Характеристика бактериальных экзо- и эндо-токсинов

Свойства	Экзотоксины	Эндотоксины
Химическая природа	Белки (9-19 аминокислот). Имеют бифункциональную структуру: транспортная группа взаимодействует со специфическими рецепторами клетки; токсическая (активатор) проникает внутрь клетки и блокирует жизненно важные метаболические процессы.	ЛПС с белком
Происхождение	Выделяются в процессе жизнедеятельности, чаще Гр+ бактерий. Обнаруживаются в фазе активного роста бактерий.	Связаны со структурами бактерий, выделяются при разрушении клеток, чаще Гр- бактерий.
Механизмы действия	1. Мембранотоксины - повышение проницаемости мембран эритроцитов (гемолизины), лейкоцитов (лейкоцидины) и др.клеток. 2. Гистотоксины - блокада синтеза белка и других биохимических процессов в клетке (цито-, энтеро-, нейротоксины). 3. Функциональные блокаторы - нарушение взаимосвязи и взаимодействия между клетками.	1. Общетоксическое действие. 2. Основная «точка приложения» - макрофаги, которые в ответ на действие эндотоксина выделяют эндогенные пирогены (интерлейкин-1). Ил-1 действует на центр терморегуляции и вызывает лихорадку. 3. Дилятация мелких кровеносных сосудов. 4. Повреждение эндотелия. 5. Запуск каскадов коагуляции (ДВС-синдром), что приводит к эндотоксическому шоку. 6. В небольших дозах эндотоксины повышают неспецифическую резистентность, т. к. усиливают фагоцитоз; активируют комплемент, обладая свойствами адъюванта.
Отношение к температуре	Термолабильны	Термостабильны
Степень ядовитости	Очень токсичны	Менее токсичны
Скорость действия	После инкубации 19-72 часа	Довольно быстро
Специфичность действия	Выражена	Лишена тропизма
Отношение к химическим веществам	Чувствительны к спирту, щелочам, кислотам, пищеварительным ферментам, при действии формалина переходят в анатоксин (применяется как вакцина).	Малочувствительны к химическим веществам, не переходят в анатоксины.
Антигенные свойства	Активные антигены	Слабые антигены

III. Факторы персистенции

Персистенция - длительное переживание возбудителя в организме

Факторы	Механизмы персистенции
Капсула, оболочечный антиген	Экранирование клеточной стенки и препятствие фагоцитозу
L-формы	Утрата клеточной стенки
Антигенная мимикрия	Антигенное сходство с клетками макроорганизма
Секретируемые микробные факторы - антилизоцимная активность (АЛА) - антикомплементарная активность (АКА) - антииммуноглобулиновая активность (АИГА) - антиинтерфероновая активность (АИА)	Инактивация механизмов естественной (неспецифической) защиты хозяина

Методики выявления:

а) плазмокоагулазной активности бактерий

Посев выделенной культуры бактерий проводят в разведённую физ. раствором 1:4 стерильную цитратную плазму крови. Пробирки ставят в термостат при 37°С на 2 - 5 часов. При наличии у выделенной культуры фермента плазмокоагулазы происходит коагуляция плазмы, а при отсутствии данного фермента жидкость будет прозрачной.

б) фибринолитической активности бактерий

Продлив время пребывания пробирок в термостате, можно наблюдать растворение сгустка, что свидетельствует о наличии фибринолитической способности изучаемого штамма.

в) лецитиназной активности бактерий

Лецитиназная активность проявляется при посеве на агар с яичным желтком в образовании вокруг колоний характерного помутнения с радужным венчиком.

г) гемолитической активности бактерий

Гемолитическая активность проявляется при посеве на кровяной агар образованием вокруг колоний зоны просветления.

Подпись преподавателя_________________________________________________________

Дата____________

Тема № 4. Иммунитет

ЗАНЯТИЕ № 8

ИММУНИТЕТ. НЕСПЕЦИФИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ ЗАЩИТЫ ОРГАНИЗМА

Цель: изучить виды и формы иммунитета, неспецифические механизмы резистентности.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ЗНАТЬ:

1. Понятие об иммунитете, виды иммунитета.

2. Неспецифические факторы защиты организма человека:

• механические барьеры;

• физико-химическая защита (рН среды, ферментативная активность

лизоцима, пепсина и др.);

• клеточные факторы защиты (фагоцитоз, фагоцитирующие клетки и их классификация). Механизм и фазы фагоцитоза. Завершенный и

незавер­шенный фагоцитоз;

• гуморальные неспецифические факторы защиты (система комплемента, β-лизины, интерфероны, лейкины, противовирусные ингибиторы,

лизоцим и др.).

3. Иммунобиологическое значение интерферонов. Их получение,

использо­вание.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН УМЕТЬ:

дать оценку значимости факторов неспецифического иммунитета.

СТУДЕНТ ДОЛЖЕН ИМЕТЬ ПРЕДСТАВЛЕНИЕ:

о препаратах, используемых для иммунокоррекции.

Работа № 1. Бактерицидная функция кожи

Цель: зарегистрировать результаты опыта по изучению бактерицидных свойств кожи (см. теоретическую справку)

Методика.

Для определения бактерицидной активности кожи суточную бульонную культуру кишечной палочки (1:50000) наносят на внутреннюю поверхность предплечья и распределяют равномерно шпателем. Делают отпечаток на предметное стекло со средой Эндо с одного участка исследуемой кожи, а через 15 минут - со смежного. Инкубируют посевы 18-24 часа при 37°С и подсчитывают колонии на 3 см² поверхности каждой пластины.

Индекс бактерицидности (ИБ) вычисляют по формуле:

ИБ=К1-К2х100

К1

где K l - количество колоний сразу после нанесения на кожу, К 2 - количество колоний через 15 минут после контакта.

У здоровых людей ИБ равен 90-100%

Дано:

1) посев-отпечаток с участка кожи с тест-культурой на предметном стекле со средой Эндо.

Результат:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

2) посев-отпечаток со смежного участка кожи через 15 мин после нанесения тест-культуры

Результат:____________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Работа № 2. Бактерицидная активность лизоцима слюны

Цель: определить активность лизоцима слюны (см. теоретическую справку)

Дано: набор для определения активности лизоцима: раствор слюны 1:20, взвесь суточной агаровой культуры микрококка, физ. Раствор, пипетки, пробирки.

Методика:

В пробирки «К» и «О» внести по 0,5 мл физ. раствора и раствора слюны, в каждую пробирку добавить по 0,5 мл взвеси культуры микрококка, встряхнуть; поставить в термостат на 30 мин.

«К» «О»

Результат:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Работа № 3. Бактерицидная активность сыворотки крови (БАСК)

Цель: Определить БАСК по отношению к кишечной палочке по методике, предложенной А.Д. Евтушенко с соав., 1982

Методика:

Из 18-ти часовой культуры кишечной палочки методом серийных разведений готовят рабочую концентрацию до 40-50 тыс. м. т. в 1 мл. Рабочую взвесь тест-микробов в количестве 0,1 мл высевают на чашку Петри с МПА. Шаблоном диаметром 20 мм по поверхности агара с культурой микроорганизмов делают отверстия (в центре и по периферии отмечают контрольные отверстия, на которые не наносится испытуемая сыворотка). На каждую площадку с посевом тест-культуры наносят пипеткой 0,05 мл исследуемой сыворотки. Через 24 часа инкубации в условиях термостата проводят подсчет выросших колоний, как на опытных, так и на контрольных площадках. Бактерицидную активность сыворотки крови рассчитывают по формуле:

БАСК(%) =100х(1- конечное количество жизнеспособных бактерий)

исходное количество бактерий

Нормативное значение - 80 - 90%

Дано: опыт по определению БАСК у четырех пациентов (см. теоретическую справку)

Результат:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Работа № 4. Фагоцитоз

Цель: Микроскопировать готовые препараты-мазки стафилококка и гонококка. Зарисовать в тетради картину фагоцитоза микроорганизмов. Выявить отличительные особенности завершенного (№ 1) и незавершенного (№ 2) фагоцитоза в препаратах-мазках. Сделать вывод.

Методы оценки функциональной активности фагоцитирующих клеток

Одной из основных функций гранулоцитов (полиморфноядерных лейкоцитов) и моноцитов крови является эндоцитоз - захват различных объектов: инертных частиц (латекс, уголь), живых или убитых микроорганизмов (бактерии, дрожжеподобные грибы). Количественную оценку фагоцитарной активности гранулоцитов и моноцитов проводят в цельной крови, в лейкоцитарной взвеси или в обогащенных фракциях фагоцитирующих клеток. В качестве стандартных объектов фагоцитоза используют монодисперсные частицы латекса диаметром от 1,0 до 2,0 мкм, суспензию убитых нагреванием клеток бактерий или дрожжеподобных грибов.

Показателями клеточных факторов неспецифической защиты организма являются: активность фагоцитоза (АФ) и фагоцитарный показатель (ФП).

Определение:

- обнаруживают под микроскопом 10-20 лейкоцитов, передвигая предметное стекло так, чтобы под объективом находился край препарата из исследуемой крови;

- подсчитывают число микробов, захваченных каждым обнаруженным лейкоцитом.

ФП - среднее число микробов в одном лейкоците. Норма 4,2.

АФ - процент лейкоцитов, участвующих в фагоцитозе. Норма 60%.

Дано:препараты-мазки, таблицы

Результат:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ Вывод:_________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Теоретическая справка

Работа № 1