5. Оптимизация условий анализа таблеток сложного состава аналгезирующего и спазмолитического действия

Цель исследования - разработка универсальной методики анализа таблеток "Спазмовералгин нео" сложного состава, содержащих указанные выше ЛВ, которую можно было бы использовать для идентификации, количественного определения, оценки однородности дозирования и высвобождения действующих веществ.

В процессе работы исследования влияние различных зна­чений рН и компонентного состава подвижной фазы на хроматографичсские характеристики определяемых Л В.

Исследования проводили на жидкостном хроматографе LC-10A фирмы "Шимадзу" (Япония). В качестве подвиж­ной фазы была применена смесь ацетонитрила с 0,05 М фосфатным буферным раствором в соотношении 20:80. Детектирование проводили с помощью спектрофотометрического детектора при длине волны 230 им. Скорость подвижной фазы 1 мл/мин. Объем вводимой пробы 20 мкт (дозирующая петля). Обработку результатов определения проводили на интеграторе «SP 4100.2 производства фирмы "Спектрафизикс" (США). Результаты оценивали по време­нам удерживания и форме хроматографических пиков опре­деляемых веществ.

На предварительном этапе исследований с целью разра­ботки наиболее оптимальной методики, применимой для идентификации и количественной опенки, было проведено исследование влияния состава подвижной фазы на разделе­ние изучаемых JIB на хроматографических колонках разме­ром 250 х 4,6 мм. заполненных неподвижными фазами раз­личной полярности: "Ultrasphere ODS" (5 мкм). "Zorbax С8" (5 мкм), "Ultrasphere CN* (5 мкм).

На колонке "Ultrasphere ODS" в данных условиях пол­ного разделения хроматографических пиков изучаемых ЛВ добиться не удалось. Кроме того, произошло размывание пика папаверина гидрохлорида вследствие длительного вре­мени его удерживания. Добавление ион-парного реагента (гептансульфокислоты) позволило добиться полного разде­ления всех компонентов изучаемой смеси, однако увеличи­лось время выхода пика папаверина гидрохлорида до 50 мин.

С целью уменьшения времени анализа была исследова­на возможность применения неподвижной фазы "Zorbax С8" (5 мкм). Полученные результаты показали, что в данных условиях не происходит удовлетворительного разделения компонентов.

Наилучшее разделение почти всех Л В было достигнуто при использовании аналитической колонки с сорбентом "Ultrasphere CN" (5 мкм). Однако для разработки методики, пригодной для оценки подлинности и количественного опре­деления изучаемых Л В, требовалось провести дальнейшую оптимизацию условий их хроматографического разделения с учетом влияния значения рН подвижной фазы и концентра­ции в ней органического компонента.

Изучали влияние значения рН подвижной фазы (в пределах от 2,5 до 6,0) на хроматографичсское поведение изучаемых ЛB (рис. I, 2). Для кодеина фосфата, атропина сульфата и в меньшей степени для фенобарбитала наблюда­ется закономерность увеличения фактора емкости при воз­растании значения рН подвижной фазы. Эффективность колонки для всех исследуемых Л В. кроме папаверина гидро­хлорида. в вышеописанных условиях увеличивается при возрастании значения рН.

Экспериментально установлено, что оптимальная вели­чина рН подвижной фазы находится в пределах от 3,5 до 4.5. На основании этого для дальнейших исследований была ис­пользована подвижная фаза со значением рН 4,0.

В описанных выше условиях проводился анализ мо­дельных смесей исследуемых JIB и полупромышленных об­разцов лекарственной формы с целью дальнейшей отработ­ки методики идентификации и количественного определе­ния. Изучаемые ЛВ в модельных смесях обнаруживаюсь на хроматограмме в следующем порядке: парацетамол, кофе­ин, бромизовал, фенобарбитал, кодеина фосфат, атропина сульфат, папаверина гидрохлорид. Однако при выборе ана­литических концентраций JIB (в соответствии с их содержа­нием в лекарственной форме) и определении пределов их обнаружения выяснилось, что предел обнаружения эфед­рина гидрохлорида составляет 1 мкг/мл, атропина сульфата — 0.6 мкг/мл. Концентрации этих ЛВ в растворе для коли­чественного определения составляют 1,0 и 0,05 мкг/мл соответственно. Поэтому было предложено определять эти JIB альтернативными методами.

Оценку количественного содержания исследуемых ве­ществ проводили по методу внешнего стандарта как наибо­лее оптимальному для хроматографического анализа смесей

При этом наблюдается линейная зависимость между площадью хроматографического пика и концентрацией определяемого ЛВ в анализируемом рас­творе в интервале определяемых концентраций.

Для опенки воспроизводимости и точности разработан­ной методики проведена серия анализов модельных образцов таблеток. Метрологические характеристики для изучае­мых соединении представлены в таблице.

Приведенные в таблице данные свидетельствуют о том, что предлагаемая методика с применением ВЭЖХ обладает достаточной точностью и воспроизводимостью и может быть использована для количественного определе­ния шести ЛВ в изучаемой таблетированной лекарствен­ной форме.

В соответствии с требованиями ГФ XI таблетки, со­держащие в своем составе ЛВ в количестве 0.05 г и менее, должны тестироваться на однородность дозиро­вания. Разработанная методика ВЭЖХ была использова­на для определения однородности дозирования четырех компонентов: кофеина, фенобарбитала, кодеина фосфа­та и папаверина гидрохлорида. Анализ показал, что по этому показателю таблетки соответствуют требованиям ГФ XI.

Выводы: Подобранные хроматографические усло­вия использовали для разработки методики теста "Растворе­ние" и исследования динамики высвобождения Л В из табле­ток. Полученные кривые высвобождения (рис. 5) свидетель­ствуют о том, что наибольшая скорость высвобождения на­блюдается для кофеина и парацетамола (70% за 15 мин). Од­нако и остальные ЛВ в течение 20 мин высвобождаются на 70% и более.

Список использованной литературы

1. М.А. Казьмин, А.В. Михалев, А.П. Арзамасцев «Определение компонентов препарата "БИЦИЛЛИН-3" методом ВЭЖХ» //Фармация - №5 – 2002 – с. 5-6.

2. Т.Х. Вергейчик, Н.С. Онегова «ВЭЖХ в анализе препаратов, содержащих пропифеназон» // Фармация - №6 – 2002 – с. 13-16.

3. Е.В. Яковлева, З.П. Костенникова, Л.А. Баратова, Г.С. Левандовский Изучение компонентного состава аминокислот в гомеопатических настойках арники горной //Фармация - №5 – 2002 – с. 11-13.

4. Раменская Г.В., Агафонов А.А., Копылова М.М., Галиуллина Т.Н. Сравнительный анализ растворимых шипучих таблеток ацетилсалициловой кислоты «Таспир» и «Upsarin upsa» // Фармация – 2002.- № 6. - С.30-31.

5. Ларионова, С.Г. Оптимизация условий анализа таблеток сложного состава аналгезирующего и спазмолитического действия/ С.Г.Ларионова, Н.Н. Дементьева, Е.Б. Нечаева, П.В. Назаренко, Г.А. Нестерова //Фармация - 2002.-№1.-С.16-19.