- •Классификация вирусов
- •Особенности вирусных инфекций.
- •Культивирование и индикация вирусов
- •Бактериофаги
- •Вирусы типов в и с стабильны.
- •Вирусы парагриппа человека
- •Вирус паротита
- •Род Morbillivirus, вирус кори
- •Семейство коронавирусов (Coronaviridae)
- •Семейство пикорнавирусов (Picornaviridae)
- •Вирус гепатита а
- •Риновирусы
- •Альфавирус
- •Семейство флавивирусов (Flaviviridae)
- •Вирус клещевого энцефалита
- •Вирус лихорадки Денге
- •Вирус желтой лихорадки
- •Семейство буньявирусов
- •Хантавирусы (Род Hantavirus)
- •Семейство филовирусов
- •Семейство аренавирусов (Arenaviridae)
- •Семейство ретровирусов (retroviridae)
- •Семейство аденовирусов (adenoviridae)
- •Семейство герпесвирусов
- •Герпесвирусы 1 и 2 типа (впг 1, 2)
- •Вирус ветряной оспы и опоясывающего лишая
- •Вирус Эпштейна-Барр (вэб) (подсемейство Gammaherpesvirinae
- •Семейство поксвирусов
- •Вирусы гепатита с, дельта, е, g
- •Онкогенные свойства обычных вирусов.
- •Происхождение прионов и патогенез заболевания
- •Характеристика заболеваний
- •Лабораторная диагностика
Особенности вирусных инфекций.
Внутриклеточный паразитизм вирусов приводит к гибели клеток.
Размножение некоторых вирусов в клетках иммунной системы приводит к развитию иммунодефицитных состояний (вирус кори, ВИЧ, гепатита В, С).
Некоторые вирусы способны интегрировать с геномом клетки хозяина (ВИЧ, онкогенные РНК-содержащие вирусы).
Некоторые вирусы обладают тератогенным действием (вирус цитомегалии, краснухи).
Диагностика вирусных инфекций не проводится в каждом случае заболевания из-за массовости.
Вирусы могут вызывать медленные инфекции (вирусы кори, ВИЧ, бешенства, гепатит В, герпес).
Некоторые вирусы могут провоцировать развитие опухолей (герпесвирусы, гепатита В, С, аденовирусы). гепатита В, С
Культивирование и индикация вирусов
Культивирование вирусов человека проводят с целью лабораторной диагностики вирусных инфекций, для изучения вопросов патогенеза и иммунитета, для получения диагностических и вакцинных препаратов. Так как вирусы абсолютные паразиты, то их культивируют в организме или в живых клетках.
Для культивирования вирусов используют лабораторных животных, развивающиеся куриные эмбрионы, культуры клеток.
Лабораторных животных разными способами заражают (учитывают тропизм вирусов: ортомиксовирусами заражают интраназально, нейровирусами – субдурально). На основании типичных признаков заболевания и патоморфологических изменений органов животных можно судить о репродукции вирусов, т.е. проводить индикацию вирусов.
Куриный эмбрион является удобной моделью для культивирования вирусов, т.к. полости его стерильны, защищены твердой оболочкой. Индикацию вируса в курином эмбрионе проводят: по гибели эмбриона; помутнению хорион-аллантоисной оболочки; образованию бляшек на оболочке; в реакции гемагглютинации (происходит склеивание эритроцитов под действием гемагглютинина вирусов, который расположен в шипах суперкапсида).
Метод культур клеток. Для приготовления культур клеток используют различные ткани человека и животных. Чаще применяют культуры клеток из эмбриональных (куриные фибробласты, человеческие фибробласты) и опухолевых (злокачественно перерожденных) тканей, обладающих активной способностью к росту и размножению.
Различают три типа культур клеток: однослойные культуры клеток; культуры суспензированных клеток; органные культуры.
Однослойные культуры клеток по числу жизнеспособных генераций разделяют на первичные или первично трипсинизированные (куриные фибробласты, человеческие фибробласты); перевиваемые (способны размножаться в лабораторных условиях длительное время); полуперевиваемые (способны размножаться в течение 40-50 пассажей).
Для культивирования клеток необходимы питательные среды, которые по своему назначению делятся на ростовые и поддерживающие. В составе ростовых питательных сред должно содержаться больше питательных веществ, чтобы обеспечить активное размножение клеток для формирования монослоя. Поддерживающие среды должны обеспечивать лишь переживание клеток в уже сформированном монослое при размножении в клетке вирусов.
Широкое применение находят стандартные синтетические среды, например, синтетическая среда 199 и среда Игла. Независимо от назначения все питательные среды для культур клеток конструируются на основе сбалансированного солевого раствора. Чаще всего им является раствор Хенкса. Неотъемлемый компонент большинства ростовых сред – наличие 5-10 % сыворотки крови животных (телячьей, бычей, лошадиной), без наличия которой размножение клеток и формирование монослоя не происходит. В состав поддерживающих сред сыворотка не входит.
Культуры суспензированных клеток растут и размножаются во взвешенном состоянии при постоянном интенсивном перемешивании среды. Они используются для накопления вирусов.
Некоторые вирусы размножаются в органных культурах – это кусочки органов, выращенные вне организма и сохраняющие структуру данного органа.
О размножении вируса в культуре клеток судят по следующим признакам: цитопатогенному действию (ЦПД); образованию в клетках включений; появлению бляшек; феномену гемадсорбции; цветной пробе.
Цитопатогенное действие может проявляться полной дегенерацией клеток – слущиванием клеток с поверхности стекла после их гибели (энтеровирусы полиомиелита, Коксаки); частичной дегенерацией – округлением клеток, слиянием и образованием симпластов (вирус кори).
Образование включений в клетках – это скопление вирионов или отдельных компонентов в цитоплазме или в ядре клеток, выявляемые под микроскопом при специальном окрашивании. Вирус натуральной оспы образует цитоплазматические включения – тельца гварниери, вирусы герпеса, аденовирусы – внутриядерные включения.
Появление бляшек – зоны клеток, разрушенных вирусом (негативные колонии вирусов), обнаруживают в клеточных культурах, растущих на стекле и покрытых тонким слоем агара. Бляшки различаются по величине, форме, времени появления, поэтому данный тест используют для дифференциации вирусов.
Реакция гемадсорбции заключается в способности клеток, зараженных вирусами, адсорбировать на своей поверхности эритроциты, потому что эти клетки несут на поверхности гемагглютинины вируса.
Цветная реакция основана на изменении цвета питательной среды с индикатором, используемой для культур клеток. При росте клеток, не пораженных вирусом, идет накопление продуктов метоболизма, которые изменяют цвет питательной среды. При репродукции вирусов в культуре нарушается метаболизм клеток, и среда сохраняет первоначальный цвет.
При отсутствии ЦПД можно поставить реакцию интерференйии – исследуемая культура повторно заражается вирусом, вызывающим ЦПД. В положительном случае ЦПД будет отсутствовать (реакция интерференции положительная), если в исследуемом материале вируса не было, наблюдается ЦПД.
Лабораторная диагностика вирусных инфекций. Используют методы экспресс-диагностики для обнаружения возбудителя или его антигенов в клиническом материале (ИФА, РИА, метод молекулярной гибридизации, ИФА, ПЦР, ВИЭФ, РПГА, электронной микроскопии, иммуно электронной микроскопии).
Выделение вируса и его индикацию и идентификацию проводят в вирусологическом методе диагностики. С этой целью необходимо обеспечить взятие материла от больного, правильную транспортировку его в лабораторию и грамотного заполнения сопроводительных документов. Выделение вируса из клинического материала проводят путем заражения культур клеток куриных эмбрионов и лабораторных животных. Индикацию вирусов проводят по гибели эмбрионов, постановке РГА, ЦПД в культуре клеток.
Идентификацию вирусов проводят с помощью серологических методов (постановки РТГА, РСК, ИФА, РИА, РН). Серологическая диагностика вирусных инфекций проводится с парными сыворотками больного, взятыми в острой фазе заболевания и через 10-14 дней. Обнаружение четырехкратного и более повышения титра антител рассматривается как диагностический признак острой вирусной инфекции.