5.3.3.1 Методика выполнения работы

Для определения берут 6 пробирок. В каждую из них помещают по 6 мл буферной смеси (пользуясь таблицей 11).

Таблица 11 – Объемы смешиваемых растворов, мл.

Раствор	Номер пробирок
	1	2	3	4	5	6
CH3COONa, 0.1 H	2	2	2	2	2	2
CH3COOH, 0.1H	0,25	0,50	1	2	4	-
CH3COOH, 1H	-	-	-	-	-	0,8
Дистиллированная вода	3,75	3,50	3	2	-	3,2

Тщательно перемешивают содержимое пробирок и добавляют в каждую из них по 2 мл 1%-ного раствора желатина. Затем в пробирку медленно, при перемешивании, добавляют 8 мл этилового спирта. Содержимое пробирок перемешивают и оставляют на 20-30 минут. Спустя это время во всех пробирках появится помутнение. Наибольшее помутнение наблюдается в той пробирке, в которой рН соответствует изоэлектрической точке желатина.

5.3.3.2 Оформление результатов опыта

Полученные результаты записывают в таблицу 12.

Таблица 12

Параметр	Номер пробирок
	1	2	3	4	5	6
рН раствора	5,6	5,3	5,0	4,7	4,4	4,1
Степень коагуляции

5.4 Контрольные вопросы

1. Каковы биологические функции белков?

2. Что вы знаете о классификации белков?

3. Какие сложные белки вам известны?

4. Расскажите классификацию аминокислот.

5. Какие аминокислоты называют «незаменимыми» и почему?

6. Напишите структурную формулу пептида глутатиона( γ-глу-таминил-цистеинил-глицин). Каков заряд пептида в нейтральной среде?

7. Какие типы химических связей имеются в молекулах белков?

8. Каков механизм денатурации белков? Назовите денатурирующие агенты.

9. Какие известные реакции на белки вам известны? Опишите механизм каждой из них.

10. Какие факторы вызывают осаждение белка из раствора?

11. Что такое «обратимое» и «необратимое» осаждение?

12. Что такое «изоэлектрическая точка» белка?

Рекомендуемая литература

[1 с.226-241];[4 с.36-39]

Лабораторная работа №6 Методы количественного определения белка

6.1 Цель работы: освоение методов количественного определения аминокислот и белков.

6.2 Общие сведения

Методы количественного определения белка включают выделение его из общей массы различных химических соединений (фракционирование). Для выделения биополимера из раствора пользуются осаждением, для чего понижают растворимость белка. Белок переводят в осадок одним из реагентов: медным купоросом, уксуснокислым свинцом, сульфосалициловым натрием, трихлоруксусной или фосфорновольфрамовой кислотой. Небелковые соединения растворяются в водных растворах осадителя.