- •О книге
- •Предисловие
- •Введение - Л. Б. Богоявленская
- •Краткий очерк истории микробиологии - Л. Б. Богоявленская
- •Часть I. Общая микробиология
- •Глава 1. Микробиологическая лаборатория - Л. Б. Богоявленская
- •Правила поведения и работы в микробиологической лаборатории
- •Методы микробиологического исследования
- •Контрольные вопросы
- •Глава 2. Микроскоп и микроскопические методы исследования - М. Я. Корн
- •Фазово-контрастная микроскопия
- •Темнопольная микроскопия
- •Люминесцентная (флюоресцентная) микроскопия
- •Электронная микроскопия
- •Контрольные вопросы
- •Глава 3. Основы классификации и морфология микроорганизмов - О. Б. Орлеанская
- •Бактерии
- •Строение бактериальной клетки
- •Микоплазмы
- •Спирохеты
- •Риккетсии
- •Вирусы
- •Контрольные вопросы
- •Изучение морфологии микроорганизмов
- •Техника приготовления мазка
- •Высушивание мазка
- •Фиксация мазка
- •Окраска препаратов
- •Рецепты красителей
- •Простой метод окраски
- •Сложные методы окраски
- •Прижизненная окраска микроорганизмов
- •Изучение подвижности микроорганизмов
- •Контрольные вопросы
- •Задание
- •Глава 4. Физиология микроорганизмов
- •Химический состав бактерий
- •Питание бактерий
- •Ферменты и их роль в обмене веществ
- •Дыхание бактерий
- •Пигменты микроорганизмов
- •Светящиеся и ароматообразующие микроорганизмы
- •Рост и размножение бактерий
- •Контрольные вопросы
- •Глава 5. Влияние факторов окружающей среды на микроорганизмы - Н. А. Бельская
- •Физические факторы
- •Химические факторы
- •Биологические факторы
- •Контрольные вопросы
- •Стерилизация
- •Физические способы
- •Сухожаровая стерилизация
- •Контрольные вопросы
- •Задание
- •Стерилизация кипячением
- •Контрольные вопросы
- •Задание
- •Контрольные вопросы
- •Стерилизация ультрафиолетовым облучением
- •Контрольные вопросы
- •Механическая стерилизация при помощи бактериальных фильтров
- •Контрольные вопросы
- •Химические способы
- •Биологическая стерилизация
- •Контрольные вопросы
- •Дезинфекция
- •Контрольные вопросы
- •Задание
- •Глава 6. Распространение микроорганизмов в природе - Л. Б. Богоявленская
- •Микрофлора почвы
- •Микрофлора воды
- •Микрофлора воздуха
- •Микрофлора организма человека
- •Контрольные вопросы
- •Глава 7. Питательные среды и микробиологическое исследование - Г. И. Кац
- •Питательные среды
- •Требования, предъявляемые к средам
- •Классификация сред
- •Контрольные вопросы
- •Задание
- •Приготовление сред
- •Рецепты приготовления простых (основных) сред и изотонического раствора натрия хлорида
- •Рецепты приготовления сложных сред
- •Сухие среды
- •Контрольные вопросы
- •Задание
- •Методы посевов
- •Контрольные вопросы
- •Методы культивирования
- •Методы выделения чистых культур микроорганизмов
- •Изучение выделенных культур
- •Культуральные свойства
- •Морфологические свойства
- •Ферментативная активность
- •Сохранение культур
- •Контрольные вопросы
- •Задание
- •Глава 8. Фаги - Г. И. Кац
- •Свойства фагов
- •Контрольные вопросы
- •Методы изучения вирулентных фагов
- •Подготовка материала
- •Качественные методы
- •Количественные методы
- •Методы выделения фагов
- •Практическое применение фагов
- •Препараты фагов
- •Контрольные вопросы
- •Задание
- •Глава 9. Антибиотики. Химиопрофилактика и химиотерапия
- •Общая характеристика - Н. А. Бельская
- •Контрольные вопросы
- •Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам - Н. А. Бельская
- •Методы определения
- •Методика работы с оптическим стандартом мутности
- •Контрольные вопросы
- •Задание
- •Химиопрофилактика и химиотерапия
- •Глава 10. Генетика микроорганизмов - Ф. К. Черкес
- •Фенотипическая изменчивость (модификация)
- •Генотипическая (наследуемая) изменчивость
- •Плазмиды
- •Практическое значение изменчивости
- •Контрольные вопросы
- •Глава 11. Учение об инфекции - Ф. К. Черкес
- •Патогенность и вирулентность микроорганизмов
- •Роль макроорганизма в инфекционном процессе
- •Влияние окружающей среды на возникновение и развитие инфекционного процесса
- •Механизм передачи инфекции
- •Формы инфекционного процесса
- •Динамика развития инфекционного заболевания
- •Контрольные вопросы
- •Биологические методы исследования
- •Виды лабораторных животных
- •Содержание лабораторных животных
- •Отбор животных и подготовка их к опыту
- •Экспериментальное заражение животных
- •Контрольные вопросы
- •Задание
- •Способы заражения
- •Контрольные вопросы
- •Задание
- •Вскрытие и микробиологическое исследование погибших животных
- •Контрольные вопросы
- •Техника взятия крови у животных
- •Обработка и выделение составных частей крови
- •Контрольные вопросы
- •Задание
- •Глава 12. Учение об иммунитете. Реакции иммунитета. Иммунопрофилактика и иммунотерапия инфекционных болезней - Л. Б. Богоявленская, Г. И. Кац
- •Наследственный (видовой) иммунитет
- •Приобретенный иммунитет
- •Неспецифические факторы защиты организма
- •Клеточные факторы неспецифической защиты
- •Фагоцитоз
- •Клеточная реактивность
- •Контрольные вопросы
- •Гуморальные факторы неспецифической защиты
- •Контрольные вопросы
- •Специфические факторы защиты организма (иммунитет)
- •Антигены
- •Контрольные вопросы
- •Антитела
- •Контрольные вопросы
- •Клеточные механизмы иммунного ответа
- •Контрольные вопросы
- •Серологические реакции
- •Реакция агглютинации
- •Контрольные вопросы
- •Задание
- •Реакция гемагглютинации
- •Реакция торможения гемагглютинации
- •Реакция непрямой гемагглютинации
- •Контрольные вопросы
- •Задание
- •Реакция преципитации
- •Контрольные вопросы
- •Задание
- •Реакция лизиса (иммунный цитолиз)
- •Контрольные вопросы
- •Задание
- •Реакция связывания комплемента
- •Подготовка ингредиентов
- •Проведение основного опыта
- •Контрольные вопросы
- •Задание
- •Peaкция иммунофлюоресценции
- •Опсонофагоцитарная реакция
- •Контрольные вопросы
- •Задание
- •Реакции иммунитета in vivo (кожаные пробы)
- •Контрольные вопросы
- •Иммунопрофилактика и иммунотерапия инфекционных болезней
- •Контрольные вопросы
- •Глава 13. Аллергия - Л. Б. Богоявленская
- •Реакции гиперчувствительности немедленного типа
- •Реакции гиперчувствительности замедленного типа
- •Контрольные вопросы
- •Часть II. Частная микробиология
- •Патогенные кокки - Ф. К. Черкес
- •Глава 14. Стафилококки
- •Контрольные вопросы
- •Микробиологическое исследование
- •Контрольные вопросы
- •Задание
- •Глава 15. Стрептококки
- •Streptococcus pyogenes (гемолитический)
- •Микробиологическое исследование
- •Streptococcus pneumoniae (пневмококк)
- •Контрольные вопросы
- •Микробиологическое исследование
- •Контрольные вопросы
- •Задание
- •Глава 16. Менингококки
- •Контрольные вопросы
- •Микробиологическое исследование
- •Глава 17. Гонококки
- •Контрольные вопросы
- •Микробиологическое исследование
- •Семейство кишечных бактерий
- •Глава 18. Эшерихии - Л. Б. Богоявленская, Ф. К. Черкес
- •Контрольные вопросы
- •Микробиологическое исследование
- •Глава 19. Сальмонеллы - Л. Б. Богоявленская, Ф. К. Черкес
- •Брюшной тиф, паратифы А и В
- •Пищевые токсикоинфекции
- •Внутрибольничная сальмонеллезная инфекция
- •Контрольные вопросы
- •Микробиологическое исследование
- •Глава 20. Шигеллы - Ф. К. Черкес
- •Контрольные вопросы
- •Микробиологическое исследование
- •Условно-патогенные бактерии - Л. Б. Богоявленская
- •Глава 21. Клебсиеллы
- •Микробиологическое исследование
- •Контрольные вопросы
- •Глава 22. Протей
- •Микробиологическое исследование
- •Контрольные вопросы
- •Глава 23. Иерсинии энтероколитика
- •Микробиологическое исследование
- •Контрольные вопросы
- •Микробиологическое исследование
- •Контрольные вопросы
- •Возбудители особо опасных инфекций - Ф. К. Черкес
- •Глава 25. Возбудители холеры
- •Контрольные вопросы
- •Микробиологическое исследование
- •Глава 26. Возбудитель чумы
- •Контрольные вопросы
- •Микробиологическое исследование
- •Контрольные вопросы
- •Глава 27. Возбудитель псевдотуберкулеза
- •Микробиологическое исследование
- •Глава 28. Возбудитель туляремии
- •Контрольные вопросы
- •Микробиологическое исследование
- •Глава 29. Возбудители бруцеллеза
- •Контрольные вопросы
- •Микробиологическое исследование
- •Глава 30. Возбудитель сибирской язвы
- •Контрольные вопросы
- •Микробиологическое исследование
- •Контрольные вопросы
- •Задание
- •Глава 31. Возбудители коклюша и паракоклюша
- •Контрольные вопросы
- •Микробиологическое исследование
- •Контрольные вопросы
- •Микробиологическое исследование
- •Глава 33. Возбудители туберкулеза
- •Контрольные вопросы
- •Микробиологическое исследование
- •Патогенные анаэробы - Ф. К. Черкес
- •Контрольные вопросы
- •Глава 34. Возбудитель столбняка
- •Микробиологическое исследование
- •Контрольные вопросы
- •Глава 35. Возбудители газовой гангрены
- •Clostridium perfringens
- •Clostridium novyi
- •Clostridium septicum
- •Clostridium histolyticum
- •Clostridium sordellii
- •Микробиологическое исследование
- •Контрольные вопросы
- •Глава 36. Возбудитель ботулизма
- •Микробиологическое исследование
- •Контрольные вопросы
- •Патогенные спирохеты - Ф. К. Черкес
- •Глава 37. Возбудитель сифилиса
- •Контрольные вопросы
- •Микробиологическое исследование
- •Контрольные вопросы
- •Глава 38. Возбудители возвратного тифа
- •Эпидемический возвратный тиф
- •Контрольные вопросы
- •Эндемический возвратный тиф
- •Микробиологическое исследование
- •Контрольные вопросы
- •Задание
- •Глава 39. Спирохеты Венсана
- •Глава 40. Возбудители лептоспирозов
- •Контрольные вопросы
- •Микробиологическое исследование
- •Риккетсии - Ф. К. Черкес
- •Глава 41. Возбудители сыпного тифа
- •Сыпной тиф
- •Болезнь Брилла
- •Контрольные вопросы
- •Эндемический блошиный тиф
- •Контрольные вопросы
- •Микробиологическое исследование
- •Контрольные вопросы
- •Глава 42. Возбудитель Ку-лихорадки
- •Контрольные вопросы
- •Микробиологическое исследование
- •Контрольные вопросы
- •Вирусы
- •Вирусологическая диагностика
- •Контрольные вопросы
- •Глава 44. Возбудитель бешенства
- •Вирусологическая диагностика
- •Контрольные вопросы
- •Глава 45. Возбудители полиомиелита
- •Вирусы полиомиелита
- •Вирусологическая диагностика
- •Вирусы Коксаки
- •Вирусологическая диагностика
- •Вирусы ECHO
- •Вирусологическая диагностика
- •Контрольные вопросы
- •Вирусологическая диагностика
- •Контрольные вопросы
- •Вирус гепатита А
- •Вирус гепатита В
- •Вирусологическая диагностика
- •Контрольные вопросы
- •Онкогенные вирусы
- •Часть III. Санитарная микробиология
- •Санитарно-бактериологическое исследование воды - Ф. К. Черкес
- •Определение общего числа бактерий
- •Определение БГКП
- •Выявление свежего фекального загрязнения
- •Санитарно-бактериологическое исследование почвы - Н. А. Бельская
- •Контрольные вопросы
- •Задания
- •Санитарно-бактериологическое исследование воздуха - Ф. К. Черкес
- •Методы отбора проб воздуха
- •Контрольные вопросы
- •Задача
- •Задание
- •Санитарно-бактериологическое исследование молока и молочных продуктов Ф. К. Черкес, Н. А. Бельская
- •Определение общего числа бактерий
- •Определение БГКП
- •Санитарно-бактериологическое исследование крема и изделий из крема - Ф. К. Черкес
- •Определение титра кишечной палочки
- •Выявление коагулазоположительных стафилококков
- •Контрольные вопросы
- •Санитарно-бактериологическое исследование колбасных и мясных продуктов промышленного производства - Ф. К. Черкес
- •Определение количества микробов в 1 г продукта
- •Определение БГКП в 1 г продукта
- •Выявление сальмонелл
- •Определение протея
- •Санитарно-бактериологическое исследование баночных консервов - Ф. К. Черкес
- •Контрольные вопросы
- •Санитарно-бактериологическое исследование смывов - Ф. К. Черкес
- •Исследование на БГКП
- •Выявление S. aureus
- •Определение общего числа бактерий
- •Контрольные вопросы
- •Задания
- •Санитарно-бактериологическое исследование перевязочного и хирургического материала на стерильность - Ф. К. Черкес
- •Контрольные вопросы
- •Санитарно-бактериологическое исследование безалкогольных напитков - Ф. К. Черкес
- •Краткий словарь микробиологических терминов - Г. И. Кац
2.В сыворотке здоровых людей имеются антитела к некоторым микроорганизмам (так называемые "нормальные антитела"). Титр их невысок. Поэтому положительный результат реакции в разведении 1:100 и выше говорит о ее специфичности.
3.Групповая реакция с близкими по антигенному строению микробами. Например, сыворотка больного брюшным тифом может также агглютинировать бактерии паратифа А и Б. В отличие от специфической групповая реакция идет в более низких титрах. Адсорбированные сыворотки не дают групповой реакции.
4.Следует учесть, что специфические антитела после перенесеннойболезни
идаже после прививок могут сохраняться длительное время. Они называются "анамнестическими". Чтобы отличить их от "инфекционных" антител, образующихся в течение текущей болезни, реакцию ставят в динамике, т. е. исследуют сыворотку больного, взятую повторно через 5-7 дней. Повышение титра антител говорит о наличии болезнититр "анамнестических" антител не повышается, а может даже снизиться.
Контрольные вопросы
1.Что такое реакции иммунитета, каковы их основные свойства?
2.Какие компоненты участвуют в серологических реакциях? Почему реакции называют серологическими, из скольких фаз они состоят?
3.Что такое реакция агглютинации? Ее использование и методы проведения. Что такое диагностикум?
4.Каким антигеном пользуются при исследовании сыворотки больного? Какой сывороткой определяют вид неизвестного микроба?
5.Что такое О- и Н-агглютинация? В каких случаях образуется хлопьевидный осадок и когда мелкозернистый?
Задание
1.Поставьте развернутую реакцию агглютинации для определения титра антител в сыворотке больного и учтите ее результат.
2.Поставьте реакцию агглютинации на стекле для определения вида выделенного микроорганизма.
Реакция гемагглютинации
В лабораторной практике пользуются двумя различными по механизму действия реакциями гемагглютинации (РГА).
Первая РГА относится к серологическим. В этой реакции эритроциты агглютинируются при взаимодействии с соответствующими антителами (гемагглютининами). Реакцию широко используют для определения групп крови.
Вторая РГА не является серологической. В ней склеивание эритроцитов вызывают не антитела, а особые вещества, образуемые вирусами. Например, вирус гриппа агглютинирует эритроциты кур и морских свинок, вирус полиомиелита - эритроциты барана. Эта реакция позволяет судить о наличии того или иного вируса в исследуемом материале.
Постановка реакции. Реакцию ставят в пробирках или на специальных пластинах с лунками. Исследуемый на наличие вируса материал разводят изотоническим раствором от 1:10 до 1:1280; 0,5 мл каждого разведения смешивают с равным объемом 1-2% взвеси эритроцитов. В контроле 0,5 мл эритроцитов смешивают с 0,5 мл изотонического раствора. Пробирки ставят в термостат на 30 мин, а пластины оставляют при комнатной температуре на 45 мин.
Учет результатов. При положительном результате реакции на дне пробирки или лунки выпадает осадок эритроцитов с фестончатыми краями ("зонтик"), покрывающий все дно лунки. При отрицательном результате эритроциты образуют плотный осадок с ровными краями ("пуговку"). Такой же осадок должен быть в контроле. Интенсивность реакции выражают знаками "плюс". Титром вируса является максимальное разведение материала, в котором происходит агглютинация.
Реакция торможения гемагглютинации
Это серологическая реакция, в которой специфические противовирусные антитела, взаимодействуя с вирусом (антигеном), нейтрализуют его и лишают способности агглютинировать эритроциты, т. е. тормозят реакцию гемагглютинации. Высокая специфичность реакции торможения гемагглютинации (РТГА) позволяет с ее помощью определить вид и даже тип вирусов, обнаруженных при постановке РГА.
Постановка реакции. 0,25 мл противовирусной сыворотки в последовательных двукратных разведениях от 1:10 до 1:2560 смешивают с равным объемомматериала,содержащеговирус,разведенногов4 разаменьше титра, установленного в РГА. Смесь встряхивают и помещают в термостат на 30 мин, после чего добавляют по 0,5 мл 1-2% взвеси эритроцитов.
Реакцию сопровождают тремя контролями (табл. 17).
Рекомендовано к изучению разделом по микробиологии сайта https://meduniver.com/
Таблица 17. Контроли реакции торможения гемагглютинации
Учет результатов производят после повторной инкубации в термостате в течение 30 или 45 мин при комнатной температуре. При правильной постановке опыта в контроле сыворотки и эритроцитов должна образоваться "пуговка" - нет агглютинирующего эритроциты фактора; в контроле антигена образуется "зонтик" - вирус вызвал агглютинацию эритроцитов.
В опыте, если сыворотка гомологична изучаемому вирусу, образуется "пуговка" - сыворотка нейтрализовала вирус. Титр сыворотки - это ее максимальное разведение, в котором происходит задержка гемагглютинации.
Реакция непрямой гемагглютинации
Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА) основана на том, что эритроциты, если на их поверхности адсорбировать растворимый антиген, приобретают способность агглютинироваться при взаимодействии с антителами к адсорбированному антигену. Схема РНГА представлена на рис. 34. РНГА широко применяют при диагностике ряда инфекций.
Рис. 34. Схема реакции пассивной гемагглютинации (РПГА). А - получение эритроцитарного диагностикума: Б - РПГА: 1 - эритроцит: 2 - изучаемый антиген; 3 - эритроцитарный диагностикум; 4 - антитело к изучаемому антигену: 5 - агглютинат
Постановка реакции. Испытуемую сыворотку прогревают 30 мин при 56° С, разводят последовательно в соотношении 1:10 - 1:1280 и разливают по 0,25 мл в пробирки или лунки, куда затем добавляют по 2 капли эритроцитарного диагностикума (эритроциты с адсорбированным на них антигеном).
Контроли: взвесь эритроцитарного диагностикума с заведомо иммунной сывороткой; взвесь диагностикума с нормальной сывороткой; взвесь нормальных эритроцитов с испытуемой сывороткой. В первом контроле должна произойти агглютинация, во втором и третьем ее не должно быть.
При помощи РИГА можно определять неизвестный антиген, если на эритроциты адсорбировать заведомо известные антитела.
Реакцию гемагглютинации можно ставить в объеме 0,025 мл (микрометод), пользуясь микротитратором Такачи.
Контрольные вопросы
1.О чем свидетельствует положительный результат РГА между эритроцитами и исследуемым на наличие вируса материалом?
2.Произойдет ли агглютинация эритроцитов, если к ним добавить вирус и соответствующую ему сыворотку? Как называется реакция, выявляющая этот феномен?
Задание
Учтите и зарегистрируйте результат РИГА.
Рекомендовано к изучению разделом по микробиологии сайта https://meduniver.com/