2006_-Byelorussian_Pharmacopoeia_Volume_1

мешивают. После застывания агара чашки подсушивают для удаления конденса-

та с поверхности среды.

На поверхность агара бактериологической петлей или репликатором нано-

сят бляшками инокулят каждого тест-штамма бактерий и грибов на среды № 1 и № 2 соответственно.

Чашки со средой № 1 инкубируют при температуре от 300С до 350С в течение 48 часов. Чашки со средой № 2 инкубируют при температуре от 200С до 250С в тече- ние 3-5 суток.

Учет результатов

После окончания сроков инкубации посевов (появление типичного роста

тест-микроорганизмов в контрольных чашках без лекарственного средства) отме- чают наличие или отсутствие роста тест-штаммов бактерий и грибов на средах, в

которые вносили различные разведения лекарственного средства.

Отсутствие роста тест-микроорганизма на среде с препаратом свидетель-

ствует о том, что исследуемый препарат в данном разведении обладает антимик- робным действием в отношении определенного тест-микроорганизма.

НЕЙТРАЛИЗУЮЩИЕ АГЕНТЫ

Для нейтрализации активности антимикробных компонентов могут исполь-

зоваться нейтрализующие агенты. Они могут быть добавлены к буферизирован- ному раствору хлорида натрия и пептона рН 7,0, предпочтительно, перед стери-

лизацией. В случае применения нейтрализующих агентов должна быть показана

их эффективность и нетоксичность в отношении микроорганизмов.

Типичная нейтрализующая жидкость имеет следующий состав:

Раствор стерилизуют в паровом стерилизаторе при 1210С в течение 15 мин.

Если нейтрализующая способность раствора недостаточна, концентрация полисорбата 80 или лецитина может быть увеличена. Кроме того, могут быть до-

бавлены нейтрализаторы, перечисленные в Таблице 2.6.13.-3.

Таблица 2.6.13.-3

Инактиваторы антимикробных агентов, добавляемые к буферизированному рас- твору хлорида натрия и пептона рН 7,0

РЕКОМЕНДУЕМЫЕ РАСТВОРЫ И ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ

Нижеописанные растворы и питательные среды удовлетворяют целям, для которых они предназначены в фармакопейном испытании на микробную контами-

нацию. Могут быть использованы и другие среды, при условии, что они имеют

аналогичные питательные и селективные свойства в отношении тестируемых микроорганизмов.

Буферизированный раствор хлорида натрия и пептона рН 7,0

К этому раствору могут быть добавлены поверхностно-активные компонен-

ты и инактиваторы антибактериальных агентов, например, полисорбат 80 в коли- честве от 1 г/л до 10 г/л. Стерилизуют в паровом стерилизаторе при 1210С в тече- ние 15 минут.

Питательный бульон А (бульон на основе гидролизатов казеина и соевых

бобов)

Значение рН доводят таким образом, чтобы после стерилизации оно со- ставляло 7,3±0,2. Стерилизуют в паровом стерилизаторе при 1210С в течение 15 минут.

Агаризованная среда В (агаризованная среда на основе гидролизатов ка-

зеина и соевых бобов)

Значение рН доводят таким образом, чтобы после стерилизации оно со- ставляло 7,3±0,2. Стерилизуют в паровом стерилизаторе при 1210С в течение 15

минут.

Агаризованная среда С (декстрозный агар Сабуро с антибиотиками)

Значение рН доводят таким образом, чтобы после стерилизации оно со- ставляло 5,6±0,2. Стерилизуют в паровом стерилизаторе при 1210С в течение 15

минут. Непосредственно перед применением на литр среды добавляют 0,10 г бензилпенициллина натриевой соли и 0.10 г тетрациклина в виде стерильных рас-

творов или добавляют 50 мг хлорамфеникола на 1 литр среды перед стерилиза-

цией.

Значение рН доводят таким образом, чтобы после стерилизации оно со- ставляло 6,9±0,2. Стерилизуют в паровом стерилизаторе при 1210С в течение 15 минут и немедленно охлаждают.

Обогатительный питательный бульон Е (обогатительный бульон Моссе-

ля для энтеробактерий)

Значение рН доводят таким образом, чтобы после нагрева оно составляло 7,2±0,2. Нагревают при 1000С в течение 30 минут и немедленно охлаждают.

Агаризованная среда F (агаризованная среда с глюкозой, кристалличе-

ским фиолетовым, нейтральным красным и желчью)

Значение рН доводят таким образом, чтобы после нагрева оно составляло 7,4±0,2. Нагревают до кипения: не нагревают в автоклаве.

Значение рН доводят таким образом, чтобы после стерилизации оно со- ставляло 7,3±0,2. Стерилизуют в паровом стерилизаторе при 1210С в течение 15

минут.

Значение рН доводят таким образом, чтобы после стерилизации оно со- ставляло 7,1±0,2. Кипятят в течение одной минуты при постоянном встряхивании, затем стерилизуют в паровом стерилизаторе при 1210С в течение 15 минут.

Питательный бульон I (бульон на основе тетратионата, желчи и брилли- антового зеленого)

Значение рН доводят таким образом, чтобы после нагрева оно составляло 7,0±0,2. Нагревают только до кипения. Повторное нагревание не допускается

Агаризованная среда J (агар на основе дезоксихолата и цитрата)

Значение рН доводят таким образом, чтобы после нагрева оно составляло 7,3±0,2. Осторожно нагревают до кипения и кипятят 1 минуту, охлаждают до 500С

и разливают по чашкам Петри. Не автоклавируют.

Агаризованная среда К (агар на основе ксилозы, лизина, дезоксихолата)

Значение рН доводят таким образом, чтобы после нагрева оно составляло

7,4±0,2. Нагревают только до кипения, охлаждают до 500С и разливают по чашкам Петри. Не автоклавируют.

Агаризованная среда L (агар на основе бриллиантового зеленого, фено- лового красного, лактозы и сахарозы)

Нагревают до кипения и кипятят 1 минуту. Значение рН доводят таким об- разом, чтобы после стерилизации оно составляло 6,9±0,2. Непосредственно пе- ред использованием стерилизуют в паровом стерилизаторе при 1210С в течение

15 минут, охлаждают до 500С и разливают по чашкам Петри.

Агаризованная среда М (тройной агар на основе сахара и железа)

Нагревают до кипения и кипятят 1 минуту, встряхивая. Значение рН доводят

таким образом, чтобы после стерилизации оно составляло 7,4±0,2. Разливают по пробиркам на третью часть их высоты, стерилизуют в паровом стерилизаторе при

1210С в течение 15 минут и оставляют до охлаждения в положении, обеспечи- вающем получение образца в форме столбика и скошенной поверхности.

Нагревают до кипения и кипятят 1 минуту, встряхивая. Значение рН доводят таким образом, чтобы после стерилизации оно составляло 7,2±0,2. Стерилизуют в паровом стерилизаторе при 1210С в течение 15 минут.

Нагревают до кипения и кипятят 1 минуту, встряхивая. Значение рН доводят таким образом, чтобы после стерилизации оно составляло 6,8±0,2. Стерилизуют в

паровом стерилизаторе при 1210С в течение 15 минут, охлаждают до 45-500С и

добавляют 10 мл стерильного раствора теллурита калия с концентрацией 10 г/л и 50 мл эмульсии яичного желтка.

Питательная среда Р (обогащенная среда для клостридий)

Агар замачивают, растворяют путем нагревания до кипения при постоянном перемешивании. При необходимости, значение рН доводят таким образом, чтобы после стерилизации оно составляло около 6,8. Стерилизуют в паровом стерили- заторе при 1210С в течение 15 минут.

Питательная среда Q (колумбийский агар)

Агар замачивают, растворяют путем нагревания до кипения при постоянном

перемешивании. При необходимости, значение рН доводят таким образом, чтобы после стерилизации оно составляло 7,3±0,2. Стерилизуют в паровом стерилиза-

торе при 1210С в течение 15 минут. Охлаждают до 45-500С, добавляют, при необ- ходимости, гентамицина сульфат в количестве, соответствующем 20 мг основания

гентамицина, и разливают по чашкам Петри.

Питательная среда R (среда на основе лактозы и сульфита)

Растворяют, доводят до рН 7,1±0,1 и разливают по 8 мл в пробирки разме-

ром 16 мм х 160 мм, содержащие маленькие трубки Дюрама. Стерилизуют в паро-

вом стерилизаторе при 1210С в течение 15 минут и хранят при 40С.

Перед использованием питательную среду нагревают в течение 5 минут на водяной бане и охлаждают. В каждую пробирку добавляют по 0,5 мл раствора на- трия метабисульфита R концентрацией 12 г/л и 0,5 мл раствора железа(III)- аммония цитрата концентрацией 10 г/л. Оба раствора должны быть свежеприго- товленными и профильтрованы через мембраны (размер пор 0,45 мкм).

Значение рН доводят таким образом, чтобы после стерилизации оно со- ставляло 7,2±0,2. Стерилизуют в паровом стерилизаторе при 1210С в течение 15

минут.

# Фосфатный буферный раствор с натрия хлоридом и пептоном (1/15

моль)

Компоненты растворяют в очищенной воде при нагревании, фильтруют че-

рез бумажный фильтр.

Стерилизуют в паровом стерилизаторе при температуре 1210С в течение 15 минут.

Все компоненты растворяют в мясной воде при нагревании, вносят глюкозу,

значение рН доводят таким образом, чтобы после стерилизации оно составляло 7,3 ± 0,2. Кипятят 1 минуту, прибавляют агар, нагревают до полного его расплав-

ления, фильтруют через ватно-марлевый фильтр.

Стерилизуют в паровом стерилизаторе при температуре 121 0С в течение

15 минут.

К мясной воде добавляют пептон и натрия хлорид, растворяют при нагре- вании, вносят глюкозу, значение рН доводят таким образом, чтобы после стери- лизации оно составляло 7,3 ± 0,2. Кипятят 1 мин. Фильтруют через бумажный фильтр. Стерилизуют в паровом стерилизаторе при температуре 121 0С в течение

15 минут.

Все компоненты растворяют в воде при нагревании, значение рН доводят

таким образом, чтобы после стерилизации оно составляло 5,6 ± 0,2. Прибавляют агар, нагревают до полного его расплавления, фильтруют через ватно-марлевый

фильтр. Для подавления роста бактерий после стерилизации прибавляют 100 мг бензилпенициллина и 100 мг тетрациклина (либо перед стерилизацией – 50 мг

левомицетина) на 100 мл среды.

Стерилизуют в паровом стерилизаторе при температуре 121 0С в течение 15 минут.

Среда № 3 – для обогащении для бактерий семейства Enterobacteriaceae

Пептон и соли растворяют в мясной воде при нагревании, вносят глюкозу, прибавляют 8 мл 1 % раствора фенолового красного и 3 мл 0,5 % раствора мала- хитового зеленого, значение рН доводят таким образом, чтобы после стерилиза-

ции оно составляло 7,3 ± 0,2. Кипятят 1 минуту, фильтруют через бумажный фильтр.

Стерилизуют в паровом стерилизаторе при температуре 1210С в течение 15 минут.

Среда № 4 (агар Эндо) – для выделения бактерий семейства Enterobacteriaceae.

Ингредиенты размешивают в воде, значение рН доводят таким образом, чтобы после стерилизации оно составляло 7,4 ± 0,2. Нагревают до полного рас- плавления агара и кипятят 2-3 мин. Фильтруют через ватно-марлевый фильтр, снова нагревают до момента закипания. Охлаждают до температуры от 450С до 500С и разливают в чашки Петри.

Среда № 5 (висмутсульфит агар) – для выделения бактерий семейства Enterobacteriaceae

Ингредиенты размешивают в воде, значение рН доводят таким образом,

чтобы после стерилизации оно составляло 7,6 ± 0,2. Нагревают до полного рас- плавления агара и кипятят 3-5 минут. Охлаждают до температуры от 450С до 500С

и разливают в чашки Петри.

Пептон и натрия хлорид растворяют в мясной воде при нагревании, вносят глюкозу, прибавляют 8 мл 1 % раствора фенолового красного, значение рН дово-

дят таким образом, чтобы после стерилизации оно составляло 7,2 ± 0,2. Кипятят 1 минуту, фильтруют через бумажный фильтр и разливают в пробирки с поплавками по 4 - 5 мл. Стерилизуют в паровом стерилизаторе при температуре 121°С в тече- ние 15 минут. По окончании стерилизации быстро охлаждают.

Среда № 7 – для определения восстановления нитратов в нитриты:

Все компоненты растворяют в воде при нагревании, значение рН доводят таким образом, чтобы после стерилизации оно составляло 7,2 ± 0,2. Кипятят 1 ми-

нуту, фильтруют через бумажный фильтр, разливают в пробирки по 4 - 5 мл. Сте- рилизуют в паровом стерилизаторе при температуре 121°С в течение 15 минут.

Среда № 8 - среда обогащения для Pseudomonas aeruginosa и Staphylococcus aureus

Пептон и соли растворяют в воде при нагревании, вносят глюкозу, значение

рН доводят таким образом, чтобы после стерилизации оно составляло 7,3 ± 0,2. Кипятят 1 минуту, фильтруют через бумажный фильтр.

Стерилизуют в паровом стерилизаторе при температуре 121°С в течение 15 минут.

Среда № 9 – для выявления пигмента пиоцианина

Пептон и соли растворяют в воде. Затем вносят глицерин, растворяют при нагревании, значение рН доводят таким образом, чтобы после стерилизации оно

составляло 7,2 ± 0,2. Кипятят 1 минуту, прибавляют агар, нагревают до полного его расплавления, фильтруют через ватно-марлевый фильтр.

Стерилизуют в паровом стерилизаторе при температуре 121°С в течение 15 минут.

Среда № 10 – для идентификации Staphylococcus aureus