2 курс / Микробиология 1 кафедра / Доп. материалы / Микробиология_расписанные_билеты_и_задачи_СГМУ

 ГЕПАТИТ А - острое инфекционное антропонозное заболевание o Механизм передачи – фекально-оральный

o Преимущественно поражается печень

o Клиническое проявление – гепатомегалия, интоксикация и желтуха (см. фото)

oРаспространен повсеместно, но особенно в местах с дефицитом воды, плохими системами канализации и водоснабжения и низким уровнем гигиены населения.

o Болеют преимущественно дети в возрасте от 4 до 15 лет.

o Вирус гепатита А (ВГА) относится к семейству Picornaviridae, роду Hepatovirus.

oСтроение вириона:

Диаметр вириона равен 27нм

Капсид икосаэдрического типа симметрии, не имеет наружной суперкапсидной оболочки.

Геном вируса представлен однонитевой молекулой плюс РНК.

o Антигены. В антигенном отношении вирус однороден.

o Резистентность. ВГА устойчив к низким значениям рH, низким температурам.

oЭпидемиология.

Антропоноз.

Источником инфекции - больные в инкубационном периоде.

Наиболее заразительны больные в последние 7 – 10 дней инкубационного периода и в течение 2 недель преджелтушного периода заболевания.

Основной механизм передачи– фекально-оральный.

oЭтиопатогенез.

Входные ворота – слизистые ротоглотки и тонкого кишечника, в эпителиоцитах которых происходит первичная репродукция.

Оттуда вирус проникает в мезентериальные лимфатические узлы, в кровь, вызывая кратковременную вирусемию. С кровотоком через портальную вену вирус заносится в печень, где активно размножается в гепатоцитах.

Поражение клеток печени при гепатите А обусловлено клеточными цитотоксическими иммунными реакциями.

Хронические формы и вирусоносительство при гепатите А не возникают.

oМикробиологическая диагностика.

Материалом для исследования служат сыворотка и испражнения.

Диагностика основана главным образом на определении в крови IgM с помощью ИФА, РИА и иммунной электронной

микроскопии.

oСпецифическая профилактика. Для активной специфической профилактики разработаны живые, убитые и рекомбинантные вакцины.

4. При БАК-исследовании мазка из зева больного с клиническим диагнозом – ангина выделена коринебактериум дифтериэ (дифтерийная палочка). Может ли быть поставлен ему диагноз – дифтерия?

Нет, так как нужно доказать токсигенность штамма (дифтерию вызывают только C. diphtheriae tox+).

Токсигенность доказывают в реакции преципитации: в чашку с гелем помещают полоску бумаги, пропитанную сывороткой. Перпендикулярно ей штрихами засевают культуру бактерий. Если это токсигенные штаммы, но в результате иммунодиффузии образуются "усы преципитации"

Билет 14

1.пцр, секвенирование генома, ДНКчипы

Метод ДНК-чипов

Одним из основных методов лабораторной диагностики инфекционных заболеваний является серологическое обследование пациентов с целью выявления антител к отдельным возбудителям.

При смешанных инфекциях, когда организм поражается сразу несколькими возбудителями, а также при дифференциации заболеваний, имеющих сходную клиническую картину, часто бывает необходимо выполнение иммунологических тест-систем - ИММУНОЧИПОВ.

Иммуночипы для многопрофильного анализа антител представляет собой плотную подложку, на поверхности которой дискретно нанесены в определенном порядке антигены различных возбудителей инфекционных заболеваний. Результаты после выполнения анализа на иммуночипах расшифровываются по наличию сигнала в определенных зонах нанесения антигенов.

ПЦР

Суть ПЦР заключается в избирательном копировании in vitro небольшого фрагмента гена в котором предположительно может быть локализована мутация с использованием в качестве матрицы геномной ДНК обследуемого Небольшие размеры копируемого или амплифицируемого фрагмента гена в сочетании с их огромным числом позволяют в дальнейшем использовать очень простые методы для анализа этого участка ДНК выявления его особенностей у обследуемого пациента

Цель: обнаружение в исследуемом материале (или в чистой культуре бактерий) нуклеотидных последовательностей, отвечающих либо за видовую принадлежность возбудителя, либо за продукцию основного фактора вирулентности.

Принцип метода основан на естественной репликации ДНК которая включает:

-денатурацию спирали ДНК,

-расхождение нитей

-комплементарный синтез новых нитей ДНК.

ПЦР обеспечивает амплификацию фрагментов генома и быстрое накопление определенной последовательности ДНК. В результате получают большое количество ДНК, которое достаточно для проведения анализа различными методами детекции.

Для реализации реакции используют набор праймеров-фрагментов ДНК, которые являются маркерами данного возбудителя при добавлении такого праймера к пробе исследуемого материала содержащую денатурированную одноцепочечную ДНК возбудителя происходит их соединение с комплементарным участком ДНК Образовавшиеся двунитевые фрагменты ДНК служат матрицей для синтеза новых нитей в следующем цикле амплификации и так повторяется много раз поэтому реакция носит цепной характер За 2-3- часа происходит 30-40 циклов амплификации что приводит к образованию большого количества соответствующих копий нуклеотидных последовательностей которое можно зарегистрировать

Компоненты реакции:

1.Праймеры-олигонуклеотиды которые состоят из 15-30 нуклеотидов комплементарных участкам на идентифицируемой матричной ДНК

2.Смесь дезоксинуклеотидтрифосфатов которые являются строительным материалом, используемым Tag -полимеразой для синтеза второй цепи ДНК

3.Tag -полимераза обладает ДНКполимеразной термостабильной активностью Оптимум ее действия при 720 С Она способна удлинять праймеры присоединяя их к 3’ концу

4.Буферный раствор катализатор фермента Tag -ДНК- полимеразы

5 Исследуемый образец - препарат который служит мишенью для последующей амплификации

Главными из этих методов являются электрофорез амплифицированной ДНК ее окрашивание разрезание специфическими ферментами

– рестриктазами и определение нуклеотидной последовательности этого фрагмента - секвенирование ПЦР лежит в основе ДНКдиагностики любых наследственных заболеваний

Данный подход широко используется и для анализа генетических факторов риска, предрасполагающих к развитию широко распространенных мультифакториальных заболеваний. В случае молекулярной диагностики инфекций амплифицируется фрагмент ДНК специфичный для определенного возбудителя, а затем с помощью электрофореза и окрашивания на ДНК тестируется наличие этого фрагмента, а значит и самого возбудителя в том биологическом образце, который был взят для анализа Использование ПЦР в судебной медицине основано на амплификации высоко изменчивых областей генома, позволяющих проводить идентификацию личности – метод геномной дактилоскопии.

Молекулярно-генетическое секвенирование

Эти методы позволяют анализировать только небольшую часть хромосомы микроорганизма, которая может варьировать у разных штаммов бактерий. Такая часть анализируемой ДНК должна быть информационно значимой для типирования различных штаммов определенного вида. Нуклеотидных последовательностей, удовлетворяющих всем требованиям, немного. В связи с этим широкое использование методов секвенирования для типирования патогенных бактерий будет возможно только после того, как для каждого вида возбудителей будут идентифицированы видоспецифические генетические локусы, на основании которых можно дифференцировать штаммы.

2. Всё про антигены

3.гепатиты В и С

Гепатит В ранее называли сывороточный гепатит.

oЕго возбудитель - вирус гепатита B, обозначаемый как HBV (Hepatitis B virus), относится к семейству Hepadnaviridae (гепаднавирусов), роду Orthohepadnavirus.

Строение вириона:

Это ДНК-содержащий вирус. НК вируса гепатита В представлена кольцевой двунитевой молекулой ДНК, причем одна нить разомкнута, дефектна

Диаметр 42-52 нм, а его нуклеокапсид - 27 нм

Тип симметрии нуклеокапсида – кубический

Имеет суперкапсидную оболочку, представленую липидами и полипептидами

oВирус гепатита В не размножается в культурах тканей, в куриных эмбрионах, в организме лабораторных животных. Он патогенен для человекообразных обезьян.

oАнтигены вируса гепатита В:

Поверхностный HBs-АГ суперкапсидной оболочки – основной антигенный маркер HBV. Он состоит из двух полипептидных субъединиц Первая ответственна за адсорбцию вируса на клетке и способна связываться с полиальбуминами сыворотки больного, что

приводит к появлению в оболочке вируса таких же белков, как у человека. Это обуславливает возникновение аутоиммунных конфликтов и переход в хронические формы инфекции.

Вторая фракция HBs-АГ является сильным иммуногеном и используется для создания генно-инженерных вакцин. HBs-АГ обнаруживается в крови больных и носителей.

Глубокий HBc-АГ связан с белками капсидной оболочки вируса и обычно в кровь не поступает.

HBe-АГ - особый антиген вируса, который отщепляется при прохождении через мембрану гепатоцитов. Его обнаружение в крови больного свидетельствует об активном размножении вируса. Ассоциирован с ДНК-полимеразой вируса

HBx-АГ мало изучен, но есть основание полагать, что он связан с онкогенным действием вируса гепатита В и развитием

первичной гепатоклеточной карциномы. o Источник инфекции - больной и вирусоноситель

oПути передачи: парентеральный, половой, вертикальный (внутриутробно от матери к ребенку), может также выделяться с биологическими жидкостями - слюной (при поцелуе, укусе), потом, слезами и грудным молоком

oИнкубационный период гепатита В колеблется от 3 до 6 месяцев. Клинические проявления обусловлены повреждением печеночных клеток.

oГепатит В протекает более тяжело, чем гепатит А. У 10% больных он переходит в хронические формы. Эти люди длительно, иногда годами являются носителями HBs-АГ и основными источниками инфекции. На фоне хронических форм возможно последующее развитие цирроза и первичного рака печени.

oМикробиологическая диагностика:

Используют серологический метод и ПЦР. Методами ИФА и РНГА в крови определяют маркеры гепатита В: антигены (НВs

иНВе) и антитела (анти-НВс-IgM, анти-НВс-IgG, анти-НВs, анти-НВе-IgM). ПЦР определяют наличие вирусной ДНК в крови

ибиоптатах печени. Для острого гепатита в преджелтушном и начальной стадии желтушного периода характерно обнаружение HBs-антигена, HBe-антигена и анти-HBc-IgM антител. В период реконвалесценции — анти-HBe-IgM, анти-HBc-

IgG, анти-HBs антител. o Профилактика

Важнейшей и наиболее эффективной мерой профилактики гепатита В является исключение попадания вируса при парентеральных манипуляциях и переливаниях крови. Это достигается:

a)применением одноразовых шприцев, систем переливания крови, инструментов с последующим после их использования сбором и уничтожением;

b)надежной стерилизацией инструментов в централизованных пунктах;

c)проверкой на гепатит В по наличию НВs-антигена в крови доноров крови, органов и тканей, используемых для трансплантации и искусственного обсеменения;

d)учетом всех вирусоносителей в диспансерах и лечением больных гепатитом В в специализированных отделениях инфекционных больниц;

e)обязательным использованием персоналом перчаток при работе с кровью.

Группу высокого риска заражения гепатитом В составляют хирурги, гинекологи, акушеры, стоматологи, манипуляционные сестры, сотрудники отделений переливания крови, гемодиализа, сотрудники лабораторий и лица, занятые в производстве иммунобиологических препаратов из донорской и плацентарной крови.

Для предотвращения передачи гепатита В половым путем принимают те же меры, что при ВИЧ-инфекции.

Специфическая профилактика осуществляется вакцинацией рекомбинантной генно-инженерной вакциной, содержащей HBs антиген. Вакцинации подлежат все новорожденные в первые 24 ч жизни, далее — по календарю прививок. Среди взрослого населения трехкратной вакцинации подвергаются лица, относящиеся к группе высокого риска заражения гепатитом В. Длительность поствакцинального иммунитета — не менее 7 лет.

ПРОТИВОПРОТОЗОЙНЫЕ − метронидазол, пентамидин.

ПРОТИВОВИРУСНЫЕ − азидотимидин, ацикловир.

ПРОТИВОГРИБКОВЫЕ – полиены, нистатин

АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫЕ – противотуберкулезные (антимикобактериальные) и противосифилитические средства

По способности накапливаться в тех или иных тканях, т.е. по фармакокинетике

Цитостатики – накапливаются в опухолевых клетках и подавляют их рост

Уросептики – накапливаются в моче и подавляют развитие возбудителей инфекций почек и мочевыводящих путей, и др.

По химическому строению:

Производные мышьяка, сурьмы и висмута – производные соответствующих соединений. Применение: для лечения паразитарных инфекций и сифилиса.

Сульфаниламиды – производные сульфаниловой кислоты Примеры: сульфаметоксазол, сульфаметизол, сульфацетамид, сульфадиметоксин

Механизм действия: нарушение синтеза фолиевой кислоты. Через него происходит синтез ДНК (т.е. они являются микробными антиметаболитами)

Диаминопиримидины – так же являются антиметаболитами (но спектр действия шире, чем у сульфаниламидов); производные пиримидиновых оснований

Примеры: тетроксоприм, триметаприм, пириметамин

Механизм действия: триметоприм ингибирует образование фолиевой кислоты, но на более поздних этапах ее синтеза усиливает действие сульфаниламида

Нитрофураны – производные фурана

Примеры: фурацилин, нитрофуразон, фурагин

Механизм действия – одновременная блокада нескольких ферментных систем микробной клетки.

Хинолоны – на основе следующих веществ

собственно, хинолоны (налидиксовая кислота, циноксацин)

производные хинолонов (4-аминохинолоны, 8-аминохинолоны)

Фторхинолоны: офлоксацин, норфлоксацин, ципрофлоксацин

Механизм действия: нарушение различных этапов синтеза ДНК (репликация, дупликация, транскрипция, репарация) микробной клетки

Недостатки: фторхинолоны – не оказывают действие на аэробные бактерии; налидиксовая кислота – активна только в отношении Грамбактерий.

Азолы – являются противогрибковыми. Примеры:

производные имидазола – миконазол, эконазол, клотримазол

другие азолы – бифоназол, флуконазол

Механизм действия: 1) ингибирование биосинтеза стероидов, что приводит к повреждению наружной КМ грибов и повышению ее проницаемости. 2) ингибирование синтеза ТАК, ФЛ; уменьшение активности ферментов окисления и ферментов, тормозящих образование свободных радикалов.

Азолы для местного (поверхностные микозы, кандидозы) и системного (пневмонии, менингиты, перитониты) применения.

По способу получения

Природные

Синтетические

полусинтетические (на начальном этапе препарат получают естественным путем, но дальше синтез ведут искусственно).

Продуцентами большинства антибиотиков являются актиномицеты, плесневые грибы, но их можно получить и из бактерий (полимиксины), высших растений (фитонциды) и даже тканей животных и рыб (эритрин, эктерицид).

По направленности действия:

на антибактериальные

противогрибковые

противоопухолевые.

По спектру действия (числу видов микроорганизмов, на которые действуют антибиотики):

широкоспекторные (цефалоспорины 3-го поколения, макролиды)

препараты узкого спектра действия (циклосерин, линкомицин, бензилпенициллин, клиндамицин).

Заметим, что препараты узкого спектра в некоторых случаях могут быть предпочтительнее, т.к. не подавляют нормальную микрофлору.

 Антибиотики. Определение. Классификация АБ

АНТИБИОТИКИ – химиотерапевтические вещества природного происхождения или их полусинтетические и синтетические аналоги, обладающие антимикробным или противоопухолевым действием

Классификация антибиотиков:

По происхождению:

а) природные б) полусинтетические в) синтетические

По продуцентам (в основе получения АБ лежит принцип антагонизма)

а) грибы б) актиномицеты

в) ткани животных и растений

По химической структуре:

1.β(БЕТА)-ЛАКТАМЫ. К ним относятся: пенициллины, цефалоспорины, монобактамы, карбапенемы, цефамицины.

Пенициллины:

природные – бензилпенициллин, феноксиметил-пенициллин

резистентные к пенициллиназе – оксациллин, клоксациллин

аминопенициллины – амоксициллин, ампициллин

карбоксипенициллины – карбенициллин, тикарциллин

уреидопенициллин – азлоциллин, пиперациллин

Цефалоспорины:

1-го поколения − цефазолин, цефалексин, цефаклор

2-го поколения – цефакситин, цефотетан, цефуроксим

3-го поколения – цефтриаксон, цефоперазон, цефотаксим

4-го поколения − цефепим, цефомакс, цефанорм

5-го поколения – цефтозан, цефтобипрол, цефтаролин

Монобактамы − азтреонам

Карбапенемы – меропенем, имипинем

2.МАКРОЛИДЫ – азитромицин, эритромицин, спирамицин

3.ГЛИКОЛИПИДЫ – ванкомицин, тейкопланин

4.ПОЛИМИКСИНЫ – полимксин В/Е

5.СУЛЬФАНИЛАМИДЫ:

Короткого действия – сульфадимин

Среднего действия – сульфадиметоксин, сульфаметоксазон

Длительного действия – сульфален

6.ТЕТРАЦИКЛИНЫ – тетрациклин, доксициклин

7.ЛИНКОЗАМИДЫ – ликомицин, клиндамицин

8.РИФАМПИЦИНЫ – рифампицин

9.НИТРОФУРАНЫ – нитрофурантоин, фурагин, фуразолидон

10.НИТРОИМИДАЗОЛЫ – метронидазол, тинидазол, орнидазол

11.ПРОИЗВОДНЫЕ В-ОКСОХИНОЛИНА – диоксидин, хиноксидин

12.СУЛЬАМИДЫ С ТРИМЕТОПРИМОМ – ко-тримоксазол

13.ДР. АНТИМИКРОБНЫЕ ПРЕПАРАТЫ – фосфомицин, спектиномицин, фузидиевая кислота

14.ПРОТИВОТУБЕРКУЛЕЗНЫЕ СРЕДСТВА – метазин, стрептомицин, циклосерин

15.ПРОТИВОГРИБКОВЫЕ СРЕДСТВА – нистатин, миконазол, фликоназол

16.ИНГИБИТОРЫ ДНК-ЛИГАЗЫ

Хинолоны – налидиксовая кислота, пимедиевая кислота

Фторхинолоны – ципрофлоксацин, офлоксацин

17.ПРОИЗВОДНЫЕ ДИАМИНПИРИМИДИНА А

По спектру действия:

а) широкого (действуют на большой круг микроорганизмов) – цефалоспорины 3- го поколения, макролиды б) узкого (действуют на определенную группу микроорганизмов) – циклосерин, линкомицин, клиндамицин, бензилпенициллин

По характеру действия на микробную клетку:

а) бактерицидные (убивают микробные клетки) – влияют на клеточную стенку и ЦПМ б) бактериологические (задерживают рост и размножение микробных клеток) – влияют на синтез макромолекул

По направленности действия:

а) антибактериальные б) противогрибковые в) противовирусные г) противопротозойные

Ингибиторы синтеза КС:

В-лактамные АБ

Пенициллин

Цефалоспорины 4 поколения (цефепим, цефомакс, цефанорм) + 5 поколения (действуют на MRSA, MRSE – цефтобипрол, цефтолозан, цефтаролин)

монобактамы (азтреонам)

карбапенемы (имипенем, меропенем, дорипенем, эртапенем, разупенем)

Гликопептиды, липопетиды, гликолипопетиды (ванкомицин, тейкопланин, даптоицин - мембранотропные)

Фосфомицин (монурал)

Ингибиторы синтеза белка:

Аминогликозиды – амикацин, гентамицин 2 поколения, сизомицин

Тетрациклины – доксициклин

Макролиды – кларитромицин, азитромицин, рокситромицин

Линкозамиды – клиндамицин, линкомицин

Левомицетины

Ингибиторы энергетических процессы на ЦПМ:

полимиксины

полиеновые АБ (противогрибковые)

Ингибиторы синтеза НК

рифампицин (ингибирует синтез ДНК-гиразы)

2.Цитокины

Цитокины – это гликопротеины и пептиды, секретируемые активированными клетками иммунной системы (и некоторыми другими клетками) и осуществляющие регуляцию взаимодействий и активацию всех звеньев иммунной системы, а также влияющие на другие органы и ткани.

Цитокины имеют следующие особенности:

большинство не синтезируется в отсутствие иммунного ответа;

активны в очень низких концентрациях (благодаря системам вторичных посредников);

могут вызывать рост, пролиферацию, дифференцировку, активацию или апоптоз;

зачастую выделяются в ходе цепных цитокиновых реакций (цитокиновые каскады);

могут действовать по интракринному (воздействие внутри клетки), аутокринному (на мембранные рецепторы этой же клетки), паракринному (на близлежащие клетки) и эндокринному (дистантно на клети любых органов и тканей) механизмам;

разные цитокины могут оказывать одинаковое действие на одну клетку (перекрываемость), а один цитокин может оказывать разное действие на разные клетки (плейотропность).

Косновным группам цитокинов относят:

интерлейкины – опосредуют межлейкоцитарные взаимодействия;

интерфероны – противовирусная, противоопухолевая и иммуномодулирующая активность;

факторы некроза опухолей (ФНО) – провоспалительная активность, индукция апоптоза;

трансформирующие ростовые факторы – регуляция воспаления и ангиогенеза;

хемокины – хемотаксис и активация клеток иммунной системы;

колониестимулирующие факторы – пролиферация кроветворных клеток

Интерлейкины (ИЛ) – п.с. гликопротеиды, которые синтезируются активированными (стимулированными АГ) клетками иммунной системы (ИС). Они обеспечивают разнообразные взаимодействия между клетками ИС.

В настоящее время выделяют 36 интерлейкинов. Основные эффекты отдельных интерлейкинов: