5.5.2. Диагностика

Диагностику респираторных болезней телят осуществляют комплексно на основании анализа эпизоотологических данных, клинических симптомов, патологоанатомических изменений и результатов лабораторных (вирусологических, бактериологических, серологических, микологических и др.) исследований.

Эпизоотологическим методом изучают эпизоотический процесс.

Клинический метод позволяет изучить симптомокомплекс заболевания.

Функциональная способность дыхательной системы у телят прогнозируется с использованием дозированных физических нагрузок (прогон животных в течение 10-15 минут или задержку дыхания на 30 сек.), позволяющих выявить легочную недостаточность. Определение коэффициента легочной недостаточности проводится по формуле: К_н=Д₂/Д₁, где К_н – коэффициент легочной недостаточности, Д₂ – кол-во дыхательных движений после 30 сек. задержки дыхания, Д₁ – кол-во дыхательных движений в покое. Величина коэффициента в пределах 1,1-1,4 указывает на нормальное функционирование дыхательной системы, а более 1,4 – на наличие легочной недостаточности.

Патологию в органах дыхания у телят выявляют также гематологическими (лейкограмма, СОЭ), биохимическими (содержание в крови кортизола, белковых фракций и классов иммуноглобулинов), гистохимическими (активность гидролитических ферментов в коре надпочечников и слизистой оболочке верхних дыхательных путей), люминисцентно-микроскопическими (интенсивность свечения сурфактанта на альвеолярной выстилке).

Патологоанатомическим методом изучают характер и место локализации воспалительного процесса в органах дыхания.

Учитывая, что клинико-эпизоотологические и патологоанатомические изменения при респираторных болезнях крупного рогатого скота сходны, поэтому решающее значение в постановке диагноза имеют лабораторные исследования.

Лабораторными методами уточняют этиологию пневмоний. При этом проводят:

– отбор и пересылку патологического материала в лабораторию или научно-исследовательское учреждение;

– подготовку патматериала для исследований;

– индикацию возбудителей (антигенов) и ретроспективную диагностику;

– при необходимости морфологические и биохимические исследования крови и гистологические исследования патматериала.

Отбор патологического материала. Для лабораторных исследований направляют материал от больных животных, не подвергавшихся лечению антибактериальными препаратами, взятый в период максимального проявления у них клинических признаков (угнетение, температурная реакция, чихание, кашель, выделение из носовых отверстий) или от 2-3 убитых с диагностической целью животных.

От больных животных берут:

– ватно-марлевыми тампонами выделения из носовых отверстий;

– смывы со слизистой носа путем спринцевания физиологическим раствором или раствором Хенкса;

– сыворотку крови для ретроспективной диагностики;

– кровь для морфологических и биохимических исследований.

Тампоны с материалом и смывы со слизистой носа помещают в пробирки с питательной средой (для выращивания микоплазм) для бактериологических исследований и заражения лабораторных животных, и в пенициллиновые флаконы (пробирки) с 2-3 мл питательной среды для культуры клеток или раствора Хенкса, содержащими по 500-1000 ЕД/мл пенициллина и стрептомицина – для вирусологических исследований.

Кровь в объеме не менее 5 мл берут в стерильные пробирки двукратно с интервалом в 2-3 недели.

От убитых с диагностической целью животных берут участки легких на границе здоровой и пораженной ткани, бронхиальные и средостенные лимфатические узлы, бронхиальную слизь, кусочки паренхиматозных органов.

Патологический материал для лабораторных исследований доставляют в термосе со льдом. При необходимости его консервируют 30 %-ным раствором глицерина для бактериологических исследований или замораживанием (для вирусологических исследований).

Наиболее надежным и универсальным способом сохранения патологического материала для всех видов диагностических исследований является его замораживание в жидком азоте или твердой углекислоте (сухом льду).

Для гистологических исследований патматериал фиксируют в 10 %-м растворе нейтрального формалина.

Подготовка патологического материала для исследований. Подготовку патматериала и исследования, направленные на выделение и идентификацию вирусов, микоплазм, бактерий, хламидий, грибов, осуществляют в соответствии с:

– «Методическими рекомендациями по выделению, культивированию и идентификации микоплазм, ахолеплазм и уреаплазм» (М., 1982);

– «Методами лабораторной диагностики вирусных болезней животных» (М., 1992);

– «Лабораторными исследованиями в ветеринарии (бактериальные инфекции)» (М., 1986);

– «Методическими указаниями по лабораторной диагностике хламидиозного аборта овец и коз» (М., 1983);

– «Методическими указаниями по лабораторным исследованиям на пневмококовую (диплококовую) инфекцию животных» (М., 1984);

– «Справочником диагностики вирусных болезней животных» (М., 1991).

Морфологические и биохимические исследования крови и гистологические исследования патматериала проводят общепринятыми методами.

Из патологического материала предварительно делают посев на питательные среды, готовят три серии мазков-отпечатков и после их фиксации одну серию окрашивают по Граму, вторую – по Романовскому-Гимза, третью – обрабатывают методом флуоресцирующих антител (МФА), а затем проводят подготовку его для заражения лабораторных животных, микоплазмологических и вирусологических исследований.

Из испытуемого материала готовят суспензию на растворе Хенкса в соотношении 1:10, которую делят на три части. Одну часть используют для подкожного или внутрибрюшинного заражения 2-3 белых мышей, морских свинок, кроликов в дозах соответственно 0,2; 0,5 и 1 мл. Вторую часть суспензии центрифугируют при 4500 об./мин. в течение 15-20 мин., к надосадочной жидкости добавляют 500-1000 ЕД/мл пенициллина и ацетат таллия (конечная концентрация 1:2000), выдерживают 1 час при комнатной температуре в темном месте. В течение этого времени суспензию центрифугируют 10-15 минут при 1500-2000 об./мин. для удаления крупных частиц ткани. Затем ее используют для посева на питательную среду для выращивания микоплазм. Для контроля бактериальной контаминации материала параллельно делают посев на МПБ, МПА и среду Китт-Тарцци. Третью часть суспензии замораживают, затем размораживают и центрифугируют при 1500-2000 об./мин, в течение 15-20 мин, ( при исследовании на хламидиоз её отстаивают в течение 2-х часов). К надосадочной жидкости добавляют по 500 ЕД/мл пенициллина и стрептомицина ( при исследовании на хламидиоз только 500 ЕД/мл стрептомицина), выдерживают ее 1 час при 4С и используют для заражения лабораторных животных, куриных эмбрионов и культур клеток.

Из осадка центрифугата готовят мазки для исследования МФА прямым или непрямым вариантом в зависимости от предполагаемого возбудителя.