Серопрофилактика

Серопрофилактика

(от лат. serum — сыворотка и Профилактика)

        метод предупреждения инфекционных болезней человека и животных при помощи иммунных сывороток; создаётся сравнительно непродолжительный (1—4 нед) пассивный Иммунитет. В современной медицинской практике для С. всё шире применяют Гамма-глобулины. С. проводят в эпидемических очагах лицам, имевшим контакт с больными (например, корью, коклюшем), при травмах (для предупреждения столбняка), при укусах животных (для профилактики бешенства) и клещей (для предупреждения клещевого энцефалита). Плановая С. осуществляется для профилактики инфекционного гепатита. В ветеринарной практике применяют С. колибактериоза телят, паратифа поросят и т. п. При некоторых инфекциях используют глобулиновые фракции сывороток (болезнь Ауески) или сыворотку молока иммунизированных животных (противоящурный иммунолактон

билет 41

Вирусы. Ультраструктура и химический состав. Принципы классификации. Функции отдельных ультраструктур вириона.

Вирусы (Vira) – микроорганизмы, имеющие ультрамикроскопические размеры (нм), не имеющие клеточного строения и состоящие из нуклеиновой кислоты, упакованной в белковую оболочку – капсид (некоторые могут иметь внешнюю оболочку – суперкапсид).

Вирусы не имеют собственных метаболических систем. Неспособны к росту и бинарному делению. Абсолютные внутриклеточные паразиты.

По типу нуклеиновой кислоты вирусы подразделяются на РНКовые (ортомиксовирусы, парамиксовирусы, рабдовирусы, пикорнавирусы, ретровирусы) и ДНКовые (поксвирусы, герпесвирусы, аденовирусы, паповавирусы).

Внеклеточная форма существования называется вирионом. Могут иметь палочковидную, цилиндрическую, нитевидную, сферическую, кубовидную и др. формы.

Нуклеиновая кислота вируса может быть двунитчатой и однонитчатой, непрерывной и фрагментированной, линейной и кольцевой.

Капсид состоит из структурных белковых субъединиц, уложенных в виде спирали вокруг осей симметрии (палочко- и нитевидые) либо по осям симметрии икосаэдра (сферические). Структурные вирусные белки (капсид) обеспечивают защиту нуклеиновой кислоты, а также адсорбцию вируса на поверхности клетки хозяина.

Во внешней оболочке сложных вирионов обнаружены липиды и углеводы. Липиды идентичны липидам оболочки клеток хозяина, а углеводы входят в состав вирусных гемагглютининов (антигены).

2.. Реакция непрямой гемагглютинации, рнга (Indirect hemagglutination test)

- метод выявления антигенов и антител, основанный на способности эритроцитов, на поверхности которых предварительно адсорбированы антигены или антитела, агглютинироваться в присутствии гомологичных сывороток или соответствующих антигенов.

При обнаружении антигенов реакция обозначается обратной пассивной гемагглютинацией - РОПГА (reversed passive hemagglutination test), а при обнаружении антител - пассивной гемагглютинацией - РПГА (passive hemagglutination test). РНГА нашла широкое применение для выявления серологических маркеров инфицирования вирусом гепатита В, особенно HBsAg и антител к нему.

В настоящее время разработаны различные методы изготовления эритроцитарных диагностикумов, отличающихся по способам сенсибилизации эритроцитов (с помощью танина, глютарового альдегида, хлористого хрома, риванола и т.п. ), их видовой принадлежности (человека, барана, курицы, индюка и т. д. ), вариантам постановки реакции (в планшетах для микротитрования, в пробирках, капиллярах и т. д. ) и учета результатов (визуальный и инструментальный). Эритроцитарные диагностикумы для выявления HBsAg и анти-HBs выпускаются многими предприятиями и фирмами как у нас в стране, так и за рубежом.

Чаще РНГА проводится в планшетах для микротитрования, в которых предварительно приготовляются разведения исследуемой сыворотки и контрольных образцов. После внесения эритроцитарного диагностикума и инкубации проводится учет результатов реакции. Положительными считают образцы, в которых происходит агглютинация эритроцитов, имеющая вид перевернутого “зонтика”. При отрицательной реакции — эритроциты оседают на дно лунки в виде кольца или диска.

Для подтверждения специфичности полученных результатов реакция ставится как с “опытным” эритроцитарным диагностикумом (т. е. эритроциты, сенсибилизированные антигеном или антителами), так и с “контрольным” диагностикумом (т. е. эритроциты не сенсибилизированы антигеном или антителами). Наличие позитивной реакции с “контрольным” диагностическим препаратом свидетельствует о ложнопозитивной реакции. Для устранения неспецифических реакций исследуемую сыворотку обрабатывают несенсибилизированными эритроцитами. Обязательным условием проведения РНГА является реакция нейтрализации, т. е.конфирмационный тест.

По сравнению с такими методами, как РПГ, ВИЭФ и РСК, реакция непрямой гемагглютинации обладает более высокой чувствительностью (в 200 - 400 раз). Так, HBsAg в РПГА может быть выявлен в концентрациях 6-10 нг/ мл. Простота проведения реакции и экспрессность (20 - 30 минут) определили широкое применение данного метода в службе переливания крови для выявления HBsAg.

Кроме эритроцитарных диагностикумов для выявления HBsAg и анти-HBs разработаны диагностические препараты и для вы- явления анти-НВс, анти-НВс класса IgM (твердофазный вариант), HBeAg, антигена вируса гепатита А и антител к нему, однако, все они не нашли применения в практическом здравоохранении.

БИЛЕТ 40

1.. Структура клеточной стенки как принцип классификации прокариот. Формы бактерий и принципы деления на роды.

Клеточная стенка – один из основных структурных элементов бактериальной клетки. Она представляет собой биогетерополимер, являющийся плотной структурой, окружающей протопласт клетки и придающей ей постоянную форму. Химический состав клеточной стенки и её строение характерны для определенных групп прокариотов и служат их отличительными признаками. Однако основой клеточной стенки всегда является пептидогликан муреин (гетерополимерное образование, состоящее из гликановых цепей и перекрёстно связанных пептидов), от которого зависят её прочность и ригидность. По отношению к окраске по методу Грама бактерии разделяются на грамположительные и грамотрицательные. У первых пептидогликан многослоен, поэтому образовавшийся в процессе окраски комплекс генцианового фиолетового с йодом не вымывается спиртом, в то время как грамотрицательные бактерии, имея тонкий пептидогликан, обесцвечиваются им. При последующей окраске фуксином грамотрицательные бактерии окрашиваются в красный цвет, грамположительные сохраняют фиолетовый цвет. Поверх пептидогликана грамотрицательных бактерий расположена наружная мембрана, имеющая мозаичное строение и состоящая из фосфолипидов, липопротеидов и липополисахарида, а также белков-поринов (каналы).

В связи с различиями в строении клеточной стенки все бактерии делятся на 4 отдела:

• грациликуты – бактерии с тонкой клеточной стенкой, грамотрицательные (разл. бактерии + риккетсии и хламидии)

• фирмикуты – бактерии с толстой клеточной стенкой, грамположительные (разл. бактерии + актиномицеты, коринебактерии и микобактерии)

• тенерикуты – бактерии без ригидной клеточной стенки (микоплазмы)

• мендозикуты – архебактерии, отличающиеся дефектной клеточной стенкой

Существуют следующие формы бактерий:

• Палочковидная. Палочки. Большинство имеет форму прямого цилиндра, некоторые могут иметь слегка изогнутую форму (вибрионы, напр., холерный). Длина от 1 до 8 мкм, средний размер в поперечнике 0,5 – 2 мкм. Концы могут быть закруглёнными, ровными, как бы обрубленными (сибирская язва), заострёнными, утолщёнными (дифтерия). Могут располагаться хаотично, попарно – диплобактерии (клебсиеллы), цепочкой – стрептобактерии (мягкий шанкр) и стрептобациллы (сибирская язва).

• Шаровидная. Кокки. Имеют правильную сферическую или шаровидную форму, почковидную (гонококки), ланцетовидную (пневмококки). Средний диаметр 0,5 – 1,5 мкм. Диплококки располагаются попарно (пневмококки, менингококки, гонококки), стафилококки – в виде грозди винограда. Также возможно расположение цепочкой – стрептококки. Могут быть сарцины (пакетами – род Sarcina) и тетракокки (Aerococcus viridans).

• Спиралевидная. Спириллы. Спирохеты. Имеют изгибы, равные одному или нескольким оборотам спирали.

Непатогенные бактерии также могут быть иной формы.

2.. Иммуноферментный анализ — ИФА (иммунофермен-тный метод) — выявление антигенов с помощью соответствую­щих им антител, конъюгированных с ферментом (пероксидазой хрена, р-галактозой или щелочной фосфатазой). После соедине­ния антигена с меченной ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат, который расщепляется ферментом с ок­рашиванием раствора в желто-коричневый (пероксидаза) или жел­то-зеленый (фосфатаза) цвет. Наиболее распространен твердо­фазный иммуноферментный метод. На твердом носите­ле, например в лунках микропанелей из полистирола, сорбиру­ют антиген. В лунки с адсорбированным антигеном добавляют сы­воротку крови больного и затем антиглобулиновую (противоче-ловеческую) сыворотку, меченную ферментом, и субстрат для фермента. При положительном результате изменяется цвет раствора. Твердофазный носитель можно сенсибилизировать не только ан­тигеном, но и антителом. Тогда в лунки с сорбированными ан­тителами вносят искомый антиген, добавляют иммунную сыво­ротку против антигена, меченную ферментом, затем субстрат для фермента. Иммуноферментный метод применяется для диагнос­

24

тики вирусных, бактериальных и паразитарных заболеваний, в ча­стности диагностики ВИЧ-инфекций, гепатита В и др.

Радиоиммунологический анализ (РИА) — количе­ственное определение антител или антигенов, меченных радио­нуклидом, с применением аналогичных антител или антигенов: например, искомого антигена с применением иммунной сыво­ротки и аналогичного антигена, меченного радионуклидом. После их взаимодействия отделяют образовавшийся радиоактивный комплекс антиген — антитело и определяют его радиоактивность по счетчику импульсов: количество меченого антигена, связав­шегося с антителами, обратно пропорционально количеству искомого антигена. Широкое распространение получили так на­зываемые прямой и непрямой варианты твердофазного радио­иммунологического метода, при которых используют полисти­роловые плашки с адсорбированными антигенами или антите­лами. Метод применяют для выявления антигенов микроорганиз­мов, определения гормонов, ферментов, лекарственных веществ и иммуноглобулинов.

Билет 17

1.. Основные принципы выделения чистых культур микробов, культивируемых на живых объектах. Этапы выделения чистых культур. Методы индикации вирусов.

Для культивирования облигатных внутриклеточных паразитов (риккетсии, хламидии, вирусы) используют живые объекты – клеточные культуры, куриные эмбрионы и чувствительных лабораторных животных.

Клеточные культуры подразделяют на неперевиваемые (клетки эпителиальной или соединительной ткани в питательной среде), полуперевиваемые (диплоидные клетки человека) и перевиваемые (в основном опухолевые клетки – постоянное существование in vitro).

Куриные эмбрионы используют в возрасте 8 – 12 дней, они устойчивы к различным воздействиям.

При заражении лабораторных животных недостатком является необходимость последующего заражения клеточной культуры для получения чистой линии.

Методы индикации вирусов:

• гибель или заболевание живой системы

• цитопатическое действие

• реакция гемадсорбции («зонтик» - положительная, «пуговка» - отрицательная)

• обнаружение вирусных включений

• цветная проба

• метод бляшек во флаконе