- •Раздел 1 общеприкладная медицинская микробиология микробиология как наука
- •История развития микробиологии
- •Систематика и номенклатура микроорганизмов
- •Микроскопические методы исследования микроскопы и способы микроскопии
- •Методы приготовления мазков–препаратов из материала (культур) и способы их окрашивания
- •Морфология и ультраструктура прокариот эубактерии
- •Патогенные спирохеты
- •Актиномицеты
- •Риккетсии
- •Микоплазмы
- •Физиология микроорганизмов
- •Выделение чистых культур бактерий
- •Выделение и изучение культуральных свойств бактерий–аэробов
- •Особенности выделения и изучения культуральных свойств бактерий–анаэробов
- •Действие физических, химических и биологических факторов на микроорганизмы
- •Бактериофаги (фаги)
- •Стерилизация
- •Инфекция
- •Механизмы неспецифической резистентности
- •Антигены как индукторы приобретенного антимикробного иммунитета
- •Органы иммунитета и иммунокомпетентные клетки
- •Антитела (иммуноглобулины)
- •Процесс антителообразования
- •Аллергия (гиперчувствительность)
- •Патогенез и характер проявления анафилаксии и инфекционной аллергии
- •Иммунопрофилактика и иммунотерапия вакцины
- •Иммунные сыворотки (гамма–глобулины)
- •Серологические реакции иммунитета
- •Реакция агглютинации
- •Реакция преципитации
- •Реакция связывания комплемента
- •Реакция иммунофлюоресценции
- •Реакция торможения гемагглютинации
- •Раздел 2 инфекционная микробиология возбудители бактериальных инфекций пиогенные кокки
- •Общая характеристика патогенных энтеробактерий и вызываемых ими кишечных инфекций
- •Эшерихии
- •Возбудители брюшного тифа и паратифов а и в
- •Возбудители сальмонеллезов
- •Возбудители дизентерии
- •Холерный вибрион
- •Коринебактерии дифтерии
- •Возбудители туберкулеза и микобактериозов
- •Возбудитель сифилиса
- •Возбудители вирусных инфекций общая характеристика вирусов
- •Вирусы гриппа
- •Вирусы парагриппа
- •Аденовирусы
- •Вирусы гепатита
- •Спид и спид–ассоциированные инфекции
- •Возбудители протозойных болезней плазмодии малярии
- •Токсоплазмы
- •Трихомонады
- •Лямблии
- •Приложение устройство, оснащение и правила работы в микробиологических лабораториях
Выделение чистых культур бактерий
Чистая культура – это определенный вид микроорганизма, по наличию которого в организме больного человека и животного можно подтвердить поставленный диагноз инфекционного заболевания.
Получение чистой культуры и умение установить ее видовую принадлежность в медицинской микробиологии имеют первостепенное значение. При выполнении этой задачи следует иметь в виду, что в патологических материалах возбудитель заболевания, как правило, находится в ассоциации с банальной (посторонней) микрофлорой. Следовательно, для его изоляции гной, мокроту, осадки мочи, испражнения и прочие экскреты необходимо засеять так, чтобы получить колонии. С этой целью бактериальной петлей или шпателем материалы засевают на агаризованные среды в чашках Петри. Выросшие колонии после детального изучения пересевают на скошенные и жидкие среды для накопления биомассы. В процессе накопления исследуются культуральные свойства чистой культуры (I этап идентификации вида).
Окончательное заключение о природе чистой культуры (вида) делают только после всестороннего изучения биохимических свойств, которые тесно переплетены с культуральными; серологических реакций (действие специфических сывороток); фагочувствительности культуры и ее патогенности для экспериментальных животных (II этап идентификации). При этом следует учитывать некоторые различия в выборе метода получения чистых культур аэробных и анаэробных бактерий.
Выделение и изучение культуральных свойств бактерий–аэробов
Рис.
18. Термостат
Первый день исследования. Изучаемый материал микроскопируют и высевают на плотную среду в чашки Петри шпателем или бактериальной петлей (в отдельных случаях – в жидкую среду обогащения). Посевы помещают в термостат на 18–24 ч при температуре 37С.
Второй день исследования. На извлеченных из термостата чашках Петри с посевами изучают специфические признаки выросших на поверхности питательной среды колоний.
1. Вначале рассматривают их невооруженным глазом со стороны дна чашки Петри в проходящем свете. Если имеются два различных вида колоний, их нумеруют и описывают каждую в отдельности. В протоколе отмечают следующие данные: а) размеры колоний (крупная – 4–5 мм в диаметре и более, средняя –2–4 мм, мелкая – 1–2 мм, карликовая – менее 1 мм); б) форму очертаний (правильно или неправильно округлая, розеткообразная, ризоидная и др.); в) степень прозрачности (непрозрачная, полупрозрачная, прозрачная).
2. Далее колонии описывают в отраженном свете со стороны крышки, отмечая: а) цвет (бесцветная, пигментированная); б) поверхность (гладкая, блестящая, влажная или морщинистая, матовая, сухая); в) положение на питательной среде (возвышающаяся над средой, погруженная или сливающаяся с ней, плотно прилегающая к среде, уплощенная).
3. Приступают к микроскопическому изучению структуры колоний. Чашку Петри устанавливают вверх дном на предметном столике микроскопа, опускают конденсор и объективом х8 изучают: а) характер краев (ровные, волнистые, зазубренные, бахромчатые); б) структуру (гомогенная или аморфная, зернистая, волокнистая).
Из колонии готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют. Остаток колонии пересевают на скошенный агар для получения чистой культуры в достаточном количестве. Пробирки с посевами помещают в термостат на 18–24 ч при температуре 37 °С.
Техника посева колонии на скошенный агар. Чашку Петри с отмеченной колонией берут в левую руку. Бактериальную петлю держат ближе к концу петледержателя и фиксируют руку, опираясь мизинцем о борт чашки. Снимают петлей остаток отмеченной колонии, чашку Петри вкладывают в крышку и засевают скошенный агар.