38

ГЛАВА 2. Материалы и методы

2.1. Экспериментальные животные

Исследование выполнено на 354 крысах-самцах линии Wistar, возраст – 7- 8 месяцев, масса – 330-360 г. (ФГУП «Питомник лабораторных животных «РАППОЛОВО», д. Рапполово, Всеволожский р-н, Ленинградская обл., Россия). Животные содержались в полипропиленовых клетках (545х395х200 мм, Тип: Т/4В, ООО «МЭСТ», г. Москва) на подстиле из стружек мягких пород дерева, по 8-10 особей со свободным доступом к воде и гранулированному корму (ГОСТ Р 51849-2001, ООО «Лабораторкорм», Москва, Россия) в

стандартных условиях вивария с 12ч/12ч свето/темновым циклом, температурой воздуха 20±2°С и влажностью 40-60%. Экспериментальные группы формировались по истечению карантинного периода (2 недели) с использованием случайного распределения по группам. Исследовательские манипуляции выполняли в один и тот же период суток для сведения к минимуму влияния суточных биоритмов на результаты.

Эксперименты проводились в соответствии с Приказом МЗ и СР РФ от 23.08.2010 № 708н «Об утверждении правил лабораторной практики», с ГОСТ Р 53434-2009 «Принципы надлежащей лабораторной практики», с ГОСТ Р

51000.4-2011 «Общие требования к аккредитации испытательных лабораторий», с соблюдением Международных рекомендаций «Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях» (Страсбург, 1986) и были одобрены Региональным Независимым Этическим Комитетом (ГУ Волгоградский Медицинский Научный Центр) (регистрационный номер IRB 00005839 IORG

0004900 (OHRP)): протокол № 191-2014 от 25 февраля 2014. Хирургические процедуры и эвтаназия животных при выведении из эксперимента выполнялись с использованием хлоралгидрата в дозе 400 мг/кг (внутрибрюшинно).

39

2.2. Исследуемое соединение и препараты сравнения

Исследуемое соединение

Исследуемое соединение 5-хлор-2-(4-{[4-(3,3-диоксидо-1,3-бензоксатиол- 6-ил)-2-фторфенокси]метил}пиперидин-1-ил)пиримидин под лабораторным шифром ZВ-16 (дипиарон) (Рис. 3) было синтезировано в АО «ИИХР» (г.

Химки, РФ) и представляет собой высокоселективный агонист рецептора

GPR119 (EC50 M – 7.25E-09) [Chafeev M.A., 2015]. По результатам ряда проведенных исследований, соединение ZB-16 не проявляет мутагенной активности in vitro (штаммы Salmonella typhimurium ТА98, ТА100, ТА1535 и

ТА1537, в концентрациях от 0,00625 до 0,2 мг/мл) [Колобродова Н.А., 2015],

обладает низкой клеточной токсичностью (в диапазоне концентраций от 10-9 до

10-4М, линия клеток HepG2) и малой токсичностью по классификации И. В.

Саноцкого [Саноцкий И.В., 1970].

Препараты сравнения.

Для исследования терапевтического потенциала агонистов GPR119 при ишемии ГМ на фоне СД нам необходимо было выбрать наиболее приемлемые препараты сравнения в условиях, когда препараты с аналогичным механизмом действия еще не вышли на рынок.

Первым препаратом сравнения был взят метформин (400 мг/кг, per os)

[Ismail T.A., 2015], как золотой стандарт в лечении сахарного диабета 2 типа с высокой эффективностью.

Вторым препаратом сравнения был выбран препарат из группы ингибиторов ДПП-4. На наш взгляд, ингибиторы ДПП-4 (фермента,

ответственного за физиологическое расщепление инкретинов) – наиболее близкая по механизму действия группа препаратов. Ингибиторы ДПП-4

повышают плазменную концентрацию двух основных гормонов семейства инкретинов: ГПП-1 и ГИП, замедляя их разрушение. Тогда как агонисты

GPR119 помимо глюкозозависимой повышения секреции инсулина,

стимулирует секрецию эндогенных ГПП-1 и ГИП, повышая их плазменную