- •Раздел 1 общеприкладная медицинская микробиология микробиология как наука
- •История развития микробиологии
- •Систематика и номенклатура микроорганизмов
- •Микроскопические методы исследования микроскопы и способы микроскопии
- •Методы приготовления мазков–препаратов из материала (культур) и способы их окрашивания
- •Морфология и ультраструктура прокариот эубактерии
- •Патогенные спирохеты
- •Актиномицеты
- •Риккетсии
- •Микоплазмы
- •Физиология микроорганизмов
- •Выделение чистых культур бактерий
- •Выделение и изучение культуральных свойств бактерий–аэробов
- •Особенности выделения и изучения культуральных свойств бактерий–анаэробов
- •Действие физических, химических и биологических факторов на микроорганизмы
- •Бактериофаги (фаги)
- •Стерилизация
- •Инфекция
- •Механизмы неспецифической резистентности
- •Антигены как индукторы приобретенного антимикробного иммунитета
- •Органы иммунитета и иммунокомпетентные клетки
- •Антитела (иммуноглобулины)
- •Процесс антителообразования
- •Аллергия (гиперчувствительность)
- •Патогенез и характер проявления анафилаксии и инфекционной аллергии
- •Иммунопрофилактика и иммунотерапия вакцины
- •Иммунные сыворотки (гамма–глобулины)
- •Серологические реакции иммунитета
- •Реакция агглютинации
- •Реакция преципитации
- •Реакция связывания комплемента
- •Реакция иммунофлюоресценции
- •Реакция торможения гемагглютинации
- •Раздел 2 инфекционная микробиология возбудители бактериальных инфекций пиогенные кокки
- •Общая характеристика патогенных энтеробактерий и вызываемых ими кишечных инфекций
- •Эшерихии
- •Возбудители брюшного тифа и паратифов а и в
- •Возбудители сальмонеллезов
- •Возбудители дизентерии
- •Холерный вибрион
- •Коринебактерии дифтерии
- •Возбудители туберкулеза и микобактериозов
- •Возбудитель сифилиса
- •Возбудители вирусных инфекций общая характеристика вирусов
- •Вирусы гриппа
- •Вирусы парагриппа
- •Аденовирусы
- •Вирусы гепатита
- •Спид и спид–ассоциированные инфекции
- •Возбудители протозойных болезней плазмодии малярии
- •Токсоплазмы
- •Трихомонады
- •Лямблии
- •Приложение устройство, оснащение и правила работы в микробиологических лабораториях
Реакция иммунофлюоресценции
Имеются два варианта постановки (РИФ): прямая и непрямая (рис. 32). Прямая РИФ – простая реакция, но для ее постановки требуется большое количество меченых антимикробных сывороток. Непрямая РИФ – более сложная реакция, но поставить ее можно имея только одну меченую сыворотку. При этом антиген вначале обрабатывают обычной иммунной специфической сывороткой, а затем к иммунному комплексу антиген–антитело прибавляют меченную флюоресцеинизотиоцианатом (ФИТЦ) антисыворотку к антителу этого комплекса. Обычно индикация антигена (микроба) на первом этапе проводится иммунной кроличьей сывороткой, тогда на втором этапе используется меченная ФИТЦ антикроличья сыворотка, полученная путем иммунизации гамма–глобулинами кроликов, ослов или других животных.
Постановка прямой РИФ: на обезжиренном предметном стекле из исследуемого материала делают тонкие мазки, а из органов и тканей – мазки–отпечатки. Их подсушивают, фиксируют, наносят на мазки взятую в рабочем разведении люминесцирующую сыворотку и помещают во влажную камеру при температуре 37 °С на 20–30 мин. Затем, чтобы удалить избыток флюоресцирующих антител, их промывают (10–15 мин) в забуференном изотоническом растворе натрия хлорида с последующим ополаскиванием (10 мин) в дистиллированной или проточной воде. Сушат препараты при комнатной температуре. Исследуют в люминесцентном микроскопе с использованием иммерсионного объектива. Интенсивность флюоресценции в виде зеленого ободка вокруг бактерий оценивают по четырехбалльной шкале: «++++» – очень яркая; «+++» – яркая; «++» –выраженная ободочная флюоресценция; «+» – слабое свечение клеток.
Рис
32. Реакция
иммунофлюоресценции.
а
– прямая, 6
– непрямая
Рис 33
Реакция нейтрализации вирусов: а– на
культуре клеток, б– на курином эмбрионе,
в– в организме животных
Подобным образом с помощью РН идентифицируются вирусы, выделенные из материала больных при заражении им куриных эмбрионов и животных В таких случаях к вируснейтрализующим сывороткам прибавляют вируссодержащие жидкости эмбрионов и взвеси пораженных органов животных После определенного времени инкубации смесями инфицируют культуры клеток, куриные эмбрионы и животных (рис 33).
В серодиагностике вирусных инфекций РН определяют вирус–нейтрализующие антитела в сыворотке больных по известному вирусу. Ставят ее в динамике с парными сыворотками, одну из которых берут в разгаре заболевания, а вторую – спустя 2–3 недели, и по четырехкратному нарастанию титра антител в этой последней подтверждают диагноз.