- •Билеты по микробиологии
- •1. Возникновение микробиологии. Работы Пастера и Коха
- •2. Предмет и основные этапы развития микробиологии
- •3. Основные этапы развития медицинской микробиологии
- •1908Г.- Нобелевская премия
- •1908 Г. – и.И. Мечников и Эрлих п.
- •4. Характеристика основных таксономических категорий
- •5. Три домена живой природы. Теория существования прокариот
- •6. Главный современный критерий систематизации прокариот
- •3 Раздела мб по объектам –эукариоты, прокариоты, вирусы
- •7. Значение бактерий в эволюции жизни на земле
- •8. Распространение и функциональная роль бактерий
- •9. Главные отличия прокариот от эукариот
- •10. Три источника энергии у бактерий
- •11. Типы дыхания бактерий
- •12. Этапы биосинтеза белка
- •13. Ферменты микроорганизмов
- •14. Особенности строения прокариотической клетки
- •15. Морфология бактерий
- •16. Цитоплазма бактериальной клетки
- •17. Строение и функции цитоплазматической мембраны
- •18. Периплазматическое пространство бактерий
- •19. Строение муреина (пептидогликана, пг) кс бактерий
- •20. Действие лизоцима и литических ферментов на пг
- •21. Действие пенициллина и в-лактамных антибиотиков на пг
- •23. Пептидная часть кс. Особенности строения и синтеза
- •25. Особенности строения кс Гр(-) бактерий
- •26. Строение и функции липополисахарида внешней мембраны бактерий
- •27. Особенности строения кс микобактерий
- •28. Микроорганизмы, лишенные кс
- •29. Капсула бактерий
- •30. Строение и свойства эндоспор бактерий
- •31. Образование, функции, прорастание эндоспор
- •32. Бактериальные фимбрии (пили, ворсинки), классификация фимбрий
- •33. Типы жгутикования, строение и работа жгутиков бактерий
- •34. Включения в цитоплазме бактерий
- •35. Особенности размножения бактерий
- •36. Покоящиеся формы бактерий
- •37. Методы микроскопии м/о
- •38. Основные методы окраски м/о, применяемые в медицинской микробиологии
- •39. Исследование м/о в окрашенном и неокрашенном состоянии
- •40. Понятие об идентификации бактерий
- •41. Способы культивирования
- •42. Классификация и назначение питательных сред
- •4. Консервирующие (траспортные)-
- •43. Культивирование м/о в лабораторных условиях
- •44. Особенности культивирования облигатных анаэробов
- •45. Рост и размножение бактерий. Факторы роста
- •46. Метод получения чистых культур м/о
- •48. Особенности строения бактериальной колонии
- •49. Особенности строение и функции бактериальной биопленки
- •50. Гетерогенность микробных популяций. Морфологические типы клеток микробных популяций
- •51. Биовар, серовар
- •52. Классификация м/о по отношению к температуре
- •53. Особенности строения бактериального генома
- •1. Плазмиды
- •54. Организация генетического материала у бактерий
- •55. Понятие о плазмидах. Характеристика основных типов плазмид
- •56. Генетическая трансформация бактерий
- •3 Способа передачи генетической информации
- •57. Коньюгация бактерий
- •58. Характеристика процесса трансдукции
- •59. Характеристика процесса трансформации
- •63. Движение бактерий – 2-й фактор патогенности
- •64. Понятие дисбиоценоза, пути коррекции
- •65. Особенности колонизации м/о различных органов человека
- •66. Особенности постоянной и транзиторной микрофлоры человека
- •67. Основные закономерности строения нормальной микрофлоры
- •68. Микрофлора тела здорового человека
- •69. Функции микробиоты кишечника
- •70. Роль микрофлоры толстого кишечника
- •71. Микрофлора ротовой полости
- •72. Микрофлора кожи
- •73. Понятие сукцессии, причины
- •74. Гетерогенность микробных популяций. Морфологические типы клеток микробных популяций
- •75. Иммуноферментный анализ
- •76. Реакции агглютинации, разновидности и применение
- •77. Реакции преципитации, разновидности и применение
- •78. Реакции связывания комплемента
- •79. Реакции иммунофлюоресценции
- •80. Этапы цикла амплификации при проведении пцр
- •81. Основные компоненты пцр, достоинства и недостатки метода
- •82. Открытие вирусов, основы классификации
- •1 Классификация. Тип строения вириона и механизм взаимодействия с клеткой-хозяином
- •2 Классификация. Характеристика природы хозяина
- •83. Строение вирусной частицы
- •84. Особенности генома вирусов
- •87. Строение бактериофагов
- •88. Типы вирусных инфекций бактерий, понятие лизогении
- •89. Значение бактериофагов и их применение в медицине
46. Метод получения чистых культур м/о
Чистой культурой называют такую культуру, которая содержит микроорганизмы одного вида. Выделение чистых культур бактерий - обязательный этап бактериологического исследования в лабораторной диагностике инфекционных болезней, в изучении микробной загрязненности различных объектов окружающей среды, и, в целом, при любой работе с микроорганизмами.
Исследуемый материал (гной, мокрота, фекалии, кровь и другой материал от больных; вода, почва, воздух, пищевые продукты, трупы животных и человека, переносчики) обычно содержит ассоциации микробов.
Выделение чистой культуры позволяет изучить морфологические, культуральные, биохимические, антигенные и другие признаки, по совокупности которых определяется видовая и типовая принадлежность возбудителя, то есть производится его идентификация.
Методы выделения чистых культур м/о
Посев однократным истощающим штрихом
Посев истощающим штрихом секторами
Посев на скошенный агар, метод Шукевича
Посев на скошенный агар применяют для накопления и хранения чистой культуры бактерий
Метод Шукевича - применяется для получения чистой культуры протея и других микроорганизмов обладающих «ползущим» ростом. Посев исследуемого материала производят в конденсационную воду у основания скошенного агара . Подвижные микроорганизмы (протей) способны подниматься вверх по скошенному агару , неподвижные формы остаются расти внизу на месте посева. Пересевая верхние края культуры можно получить чистую культуру.
Посев уколом
Метод Дригальского
0,1мл материала вносят в первую чашку и стерильным стеклянным шпателем распределяют по поверхности среды. Затем этим же шпателем (не прожигая его в пламени горелки) делают такой же посев во второй и третьей чашках. С каждым посевом бактерий на шпателе остается все меньше и меньше и, при посеве на третью чашку, бактерии будут распределяться по поверхности питательной среды отдельно друг от друга. Через 1-7 сут выдерживания чашек в термостате (в зависимости от скорости роста микроорганизмов) на третьей чашке каждая бактерия дает клон клеток, образуя изолированную колонию, которую пересевают на скошенный агар с целью накопления чистой культуры.
Метод Коха (метод серийных разведений)
последовательное разведение исследуемого материала в жидкой питательной среде до концентрации одной клетки в объеме.
Метод мембранных фильтров
Этапы выделения чистой культуры микроорганизмов
I этап (нативный материал)
Микроскопия (ориентировочное представление о микрофлоре).
Посев на плотные питательные среды (получение колоний).
II этап (изолированные колонии)
Изучение колоний (культуральные свойства бактерий).
Микроскопическое изучение микробов в окрашенном мазке
(морфологические свойства бактерий).
Посев на скошенный питательный агар для выделения чистой культуры.
III этап (чистая культура)
Определение культуральных, морфологических, биохимических
и других свойств для идентификации культуры бактерий
Выделение чистой культуры
Культуральные свойства:Характеристика колоний микроорганизма
Морфологическое и структурное разнообразие колоний:
1 — формы выпуклости колоний над поверхностью питательной среды; 2 — очертания колоний; 3 — характер края колоний; 4 — внутренняя структура колоний.
Форма колоний:
а – круглая; б – круглая с фестончатым краем; в – круглая с валиком по краю; г; д – ризоидная; е – с ризоидным краем; ж –амебовидная; з – нитевидная; и – складчатая; к – неправильная; л – концентрическая; м – сложная
Профиль колоний: а – изогнутый; б – кратерообразный; в – бугристый; г – врастающий в агар; д – плоский; е –выпуклый; ж – каплевидный; з - конусовидный
Край колоний: а - гладкий; б – волнистый; в – зубчатый; г – лопастный; д – неправильный; е – реснитчатый; ж – нитчатый; з – ворсинчатый; и - ветвистый
47. R- и S- типы колоний м/о
Своеобразной формой изменчивости является R-S-диссоциация бактерий. Она возникает спонтанно вследствие образования двух форм бактериальных клеток, которые отличаются друг от друга по характеру образуемых ими колоний на твердой питательной среде. Один тип - R-колонии (англ. rough - неровный) - характеризуется неровными краями и шероховатой поверхностью, второй тип - S-колоний (англ. smooth- гладкий)- имеет круглую форму, гладкую поверхность. Процесс диссоциации, т.е. расщепления бактериальных клеток, формирующих оба типа колоний, обычно протекает в одном направлении: от S- к R-форме, иногда через промежуточные стадии образования слизистых колоний. Обратный переход R- в S-форму наблюдается реже. Для большинства вирулентных бактерий характерен рост в виде S-формы колоний. Исключение составляют микобактерии туберкулеза, иерсинии чумы, сибиреязвенные бактерии и некоторые другие, которые растут в R-форме.
В процессе диссоциации одновременно с изменением морфологии колоний меняются биохимические, антигенные, патогенные свойства бактерий, их устойчивость к физическим и химическим факторам внешней среды.
Мутации, которые приводят к S-R-диссоциации, относятся к инсертационным, поскольку они возникают после встраивания внехро-мосомных факторов наследственности, в том числе и умеренных фагов в бактериальную хромосому. Если эта мутация приводит к утрате генов, контролирующих образование детерминантных полисаха-ридных звеньев ЛПС у грамотрицательных бактерий, то образуются R-мутанты. Они формируют шероховатые колонии, изменяют свои антигенные свойства и резко ослабляют патогенность. У дифтерийных бактерий S-R-диссоциация связана с их лизогенизацией соответствующими бактериофагами. При этом R-формы образуют токсин. У других бактерий R-формы возникают после интеграции в их хромосому R-плазмиды, транспозонов или Is-последовательностей. R-формы пиогенных стрептококков и ряда других бактерий образуются в результате рекомбинаций.
Биологическое значение S-R-диссоциации состоит в приобретении бактериями определенных селективных преимуществ, обеспечивающих их существование в организме человека или во внешней среде. К ним относится более высокая устойчивость S-форм к фагоцитозу макрофагами, бактерицидному действию сыворотки крови. R-формы обладают большей устойчивостью к факторам окружающей среды. Они более длительное время сохраняются в воде, молоке.
Вместе с тем S-R-диссоциация во многих случаях усложняет бактериологическую диагностику ряда инфекционных заболеваний, например дизентерии Зонне, эшерихиоза, вызванного Е. coli О124 и др.