- •Предисловие
- •1.1. Определение и характеристика
- •1.2. Состав микрофлоры основных биотопов человека
- •2. Факторы патогенности анаэробных микроорганизмов
- •2.1. Роль анаэробной эндогенной микрофлоры в патологии человека
- •3. Основные формы анаэробной инфекции
- •3.1. Плевролегочная инфекция
- •3.2. Диабетическая инфекция стопы
- •3.3. Бактериемия и сепсис
- •3.4. Столбняк
- •3.5. Диарея
- •3.6. Хирургическая анаэробная инфекция ран и мягких тканей
- •3.7. Газообразующая инфекция мягких тканей
- •3.8. Клостридиальный мионекроз
- •3.9. Медленно развивающаяся некротическая раневая инфекция
- •3.10. Внутрибрюшинная инфекция
- •3.11. Характеристика экспериментальных анаэробных абсцессов
- •3.12. Псевдомембранозный колит
- •3.13. Акушсрско-гинеколошческие инфекции
- •3.14. Анаэробная инфекция у онкологических больных
- •4. Лабораторная диагностика
- •4.1. Исследуемый материал
- •4.2. Этапы исследования материала в лаборатории
- •4.3. Прямое исследование материала
- •4.4. Способы и системы для создания анаэробных условий
- •4.5. Питательные среды и культивирование
- •Т а б л и ц а 7. Среды рекомендуемые для первичного выделения анаэробных микроорганизмов
- •Т а б л и ц а 8. Селективные агенты для облигатных анаэробов
- •5. Антибактериальная терапия анаэробной инфекции
- •5.1. Характеристика основных антимикробных препаратов, используемых при лечении анаэробной инфекции
- •5.2. Комбинации бэта-лактамных препаратов и ингибиторов бэта-лактамазы
- •5.3. Клиническое значение определения чувствительности анаэробных микроорганизмов к антимикробным препаратам
- •6. Коррекция микрофлоры кишечника
- •7. Заключение
4.2. Этапы исследования материала в лаборатории
Успешная диагностика и лечение анаэробной инфекции возможна только при заинтересованном сотрудничестве микробиологов и клиницистов соответствующего профиля. Получение адекватных образцов проб для микробиологического исследования является критическим фактором. Методы взятия материала зависят от локализации и типа патологического процесса. Лабораторное исследование основано на индикации и последующей видовой идентификации анаэробных и аэробных микроорганизмов, содержащихся в исследуемом материале, с помощью традиционных и экспресс методов, а также на определении чувствительности выделенных микроорганизмов к антимикробным химиотерапевтическим препаратам (2).
4.3. Прямое исследование материала
Имеется много быстрых прямых тестов, которые убедительно указывают на присутствие анаэробов в большом количестве в исследуемом материале. Некоторые из них весьма просты и дешевы и поэтому имеют преимущества перед многими дорогостоящими лабораторными исследованиями.
1. 3 а п а х. Зловонные материалы всегда содержат анаэробы, только единичные из них не имеют запаха.
2. Газожидкостная хроматография (ГЖХ). Относится к числу экспресс методов диагностики. ГЖХ позволяет определить в гное короткоцепочечные жирные кислоты (уксусную, пропионовую, изовалериановую, изокапроновую, капроновую), которые обусловливают запах. С помощью ГЖХ по спектру летучих жирных кислот можно осуществить видовую идентификацию присутствующих в нем микроорганизмов.
3. Флуоресценция. Исследование материалов (гноя, тканей) в ультрафиолетовом свете при длине волны 365 нм позволяет выявить интенсивную красную флуоресценцию, которая объясняется присутствием черно пигментированных бактерий, принадлежащих к группам Васteroides и Porphyromonas, и которая указывает на наличие анаэробов.
4. Бактериоскопия. При исследовании многих препаратов, окрашенных по методу Грама, в мазке выявляется присутствие клеток воспалительного очага, микроорганизмов, особенно полиморфных грамотрицательных палочек, малых грамположителъных кокков или грамположительных бацилл.
5. Иммунофлуоресценция. Прямая и непрямая иммунофлуоресценция являются экспресс методами и позволяют выявить анаэробные микроорганизмы в исследуемом материале.
6. Иммуноферментный метод. Иммуноферментный анализ позволяет определить наличие структурных антигенов или экзотоксинов анаэробных микроорганизмов.
7. Молекулярно-биологические методы. Наибольшее распространение, чувствительность и специфичность в последние годы показала цепная полимеразная реакция (ЦПР). Она применяется как для выявления бактерий непосредственно в материале, так и для идентификации.
4.4. Способы и системы для создания анаэробных условий
Материал, забранный из соответствующих источников и в подходящие для этих целей контейнеры или транспортную среду, должен быть доставлен незамедлительно в лабораторию. Однако имеются сведения, что клинически значимые анаэробы в больших объемах гноя или в анаэробной транспортной среде выживают в течение 24 часов. Важно чтобы среда, в которую проведен посев, инкубировалась в анаэробных условиях или была помещена в заполненный СО2 сосуд и сохранялась до момента переноса в специальную инкубационную систему. Имеется три типа анаэробных систем, широко используемых в клинических лабораториях. Более широко применяются системы микроанаэростатов типа (GasPark, BBL, Cockeysville), которые используются в лабораториях многие годы, особенно в малых лабораториях, и позволяют получить удовлетворительные результаты. Чашки Петри с посевом анаэробных бактерий помещаются внутрь сосуда одновременно со специальным пакетом, генерирующим газ, и индикатором. В пакет добавляется вода, сосуд герметически закрывается, из пакета в присутствии катализатора (обычно палладиевого) выделяется СО2 и Н2. В присутствии катализатора Н2 реагирует с О2 образуя воду. СО2 необходим для роста анаэробов, так как они являются капнофилами. В качестве индикатора анаэробных условий добавляется метиленовый синий. Если газогенерирующая система и катализатор работают эффективно, то наблюдается обесцвечивание индикатора. Для большинства анаэробов необходимо культивирование не менее 48 часов. После этого камеру открывают и чашки исследуют первично, что представляется не совсем удобным, так как анаэробы чувствительны к кислороду и быстро утрачивают жизнеспособность.
В последнее время в практику вошли более простые анаэробные системы - анаэробные мешки. В прозрачный, герметически закрываемый полиэтиленовый мешок помещают одну или две засеянных чашки с генерирующим газ пакетом и инкубируют в условиях термостата. Прозрачность полиэтиленовых мешков позволяет легко проводить периодический контроль за ростом микроорганизмов.
Третьей системой культивирования анаэробных микроорганизмов является автоматически герметизированная со стеклянной передней стенкой камера (анаэробная станция) с резиновыми перчатками и автоматической подачей безкислородной смеси газов (N2 , H2, СО2). Материалы, чашки, пробирки, планшеты для биохимической идентификации и определения чувствительности к антибиотикам помешаются в этот кабинет через специальный люк. Все манипуляции выполняются бактериологом в резиновых перчатках. Материал и чашки в данной системе могут просматриваться ежедневно, а посевы могут инкубироваться от 7-10 дней.
Эти три системы имеют свои достоинства и недостатки, но они эффективны для выделения анаэробов и должны быть в каждой бактериологической лаборатории. Часто они используются одновременно, хотя наибольшая надежность принадлежит методу культивирования в анаэробной станции.