Глава VII выделение чистых культур микроорганизмов

Морфологию, физиологию и биохимию микро-организмов изу­чают, используя чистые культуры. Чистой культурой микроорга­низмов называют такую культуру, которая является потомством одной клетки.

Выделение чистой культуры включает три этапа: получение накопительной культуры; выделение чистой культуры; определение чистоты выделенной культуры.

Получение накопительной культуры

Накопительными называют такие культуры, в которых преоб­ладают представители одной группы или даже одного вида микро­организмов. С целью получения накопительных культур создают элективные условия, обеспечивающие преимущественное развитие выделяемых микроорганизмов. При создании элективных условий необходимо знать физиологию форм, интересующих исследовате­ля, или четко представлять те особенности обмена веществ, кото­рыми должен обладать выделяемый организм. Особенно часто элективные условия создают, подбирая соответствующие среды, поскольку различные микроорганизмы для своего развития предъ­являют неодинаковые требования к источникам питания. Напри­мер, как подчеркивалось выше, микроорганизмы, способные фик­сировать молекулярный азот, хорошо развиваются на среде, из состава которой исключены связанные формы азота. Если внести в такую среду почву, то из громадного разнообразия имеющихся в ней микроорганизмов в первую очередь будут развиваться фор­мы, способные ассимилировать молекулярный азот. Накопитель-ные культуры автотрофных организмов получают на средах, где единственным источником углерода является углекислота. В этом случае отсутствие в среде других соединений углерода задержи-

вает развитие гетеротрофов. Такие специфические питательные среды, удовлетворяющие потребностям преимущественно одной группы микроорганизмов, носят название элективных. При созда­нии элективных условий следует учитывать неодинаковое отноше­ние различных микроорганизмов к кислотности среды, темпера­туре, аэрации и т. д. Поэтому для получения накопительной куль­туры, например, аэробных организмов среду разливают тонким (1,5—2,0 см) слоем в конические колбы или проводят культиви­рование в колбах на качалке. Напротив, для обогащения среды анаэробными организмами среду обычно разливают в высокие пробирки, во флакончики с притертыми пробками, заполняя их доверху. Получение накопительных культур облигатных термо­фильных организмов осуществляют чаще всего при температуре от 45 до 65°С, а в некоторых случаях — при 70—75°С. При получе­нии накопительных культур следует учитывать и такие особен­ности выделяемых форм, как подвижность, спорообразование, устойчивость к антибиотикам и некоторым другим соединениям. Например, получение накопительных культур спорообразующих микроорганизмов проводят из субстрата, который предваритель­но пастеризуют. Элективные условия для развития грамотрица-тельных бактерий или дрожжей иногда создают внесением в среду пенициллина, поскольку грамположительные бактерии при этом или совсем не развиваются, или их развитие замедлено. Необхо­димо только помнить, что концентрация пенициллина должна, быть специально подобрана.

Следует иметь в виду, что элективные условия далеко не всег­да оптимальны для роста выделяемого микроорганизма, однако они лучше переносятся им, чем сопутствующими формами.

О получении накопительной культуры судят визуально, по по­явлению характерных признаков развития выделяемых микро­организмов— помутнение среды, иногда сопровождаемое пигмен­тацией, появление пленки, осадка, пузырьков газа. Помимо визу­альной оценки, культуральную жидкость микроскопируют и выяв­ляют присутствие выделяемых форм. В некоторых случаях о получении накопительной культуры свидетельствуют характерные химические изменения в составе среды, которые должны сопро­вождать процесс накопления выделяемых микроорганизмов, на­пример, образование аммиака, сероводорода и т. д.