4.3. Практические задания, которые выполняются на занятии:
Провести учет развернутой реакции агглютинации, поставленной с целью серологической идентификации культуры бактерий.
Поставить реакцию Видаля для серологической диагностики брюшного тифа.
Осуществить учет результатов РНГА, поставленной с целью серодиагностики брюшного тифа, сделать вывод
Провести учет результатов реакции иммунного гемолиза, сделать вывод.
Изучить образцы диагностикумов.
5. Содержание темы:
На практическом занятии студенты знакомятся со сложными серологическими реакциями, рассматривают особенности постановки и компоненты реакции агглютинации и методику постановки реакции непрямой гемаглютинациї (РНГА) с целью серологической диагностики инфекционных заболеваний. Студенты проводят учет реакции агглютинации, поставленной с целью идентификации культуры бактерий; ставят реакцию Видаля для диагностики брюшного тифа; осуществляют учет РНГА, поставленной с целью серодиагностики брюшного тифа; ставят реакцию иммунного гемолиза; изучают образцы диагностикумов. Выполненные задания студенты записывают в протокол и подписывают его у преподавателя.
Рекомендации для оформления протокола.
5.1. Учет поставленной на предыдущем занятии реакции агглютинации с целью серологической идентификации культуры бактерий.
Студенты проводят окончательный учет поставленной на предыдущем занятии реакции агглютинации с целью идентификации культуры бактерий. Степень позитивной реакции агглютинации обозначается плюсами:
++++ - полная агглютинация, жидкость прозрачная, а на дне значительное количество белого осадка;
+++ - жидкость не совсем прозрачная, осадок меньше;
++ - жидкость непрозрачная, осадок еще меньше;
+ - жидкость мутная, очень незначительный осадок;
- - жидкость равномерно мутная, как в контроле антигена; осадок отсутствует. Результат в этом случае считают негативным.
Соответствие между видом микроба и диагностической агглютинирующей сывороткой считается достоверным при условии четко выраженной реакции агглютинации в пробирках с разведением сыворотки в пределах титра, но не менее 2/3 ее титра при отсутствии осадка в контролях сыворотки и культуры.
5.2. Постановка реакции агглютинации с целью выявления антител в сыворотке больного с подозрением на брюшной тиф и паратиф а и в.
Для проведения реакции берут у больного кровь, получают из нее сыворотку и разводят изотоническим раствором натрия хлорида от 1:50 до 1:800 по схеме. Как антиген в этой реакции используют диагностикумы - суспензии из известных убитых микроорганизмов - брюшного тифа и паратифа А и В.
СХЕМА ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ АГГЛЮТИНАЦИИ С ЦЕЛЬЮ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ БОЛЬНОГО
|
№ пробирки Ингредиенты (в мл) |
Опытные |
Контрольные | |||||
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 | |
|
Физраствор |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
--- |
|
Сыворотка крови больного в разведении 1:25 (0,1 мл с-ки + 2,4 мл физ.раствора) |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
1,0 |
В дез. р-р.
--- |
1,0 |
|
Диагностикум |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
0,1 |
--- |
|
Полученные разведения сыворотки |
1:50 |
1:100 |
1:200 |
1:400 |
1:800 |
КД |
КС |
Штатив с пробирками помещают в термостат при 370С. Предварительный учет реакции проводят через 2 часа, а окончательный - через 18-20 часов.