2006_-Byelorussian_Pharmacopoeia_Volume_1

(*) – другой компонент – вода

Величина рКА кислот в разных

растворителях (рКА = -lg KA

Растворитель

Величины рКBH+ оснований в разных

2.6. БИОЛОГИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ

2.6.1. СТЕРИЛЬНОСТЬ

Испытание применяется для субстанций, лекарственных средств или изделий, которые, в соответствии с Фармакопеей, должны быть стерильны.

Однако, удовлетворительный результат показывает лишь то, что в условиях испытания в тестируемом образце не обнаружено микроорганизмов. Руково-

дство по использованию испытания на стерильность приводится в конце раз- дела.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ ПРОТИВ МИКРОБНОЙ КОНТАМИНАЦИИ

Испытание на стерильность выполняют в асептических условиях. Для дос-

тижения таких условий обстановка, в которой выполняется испытание, должна быть адаптирована к способу его проведения. Меры предосторожности, прини- маемые против контаминации, не должны влиять ни на один из микроорганизмов,

обнаруживаемых в ходе испытания. Рабочие условия, в которых выполняется ис-

пытание, регулярно контролируются путем отбора проб воздуха и поверхностей

рабочей зоны, а также проведением соответствующих контрольных испытаний.

ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ И ТЕМПЕРАТУРЫ ИНКУБАЦИИ

Среды для проведения испытаний могут быть приготовлены в соответ- ствии с приведенными ниже указаниями; также могут использоваться эквива- лентные коммерчески доступные среды, при условии, что они выдерживают

испытания на питательные свойства.

Показано, что следующие питательные среды являются подходящими для испытания на стерильность. Жидкая тиогликолевая среда предназначена в пер-

вую очередь для культивирования анаэробных бактерий, но также обнаруживает и

аэробные бактерии. Среда на основе гидролизатов соевых бобов и казеина # и среда Сабуро подходит для культивирования как грибов, так и аэробных бактерий.

Могут быть использованы также и другие среды, при условии их соответст- вия требованиям испытаний на пригодность.

Жидкая тиогликолевая среда.

рН среды после стерилизации 7,1±0,2

Смешивают L-цистин, агар, натрия хлорид, глюкозу, водорастворимый дрожжевой экстракт и панкреатический гидролизат казеина с 1000 мл воды и на-

гревают до получения раствора. Натрия тиогликолят или тиогликолевую кислоту растворяют в полученной смеси и, при необходимости, добавляют 1 М раствор гидроксида натрия так, чтобы после стерилизации значение рН раствора состав- ляло 7,1±0,2. Если необходима фильтрация, раствор снова нагревают, не доводя до кипения, и фильтруют в горячем виде через увлажненную фильтровальную

бумагу. Добавляют раствор резазурина натриевой соли, перемешивают и поме- щают среду в подходящие сосуды, которые обеспечивают такое отношение по-

верхности к глубине среды, чтобы изменению окраски, указывающему на погло- щение кислорода в конце периода инкубирования, был подвержен только верхний

слой, составляющий не более трети от общего объема среды. Стерилизуют с ис- пользованием процесса с подтвержденной эффективностью. Среду хранят при

температуре 2–250С в стерильном герметичном контейнере. Если верхний слой, составляющий не более трети от общего объема среды, приобретает розовую ок- раску, среду можно однократно регенерировать путем нагрева контейнеров на во-

дяной бане или в струе пара до исчезновения розовой окраски с последующим

быстрым охлаждением; при этом должны быть приняты меры предосторожности против попадания в контейнер нестерильного воздуха. Среду не используют по истечении валидированных сроков хранения.

Жидкую тиогликолевую среду инкубируют при температуре 30-350С.

Среда на основе гидролизатов соевых бобов и казеина

рН среды после стерилизации 7,3±0,2

Твердые компоненты растворяют в воде, слегка нагревая для получения раствора. Раствор охлаждают до комнатной температуры. При необходимости добавляют 1 М раствор гидроксида натрия так, чтобы после стерилизации значе-

ние рН раствора составляло 7,3±0,2. При необходимости устранения мутности раствор фильтруют, разливают по подходящим сосудам и стерилизуют с исполь-

зованием процесса с подтвержденной эффективностью. Если среда не подлежит немедленному использованию, ее хранят при температуре 2–250С в стерильном

герметичном контейнере. Среду не используют по истечении валидированных сроков хранения.

Среду на основе гидролизатов соевых бобов и казеина инкубируют при температуре 20-250С.

рН после стерилизации 5,6 ± 0,2

Среду Сабуро инкубируют при температуре 20-250С.

Используемая среда должна выдерживать следующие испытания, прово- димые для каждой партии до или одновременно с испытанием тестируемой про-

дукции.

Стерильность. Порции среды инкубируют в течение 14 дней. Роста микро- организмов наблюдаться не должно.

Питательные свойства в отношении аэробов, анаэробов и грибов.

Проверке подвергают каждую партию готовой среды, и каждую партию среды, приготовленной из обезвоженных составов или из ингредиентов. Подходящие

штаммы микроорганизмов приведены в Таблице 2.6.1.-1.

Порции жидкой тиогликолевой среды засевают небольшим количеством (не

более 100 колониеобразующих единиц) следующих микроорганизмов: Clostridium sporogenes, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus. Для каждого из

штаммов используют отдельную порцию среды. Порции среды на основе гидро- лизатов соевых бобов и казеина (# или среды Сабуро) засевают небольшим коли-

чеством (не более 100 колониеобразующих единиц) следующих микроорганизмов:

Aspergillus niger, Bacillus subtilis, Candida albicans. Для каждого из штаммов ис-

пользуют отдельную порцию среды. Инкубируют в течение не более 3 дней в слу-

чае бактерий и не более 5 дней в случае грибов.

При получении рабочей культуры, используемой при проведении испыта-

ния, число пересевов, произведенных от исходного штамма, не должно превы- шать пяти.

Среды являются пригодными при условии наличия четкого визуально на-

блюдаемого роста микроорганизмов.

Таблица 2.6.1.-1

Штаммы тест-микроорганизмов, пригодные для испытаний питательных сред

ПРОВЕРКА ПРИГОДНОСТИ МЕТОДИКИ ИСПЫТАНИЯ

Проверку методики испытания выполняют в соответствии с нижеприведен-

ным описанием теста на стерильность испытуемого продукта с использованием в

точности аналогичного метода со следующими модификациями.

Мембранная фильтрация. После переноса содержимого испытуемого кон- тейнера или контейнеров на мембрану заключительную порцию стерильного рас- творителя, используемого для промывки фильтра, инокулируют небольшим коли-

чеством жизнеспособных микроорганизмов (не более 100 колониеобразующих

единиц).

Прямая инокуляция. После внесения в питательную среду содержимого

испытуемого контейнера или контейнеров ту же среду инокулируют небольшим количеством жизнеспособных микроорганизмов (не более 100 колониеобразую-

щих единиц).

Вобоих случаях используют штаммы микроорганизмов, приведенные выше,

вописании испытания питательных свойств в отношении аэробов, анаэробов и грибов. За положительный контроль принимают результаты испытания питатель-

ных свойств используемых сред. Все контейнеры, содержащие среду, инкубируют не более 5 дней.

Если после периода инкубации ясно наблюдается рост микроорганизмов, визуально сравнимый с ростом в контрольном сосуде, не содержащим испытуемо-

го продукта, делают вывод, что либо продукт в условиях испытания не обладает антимикробной активностью, либо такая активность была в достаточной степени

исключена. В таком случае испытание на стерильность может проводиться без дальнейших модификаций.

Если после периода инкубации не наблюдается роста микроорганизмов, ви-

зуально сравнимого с ростом в контрольном сосуде, не содержащим испытуемого

продукта, делают вывод, что продукт обладает антимикробной активностью, кото-

рая в условиях испытания не была в достаточной степени исключена. Условия подвергают модификациям с целью исключения антимикробной активности и по-

вторяют испытание на пригодность.

Это испытание следует проводить в следующих случаях: а) когда проводится испытание на стерильность новой продукции,

б) при внесении любых изменений в экспериментальные условия испытания.

Проверка пригодности может выполняться одновременно с контролем сте- рильности испытуемой продукции.

# Частные фармакопейные статьи должны содержать сведения о наличии

антимикробного действия продукта и рекомендации по его устранению.

ИСПЫТАНИЕ НА СТЕРИЛЬНОСТЬ ТЕСТИРУЕМОГО ПРОДУКТА

Испытание может быть выполнено с использованием метода мембранной

фильтрации или путем прямой инокуляции питательной среды испытуемым про-

дуктом. Должны проводиться соответствующие отрицательные контрольные опы- ты. В тех случаях, когда позволяет природа продукта (фильтруемые водные пре- параты, спиртовые или масляные препараты, а также препараты, смешиваемые

или растворимые в водных или масляных растворителях, не обладающих анти- микробным эффектом в условиях испытания), следует предпочитать метод мем-

бранной фильтрации.

Мембранная фильтрация. Используют мембранные фильтры с номиналь- ным размером пор, не превышающим 0,45 мкм, с установленной способностью к удерживанию бактерий. Например, фильтры на основе нитрата целлюлозы ис- пользуют для водных, масляных и разбавленных спиртовых растворов, а фильтры на основе ацетата целлюлозы – в частности, для растворов с высоким содержа- нием спирта. Для некоторых видов продукции, например, для антибиотиков, могут потребоваться специально подготовленные фильтры.