Анализ лекарственного растительного сырья

В растениях обычно содержится несколько близких по строению и свойствам гликозидов, разделение и идентификация которых до настоящего времени представляют собой сложную и не всегда разрешимую задачу.

Анализ сырья складывается из нескольких стадий: экстракция сапонинов из сырья, очистка полученного извлечения, разделение на индивидуальные компоненты. Экстрагируют сапонины из сырья обычно полярными растворителями: метанолом и этанолом различной концентрации, водой, 0,9%-ным раствором натрия хлорида. Иногда сырье перед экстракцией обрабатывают петролейным эфиром, четыреххлористым углеродом, диэтиловым эфиром для разрушения нерастворимых в полярных растворителях комплексов сапонинов со стеринами, белками, фенольными соединениями. Очистку полученных извлечений проводят различными способами, что зависит от структуры сапонинов. Полярные сапонины плохо растворимы в этиловом и метиловом спиртах, выпадают в осадок при охлаждении, длительном стоянии спиртового экстракта или при добавлении этанола. Гликозиды с небольшой углеводной цепочкой обычно плохо растворимы в воде и выпадают в осадок при разбавлении спиртовых экстрактов водой. Кислые тритерпеновые сапонины растворимы в водных растворах щелочей и выпадают в осадок при подкислении. Также из спиртовых растворов тритерпеновые сапонины можно осаждать диэтиловым эфиром, ацетоном, этилацетатом, иногда бутиловым и изоамиловым спиртами. Полученную сумму сапонинов очищают повторным переосаждением от полярных сопутствующих веществ: моно- и олигосахаридов, фенольных соединений, органических кислот и др.

Ряд методов основан на способности сапонинов образовывать нерастворимые в воде или водном спирте соли с гидроксидом бария или ацетатом свинца и комплексы с холестерином, танинами, белками. Затем эти соли или комплексы разлагают.

Эти методы позволяют получить более чистую сумму сапонинов.

Качественный анализ

1.      Реакция гемолиза. Готовят извлечение на изотоническом растворе натрия хлорида 1 : 30 настаиванием на кипящей водяной бане в течение 30 минут. К 2 мл извлечения добавляют 2 мл 2% взвеси дефибринированной крови. В присутствии сапонинов образуется прозрачный красный раствор ("лаковая кровь").

2.      Реакция пенообразования. Водное извлечение из сырья (1 : 10) встряхивают в пробирке в течение 15 сек. Не исчезающая в течение 15 мин пена говорит о возможном присутствии сапонинов.

3.      Хроматография в тонком слое. Водное или спиртовое извлечение хроматографируют на силикагеле или алюминия оксиде в подходящей системе растворителей. Для нейтральных сапонинов чаще всего используют н-бутанол – уксусная кислота – вода, для кислых – н-бутанол – водный аммиак в различных соотношениях. Систему подбирают экспериментально. На хроматограммах сапонины обнароуживают, проявляя различными кислотными реагентами: конц. Кислота серная, уксусный ангидрид, 25% раствор фосфорномолибденовой кислоты, треххлористая сурьма и др., часто в сочетании с кобальта хлоридом, ванилином, пара-диметиламинобензальдегидом и др.

Тритерпеновые сапонины проявляются в виде красновато- или буроватофиолетовых пятен.

Стероидные сапонины при проявлении хроматограмм 1% раствором сурьмы треххлористой, конц. кислотой серной и уксусным ангидридом образуют желтые (спиростановые) пятна (реакция Санье). В настоящее время хроматографический метод дает наиболее достоверное представление о наличии сапонинов в сырье.

4.      Реакция Лафона. К 2 мл спиртового извлечения добавляют 1 мл кислоты серной концентрированной, 1 мл этанола и 1 каплю 10 % раствора железа сульфата. В присутствии сапонинов образуется сине-зеленое окрашивание.

5.      При добавлении к 2 мл водного извлечения 1 мл 10% раствора натрия нитрата и 1 капли кислоты серной концентрированной образуется кроваво-красное окрашивание.

6.      При добавлении к 2 мл спиртового извлечения 1 % раствора холестерина образуется белый осадок.

Количественное определение

Единого точного метода количественного определения сапонинов в сырье нет, ввиду их разнообразного строения.

1.         Ранее использовали гравиметрический метод, основанный на физических свойствах сапонинов: разной растворимости гликозидов и агликонов. Сапонины из сырья экстрагируют метиловым или этиловым спиртом в аппарате Сокслета. Экстракт упаривают под вакуумом, сапонины осаждают органическим растворителем; отфильтровывают, промывают, высушивают до постоянной массы и взвешивают. Результаты получаются завышенные, так как кроме сапонинов осаждаются сопутствующие вещества. Более точные результаты могут быть получены, если провести гидролиз суммы сапонинов, отделить агликоны, высушить и взвесить.

2.         В настоящее время для определения суммы сапонинов и индивидуальных веществ используют физико-химические методы (спектрофотометрия, колориметрия), основанные на способности сапонинов при нагревании давать окрашенные продукты с кислотными реагентами. Например, при определении суммы сапонинов каштана конского, синюхи голубой используют кобальта хлорид с кислотой серной концентрированной; женьшеня – ванилин с кислотой серной концентрированной, стероидных сапонинов – п-диметил-аминобензальдегид в 4 моль/л растворе кислоты хлористоводородной. Калибровочные графики строят по стандартному образцу (например, эсцину) или кобальта хлориду. Эти методы часто используют в сочетании с предварительным хроматографическим разделением суммы сапонинов. Для кислых сапонинов (например, аралозиды) используют потенциометрическое титрование после предварительного гидролиза сапонинов. Иногда для сырья, содержащего сапонины (при научных исследованиях) определяют пенное число и гемолитический индекс.

Пенное число – наименьшая концентрация извлечения из 1 г сырья, при встряхивании которого в течение 15 сек образуется устойчивая в течение 15 мин пена. Основан на физических свойствах сапонинов.

Гемолитический индекс – наименьшая концентрация извлечения из 1 г сырья или раствора чистого сапонина, которая вызывает гемолиз эритроцитов, содержащихся в 1 мл 2 % раствора дефибринированной крови барана. Извлечение сапонинов и разведение проводят изотоническим раствором. Готовится серия разведений и определяется наименьшая концентрация. При работе с кровью других животных параллельно ставят контроль со стандартным сапонином (0,02 % раствор дигитонина). Результаты выражают соотношением массы сырья (1 г) и разведения. Например 1:5000, 1:20000 и т.д.

2. Описание растений

ТРАВА МАЧКА ЖЕЛТОГО - HERBA GLAUCI FLAVAE

Мачок желтый - Glaucium flavum Crantz.

Сем. маковые - Papaveraceae

Другие названия: глауциум желтый

Ботаническая характеристика. Одно-, дву- или многолетнее растение со стержневым корнем. В первый год жизни развивается розетка прикорневых крупных перисторассеченных лировидных листьев. В год цветения образуется ветвистый округлый стебель высотой от 20 до 100 см. Стеблевые листья многочисленные, очередные, плотные, сизые. Цветки одиночные, с 4 желтовато-оранжевыми лепестками и двумя опадающими в начале цветения чашелистиками, многочисленными ярко-желтыми тычинками. Плод - стручковидная линейная коробочка с многочисленными черными семенами. Цветет с мая по сентябрь.

Распространение. Встречается на Южном берегу Крыма и Кавказе - вдоль побережья Черного моря. Местообитание. В долинах рек, впадающих в море, на скалисто-щебенистых обнажениях, песках и галечниках.

Местообитание. В природных условиях не образует зарослей, поэтому заготовка экономически нецелесообразна. Успешно культивируется в совхозах Краснодарского края.

Заготовка. Собирают надземную часть растения, срезая ножницами или ножом.

Охранные мероприятия. Плантации используют 3-4 года. При сборе оставляют несколько хорошо развитых растений.

Сушка. Возможна искусственная сушка при температуре 50-55°С. При воздушной сушке трава высыхает за 5-7 дней.

Внешние признаки. Сырье представлено олиственными стеблями и отдельными листьями различной формы, цветками и незрелыми плодами. Стеблевые листья покрыты волосками, верхние - голые, стеблеобъемлющие. Цветки крупные, желтого цвета, одиночные. Плод - стручковидная коробочка. Все части растения содержат желтый млечный сок. Запах слабый, специфический. Глауцина основания должно быть не менее 1%.

Химический состав. Содержится более 15 алкалоидов, производных изохинолина, главный глауцин. В фазе цветения трава содержит до 3,9% суммы алкалоидов.

Хранение. По списку Б. Срок годности сырья 3 года.

Фармакологические свойства. Глауцин оказывает противокашлевое действие. В отличие от кодеина не угнетает дыхание, не оказывает тормозящего влияния на моторику кишечника, не вызывает привыкания и пристрастия.

Лекарственные средства. Таблетки "Глауцина гидрохлорид" по 0,05 г, покрытые оболочкой.

Применение. Таблетки глауцина гидрохлорид (Tabulettae Glaucini hydrochloridi obductae) применяют как противокашлевое средство при заболеваниях легких и верхних дыхательных путей.

Назначают внутрь: взрослым по 0,05 г (50 мг) 2-3 раза в день после еды, детям - по 0,01-0,03 г (10-30 мг).

Препарат обычно хорошо переносится, в отдельных случаях отмечаются головокружение, тошнота. Может наблюдаться умеренное гипотензивное действие, связанное с адренолитическими свойствами препарата, в связи с чем его не следует назначать при пониженном артериальном давлении и инфаркте миокарда.

ЛИСТЬЯ МАТЬ-И-МАЧЕХИ - FOLIA FARFARAE

Мать-и-мачеха - Tussilago farfara L.

Сем. астровые - Asteraceae

Другие названия: водяной лопух, камчужная трава, лапуха студеная, мать-трава, односторонник, лапушник лесной, двуличник, ранник, колоречная трава

Ботаническая характеристика. Многолетнее травянистое растение высотой 10-25 см. Корневище ползучее, сочное, ветвистое, с тонкими корнями. Ранней весной отрастают многочисленные цветоносные стебли с недоразвитыми чешуйчатыми листьями, которые несут по одной верхушечной корзинке. Цветки в корзинках золотисто-желтые: краевые - язычковые, срединные - трубчатые. Плод - четырехгранная семянка с длинным белым хохолком. Листья прикорневые, развиваются позже, после созревания плодов. Пластинка плотная, сочная, округло-сердцевидная, неравномерно-зубчатая по краю, сверху темно-зеленая, снизу беловойлочная от густых волосков. Жилкование пальчатое с заметными тремя пучками жилок. Цветет в апреле-мае, плодоносит в мае-июне. Возможные примеси: белокопытник (подбел) лекарственный; иногда в процессе сборки в сырье попадают ошибочно даже мелкие листья лопуха.

Распространение. Растение встречается в лесной и лесостепной зонах.

Местообитание. Произрастает по берегам рек, водоемов, на полях, в огородах, на влажных лугах, около дорог, на отвалах карьеров. Растение образует местами густые значительные заросли.

Заготовка. Собирают листья летом в фазе полного развития до их повреждения "оранжевой ржавчиной". Срезают или косят, оставляя черешок длиной не более 5 см. В свежесобранном сырье отбирают пораженные листья, рыхло укладывают и транспортируют.

Отличительные признаки мать-и-мачехи и белокопытника лекарственного
Диагностические признаки	Мать-и-мачеха - Tussilago farfara L.	Белокопытник лекарственный - Peiasites officinalis Mull.
Соцветия, цветы	Одиночные на верхушках, золотисто-желтые	Многочисленные, собраны в стеблей метелку или красноватые
Стеблевые листья	Недоразвитые, широколанцетные	Недоразвитые, широкояйцеидные
Прикорневые листья	Округло-сердцевидные	Треугольно-сердцевидные

Охранные мероприятия. Не используются. Растение-сорняк, активно размножается семенами и особенно корневищами.

Сушка. Производится без промедления в тени при хорошей вентиляции. Температурный режим 40-50°С. Сырье раскладывают по 1 листу опушенной стороной книзу и часто перемешивают. Окончание сушки определяют по ломкости листовых черешков. Выход сухого сырья 16-18%

Внешние признаки. По ГОСТу и ГФ XI листья должны быть округло-сердцевидные, длиной 8-16 см, шириной 10 см, по краю неравномерно-зубчатые с пальчатым жилкованием. Остаток желобовидных черешков длиной около 5 см. Пластинки сверху зеленые, голые, снизу беловойлочные от многочисленных волосков. Запах отсутствует. Вкус горьковато-слизистый. Снижают качество сырья примесь бурых пятнистых листьев, частей других растений, песка, почвы, измельченность. Подлинность сырья легко определяется по внешним признакам и микроскопически (с нижней стороны густо переплетенные, тонкие, кнутообразные, чаще четырехклеточные с конечной очень длинной и извилистой, а у основания вздутой клеткой).

Химический состав. Слизь является основным компонентом - до 8% (при ее гидролизе образуются глюкоза, галактоза, пентозы и уроновые кислоты). Листья и соцветия растений содержат горькие гликозиды (2,63%), тритерпеновые сапонины, органические кислоты (галловая, яблочная, винная, аскорбиновая), стеролы (ситостерин, стигмастерин и др.), а также флавоноиды (рутин, гиперозид), полисахариды (инулин, декстрин), каротиноиды, следы дубильных веществ и эфирных масел.

Хранение. В сухом месте на стеллажах, упаковав в мешки или тюки. Срок годности до 3 лет.

Фармакологические свойства. Препараты мать-и-мачехи оказывают отхаркивающее, противовоспалительное, мягчительное и дезинфицирующее действие. Противовоспалительное и мягчительное действие препаратов мать-и-мачехи обусловлено слизями. Растекаясь по слизистым оболочкам верхних дыхательных путей, слизи образуют защитную пленку, предохраняющую эпителий от раздражающего влияния холода, бактериальных токсинов, вирусов, раздражающих ингредиентов пищи. Под защитной пленкой слизи снижается активность воспалительного процесса, регенерирует поврежденный эпителий, нормализуются его функции и движения ресничек.

Сапонины растения и органические кислоты разжижают патологические секреты дыхательных путей, образующиеся в результате воспаления, жизнедеятельности микроорганизмов и вирусов, способствуют более быстрой эвакуации их, очищению дыхательных путей и восстановлению газообмена. Противовоспалительное действие усиливают каротиноиды и дубильные вещества. Сумма полисахаридов мать-и-мачехи на экспериментальных моделях воспаления дает отчетливый противовоспалительный эффект, наиболее выражено антиэкссудативное действие. По противовоспалительной активности полисахариды мать-и-мачехи не уступают индометацину, хотя фармакодинамика их различна.

Лекарственные средства. Листья, настой, гранулы. Входит в состав грудных и потогонных сборов.

Применение. Настой листьев мать-и-мачехи применяют в комплексном лечении больных бронхитами, ларингитами, пневмонией, бронхиальной астмой, эмфиземой легких, для профилактики обострении, предупреждения послеоперационных легочных осложнений. Настой мать-и-мачехи применяют также при заболеваниях верхних дыхательных путей, хроническом насморке, при профессиональных заболеваниях легких и для профилактики их. Обычно листья мать-и-мачехи входят в лекарственные сборы с тысячелистником и подорожником.

Кроме того, мать-и-мачеху используют внутрь в виде водных извлечений при гастритах, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, колитах.

Настой применяют для полосканий и аппликаций при дистрофически-воспалительной форме пародонтоза, катаральном и гипертрофическом гингивите. При фурункулезе, гнойничковых сыпях из отваров мать-и-мачехи делают примочки, компрессы, обмывают пораженные участки кожи. В гинекологии настой применяют для спринцеваний при кольпитах.

Настой листьев мать-и-мачехи и крапивы, взятых поровну, используют для втирания в кожу головы при сухой себорее и выпадении волос. Настой и отвар готовят в соотношении 1:10, принимают внутрь по 1-2 столовые ложки 2-3 раза в день.