментирующие лактозу или маннит (глюкозу) с

хромосома имеет гаплоидный набор генов. Она кодирует жизненно важные

шкаф, нагревающийся с помощью электричества и снабженный термометром.

образованием альдегида, кислоты и газа при температуре 37°С в течение 24

для бактериальной клетки функции.

 

 

 

Обеззараживание материала в нем производят, как правило, при 160 °С в

часов.

Вместо последнего термина предлагается использовать термин

Плазмиды бактерий представляют собой двухцепочечные молекулы ДНК.

течение 120 мин. Однако возможны и другие режимы: 200 °С - 30 мин, 180 "С -

«бактерии семейства Enterobacteriaceae», так как все бактерии этого семейства

Они кодируют не основные для жизнедеятельности бактериальной клетки

40 мин.

 

 

 

 

 

 

имеют индикаторное значение. К бактериям семейства Enterobacteriaceae

функции, но придающие бактерии преимущества при попадании в

Стерилизуют сухим жаром лабораторную посуду и другие изделия из стекла,

относятся грамотрицательные, оксидазаотрицательные палочки, растущие на

неблагоприятные условия существования.

 

 

инструменты, силиконовую резину, т. е. объекты, которые не теряют своих

лактозосодержащих средах типа среды Эндо и ферментирующие глюкозу до

Свойства микроорганизмов, как и любых других организмов, определяются их

качеств при высокой температуре.

 

 

кислоты и газа при температуре 37°С в течение 24 часов; колиформные

генотипом, т.е. совокупностью генов данной особи. Термин «геном» в

Большая часть стерилизуемых предметов не выдерживает подобной обработки,

бактерии (палочки).

отношении микроорганизмов — почти синоним понятия «генотип».

 

и поэтому их обеззараживают в паровых стерилизаторах.

 

При бактериальном загрязнении воды свыше допустимых норм следует

Фенотип представляет собой результат взаимодействия между генотипом и

Обработка паром под давлением в паровых стерилизаторах (старое название —

провести дополнительное исследование на наличие бактерий — показателей

окружающей средой, т. е. проявление генотипа в конкретных условиях

«автоклавы») является наиболее универсальным методом стерилизации.

свежего фекального загрязнения. К таким бактериям относят

обитания. Фенотип микроорганизмов хотя и зависит от окружающей среды, но

Паровой стерилизатор (существует множество его модификаций) —

термотолерантные колиформные бактерии, фекальные кишечные палочки,

контролируется генотипом, так как характер и степень возможных для данной

металлический цилиндр с прочными стенками, герметически закрывающийся,

ферментирующие лактозу до кислоты и газа при температуре 44 °С в течение

клетки стенотипических изменений определяются набором генов, каждый из

состоящий из водопаровой и стерилизующей камер. Аппарат снабжен

24 часов и не растущие на нитратной среде. О свежем фекальном загрязнении

которых представлен определенным участком молекулы ДНК.

 

манометром, термометром и другими контрольно-измерительными приборами.

свидетельствует также выявление энтерококка. На давнее фекальное

В основе изменчивости лежит либо изменение реакции генотипа на факторы

В автоклаве создается повышенное давление, что приводит к увеличению

загрязнение указывают отсутствие БГКП и наличие определенного количества

окружающей среды, либо изменение самого генотипа в результате мутации

температуры кипения.

 

 

 

 

клостридш перфрингенс, т. е. наиболее устойчивых споро-образующих

генов или их рекомбинации. В связи с этим фенотипическую изменчивость

Поскольку кроме высокой температуры на микробы оказывает воздействие и

бактерий.

подразделяют на наследственную и ненаследственную.

 

 

пар, споры погибают уже при 120 °С. Наиболее распространенный режим

В соответствии с нормативными документами регламентируются следующие

Ненаследственная (средовая, модификационная) изменчивость обусловлена

работы парового стерилизатора: 2 атм — 121 °С — 15—20 мин. Время

нормативы микробиологических показателей питьевой воды при

влиянием внутри- и внеклеточных факторов на проявление генотипа. При

стерилизации уменьшается при повышении атмосферного давления, а

централизованном водоснабжении:

устранении фактора, вызвавшего модификацию, данные изменения исчезают.

следовательно, и температуры кипения (136 °С — 5 мин). Микробы погибают

1. Общее микробное число воды не должно превышать 100 микробов в 1 мл

Наследственная (генотипическая) изменчивость, связанная с мутациями, —

за несколько секунд, но обработку материала производят в течение большего

исследуемой воды;

мутационная изменчивость. Основу мутации составляют изменения

времени, так как, во-первых, высокая температура должна быть и внутри

2. Общие колиформные бактерии должны отсутствовать в 100 мл

последовательности нуклеотидов в ДНК, полная или частичная их утрата, т. е.

стерилизуемого материала и, во-вторых, существует так называемое поле

исследуемой воды;

происходит структурная перестройка генов, проявляющаяся фенотипически в

безопасности (рассчитанное на небольшую неисправность автоклава).

3. Термотолерантные колиформные бактерии должны отсутстовать в 100

виде измененного признака.

 

 

 

Стерилизуют в автоклаве бульшую часть предметов: перевязочный материал,

мл исследуемой воды;

Наследственная изменчивость, связанная с рекомбинациями, называется

белье, коррозионно-устойчивые металлические инструменты, питательные

4. Колифаги не должны определяться в 100 мл исследуемой воды (учет по

рекомбинационной изменчивостью.

 

 

 

среды, растворы, инфекционный материал и т. д.

 

бляшкооб-разующим единицам);

Подвижные генетические элементы.

 

 

 

Одной из разновидностей тепловой стерилизации является дробная

5. Споры сульфитредуцирующих клостридий не должны определяться в 20

В состав бактериального генома, как в бактериальную хромосому, так и в

стерилизация, которую применяют для обработки материалов, не

мл исследуемой воды;

плазмиды, входят подвижные генетические элементы. К подвижным

выдерживающих температуру выше 100 °С, например, для стерилизации

6. Цисты лямблий не должны определяться в 50 мл исследуемой воды.

генетическим элементам относятся вставочные последовательности и

питательных сред с углеводами, желатина. Их нагревают в водяной бане при

Кроме того, загрязненность воды оценивается по обнаружению патогенных

транспозоны.

 

 

 

 

80 °С в течение 30—60 мин.

 

 

 

микробов с фекально-оральным механизмом передачи (энтеровирусы,

Вставочные (инсерционные) последовательности IS-элементы — это участки

В настоящее время применяют еще один метод тепловой стерилизации,

энтеробактерии, холерные вибрионы и др.).

ДНК, способные как целое перемещаться из одного участка репликона в

предназначенный

специально

для

молока — ультравысокотемпературный

№ 35 Микрофлора воздуха и методы ее исследования.

другой, а также между репликонами. Они содержат лишь те гены, которые

(УВТ): молоко обрабатывают в течение нескольких секунд при 130—150 °С.

 

 

необходимы для их собственного перемещения — транспозиции: ген,

Химическая стерилизация предполагает использование токсичных газов:

Микробиологический контроль воздуха проводится с помощью методов

кодирующий фермент транспозазу, обеспечивающую процесс исключения IS-

оксида этилена, смеси ОБ (смеси оксида этилена и бромистого метила в

естественной или принудительной седиментации микробов. Естественная

элемента из ДНК и его интеграцию в новый локус, и ген, детерминирующий

весовом соотношении 1:2,5) и формальдегида. Эти вещества являются ал-

седиментация (по методу Коха) проводится в течение 5—10 мин путем

синтез репрессора, который регулирует весь процесс перемещения.

 

килирующими агентами, их способность в присутствии воды инактивировать

осаждения микробов на поверхность твердой питательной среды в чашке

Отличительной особенностью IS-элементов является наличие на концах

активные группы в ферментах, других белках, ДНК и РНК приводит к гибели

Петри.

Принудительная седиментация микробов осуществляется путем

вставочной

последовательности

инвертированных

повторов.

Эти

микроорганизмов.

 

 

 

 

 

«посева» проб воздуха на питательные среды с помощью специальных

инвертированные повторы узнает фермент транспозаза. Транспозаза

Стерилизация газами осуществляется в присутствии пара при температуре от

приборов (импакторов, импинджеров, фильтров). Импакторы — приборы для

осуществляет одноцепочечные разрывы цепей ДНК, расположенных по обе

18 до 80 °С в специальных камерах. В больницах используют формальдегид, в

принудительного осаждения микробов из воздуха на поверхность питательной

стороны от подвижного элемента. Оригинальная копия IS-элемента остается на

промышленных условиях — оксид этилена и смесь ОБ.

 

среды (прибор Кротова, пробоотборник аэрозоля бактериологический и др.).

прежнем месте, а ее реплицированный дупликат перемещается на новый

Перед химической стерилизацией все изделия, подлежащие обработке, должны

Импшджеры — приборы, с помощью которых воздух проходит через жидкую

участок.

 

 

 

 

быть высушены.

 

 

 

 

 

питательную среду или изотонический раствор хлорида натрия.

Перемещение подвижных генетических элементов принято называть

Этот вид стерилизации небезопасен для персонала, для окружающей среды и

Санитарно-гигиеническое состояние воздуха определяется по следующим

репликативной или незаконной рекомбинацией. Однако в отличие от

для

пациентов,

пользующихся

простерилизованными

предметами

микробиологическим показателям:

бактериальной хромосомы и плазмид подвижные генетические элементы не

(большинство стерилизующих агентов остается на предметах).

 

1. Общее количество микроорганизмов в 1 м3 воздуха (так называемое общее

являются самостоятельными репликонами, так как их репликация — составной

Однако существуют объекты, которые могут быть повреждены нагреванием,

микробное число, или обсемененность воздуха) — количество колоний

элемент репликации ДНК репликона, в составе которого они находятся.

 

например, оптические приборы, радио- и электронная аппаратура, предметы из

микроорганизмов, выросших при посеве воздуха на питательном агаре в чашке

Известно несколько разновидностей IS-элементов, которые различаются по

нетермостойких полимеров, питательные среды с белком и т. п., для которых

Петри в течение 24 ч при 37 °С, выраженное в КОЕ;

размерам и по типам и количеству инвертированных повторов.

 

пригодна только химическая стерилизация. Например, космические корабли и

2. Индекс санитарно-показательных микробов— количество золотистого

Транспозоны — это сегменты ДНК, обладающие теми же свойствами, что и IS-

спутники, укомплектованные точной аппаратурой, для их деконтаминации

стафилококка и гемолитических стрептококков в 1 м3 воздуха. Эти бактерии

элементы, но имеющие структурные гены, т. е. гены, обеспечивающие синтез

обезвреживают газовой смесью (оксид этилена и бромистого метила).

являются представителями микрофлоры верхних дыхательных путей и имеют

молекул, обладающих специфическим биологическим свойством, например

В последнее время в связи с широким распространением в медицинской

общий путь выделения с патогенными микроорганизмами, передающимися

токсичностью, или обеспечивающих устойчивость к антибиотикам.

 

практике изделий из термолабильных материалов, снабженных оптическими

воздушно-капельным путем. Появление в воздухе спорообразу-ющих бактерий

Перемещаясь по репликону или между репликонами, подвижные генетические

устройствами, например эндоскопов, стали применять обезвреживание с

— показатель загрязненности воздуха микроорганизмами почвы, а появление

элементы вызывают:

 

 

 

помощью химических растворов. После очистки и дезинфекции прибор

грамотрицательных бактерий — показатель возможного антисанитарного

1. Инактивацию генов тех участков ДНК, куда они, переместившись,

помещают на определенное время (от 45 до 60 мин) в стерилизующий раствор,

состояния.

встраиваются.

 

 

 

 

затем прибор должен быть отмыт стерильной водой. Для стерилизации и

Для оценки воздуха лечебных учреждений можно использовать данные из

2. Образование повреждений генетического материала.

 

 

отмывки используют стерильные емкости с крышками. Простерилизованное и

официально рекомендованных нормативных документов.

3. Слияние репликонов, т. е. встраивание плазмиды в хромосому.

 

отмытое от стерилизующего раствора изделие высушивают стерильными

 

 

4. Распространение генов в популяции бактерий, что может приводить к

салфетками и помещают в стерильную емкость. Все манипуляции проводят в

 

 

изменению биологических свойств популяции, смене возбудителей

асептических условиях и в стерильных перчатках. Хранят эти изделия не более

 

 

инфекционных заболеваний, а также способствует эволюционным процессам

3 суток.

 

 

 

 

 

 

 

среди микробов.

 

 

 

Лучевая стерилизация осуществляется либо с помощью гамма-излучения,

 

 

Изменения бактериального генома, а следовательно, и свойств бактерий могут

либо с помощью ускоренных электронов.

 

 

 

происходить в результате мутаций и рекомбинаций.

 

 

Лучевая стерилизация является альтернативой газовой стерилизации в

 

 

 

 

 

 

 

промышленных условиях, и применяют ее также в тех случаях, когда

 

 

 

 

 

 

 

стерилизуемые предметы не выдерживают высокой температуры. Лучевая

 

 

 

 

 

 

 

стерилизация позволяет обрабатывать сразу большое количество предметов

 

 

 

 

 

 

 

(например, одноразовых шприцев, систем для переливания крови). Благодаря

 

 

 

 

 

 

 

возможности широкомасштабной стерилизации, применение этого метода

 

 

 

 

 

 

 

вполне оправданно, несмотря на его экологическую опасность и

 

 

 

 

 

 

 

неэкономичность.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Еще одним способом стерилизации является фильтрование. Фильтрование

 

 

 

 

 

 

 

с помощью различных фильтров (керамических, асбестовых, стеклянных), а в

 

 

 

 

 

 

 

особенности мембранных ультрафильтров из коллоидных растворов

 

 

 

 

 

 

 

нитроцеллюкозы

или

других

веществ позволяет освободить жидкости

 

 

 

 

 

 

 

(сыворотку крови, лекарства) от бактерий, грибов, простейших и даже вирусов.

 

 

 

 

 

 

 

Для ускорения процесса фильтрации обычно создают повышенное давление в

 

 

 

 

 

 

 

емкости с фильтруемой жидкостью или пониженное давление в емкости с

 

 

 

 

 

 

 

фильтратом.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

В настоящее время все более широкое применение находят современные

 

 

 

 

 

 

 

методы стерилизации, созданные на основе новых технологий, с

 

 

 

 

 

 

 

использованием плазмы, озона.