Определение резус-принадлежности крови

Метод определения резус-фактора зависит от формы резус-антител в стандартной сыворотке и способа ее изготовления. К сыворотке антирезус прикладывается сопроводительная инст­рукция с описанием того метода, для которого предназначена данная серия выдаваемой сыворотки.

При каждом исследовании для проверки специфичности и активности сыворотки антирезус необходимо ставить контроль. Для контроля применяются стандартные резус-положительные эритроциты группы 0(1) или той же группы, что и исследуемая кровь, и стандартные резус-отрицательные эритроциты обязательно той же группы, что и исследуемая кровь.

Определение резус-фактора рекомендуется производить двумя сериями стандартных сывороток антирезус.

При определении резус-принадлежности двумя сериями стан­дартных сывороток в тех случаях, когда они используются раз­ными методами, результат учитывается как истинный при совпадении его в обеих сериях исследований после проверки контрольных образцов, подтверждающих специфичность и активность каждой серии сыворотки антирезус, т. е. при отсутствии агглютинации со стандартными резус-отрицательными эритро цитами одноименной группы и наличии агглютинации со стандартными резус-положительными эритроцитами одноименной группы или группы 0(1) и в контрольных пробах без сыворотки (реагента) антирезус. Если при определении резус-принаддеж ности наблюдается слабая или сомнительная реакция, то следует повторно исследовать кровь данного лица этими же и другими сериями сыворотки антирезус и желательно включить сыворотку содержащую полные антитела. Если при этом все серии сывороток, содержащих неполные антитела, дадут также слабую или сомнительную реакцию, а с полными антителами реакция будет отрицательная, это значит, что эритроциты содержат слабую paзновидность антигена резус, так называемый фактор D^u. В этих случаях резус-принадлежность крови больного или беременной женщины указывают как резус-отрицательную (Rh-), a резус- принадлежность крови донора как резус-положительную (Rh+), не допуская таким образом переливания его крови резус-отрицательным реципиентам.

Определение резус-фактора Rh0(d) при помощи стандартного универсального реагента

Реагент и оборудование.

• Стандартный универсальный реагент антирезус-анти Rho(D).

• Стандартные эритроциты для контроля.

• Центрифужные или другие пробирки вместимостью 8—10 мл.

Ход исследования. Может быть использована кровь, взятая не посредственно перед исследованием из места укола пальца, кон сервированная кровь и осадок эритроцитов в пробирке после образования сгустка крови, взятой без стабилизатора. Допустимо хранить кровь в течение 2—3 сут при 4—8 °С.

В штатив устанавливают 2 ряда пробирок по числу исследуемых образцов эритроцитов в каждом ряду и по 2 пробирки для контрольных исследований — стандартных резус-положительных и резус-отрицательных эритроцитов. На пробирках надписывают фамилию и инициалы лица, кровь которого исследуется.

Во все пробирки 1-го ряда вводят по 2 капли (0,1 мл) стан­дартного универсального реагента антирезус.

Во все пробирки 2-го (контрольного) ряда вводят по 2 капли (0,1 мл) изотонического раствора NaCl и по 1 капле (0,05 мл) 33% раствора полиглюкина.

В каждую пару одинаково обозначенных пробирок вводят со­гласно маркировке по 1 капле (0,05 мл) исследуемой крови, стан­дартных резус-положительных и резус-отрицательных эритроцитов.

Содержимое пробирок перемешивают встряхиванием и затем медленно поворачивают по оси, наклоняя почти до горизонталь­ного положения так, чтобы содержимое растекалось по ее стен­кам. Такое растекание крови по стенкам пробирок делает реак­цию более выраженной. Как правило, агглютинация наступает уже в течение первой минуты, но для образования устойчивого комплекса антиген-антитело и четко выраженной реакции, а также ввиду возможности замедленной реакции при слабовыраженной агглютинабельности эритроцитов, контакт эритроцитов с реагентом при поворачивании пробирок проводят не менее 3 мин.

Через 3 мин в пробирки добавляют по 2—3 мл 0,85% раство­ра NaCl и перемешивают содержимое 2—3-кратным переверты­ванием пробирок (не встряхивать!).

Пробирки просматривают на свет невооруженным глазом или через лупу с 2-кратным увеличением. Результат трактуют по на­личию или отсутствию агглютинации эритроцитов.

При наличии агглютинации в виде крупных комочков или хлопьев из склеенных эритроцитов на фоне просветленной жид­кости исследуемую кровь можно считать резус-положительной (Rh+). При отсутствии агглютинации (в пробирке сохраняется гомогенное окрашивание, «муаровые волны»), исследуемую кровь можно считать резус-отрицательной (Rh-). Однако эти результаты следует учитывать как истинные только после проверки контрольных образцов, т. е. при положительной реакции со стан дартными резус-положительными эритроцитами, отрицательной с резус-отрицательными, а также после просмотра результатов во 2-м контрольном ряду. Во всех пробирках 2-го контрольного ряда агглютинации быть не должно.

Наличие агглютинации в какой-либо пробирке контрольного ряда указывает на неспецифическое склеивание эритроцитов и, следовательно, не позволяет учесть результат исследования как истинный.

В таких случаях для определения резус-принадлежности сле­дует применить сыворотку антирезус с полными антителами, или отмыть эритроциты теплым изотоническим раствором NaCl для элюирования с них аутоантител.

Приведенная методика является наиболее часто используемой в практической работе.

Определение резус-фактора можно проводить также следующими методиками.

• Определение резус-фактора Rh₀(D) реакцией конглютинации с применением желатина (в пробирке с подогревом до 46-48 °С).

• Определение резус-фактора Rho(D) реакцией конглютинации в сывороточной среде на плоскости с подогревом.

• Определение резус-фактора Rh₀(D) реакцией агглютинации в солевой среде в маленьких пробирках. Реакция агглютинации в солевой среде пригодна для работы только с сывороткой, содержащей полные резус-антитела.

• Определение резус-фактора Rh₀(D) с помощью моноклональных антител.

- Определение резус-фактора Rho(D) с помощью непрямой пробы Кумбса.