Ход работы.

На окрашенный мазок нанести каплю иммерсионнго масла и, закрепив препарат в препаратоводителе, просматривать его при окуляре 7(10) и объективе 90.

В мазке найти все основные элементы, сравнив их форму, размеры, структуру у разных видов животных.

Произвести подсчет (100) или (200) лейкоцитов, передвигая препарат лестницеобразно, смещая препарат справа налево. Подсчитанную сумму отдельных лейкоцитов вычислить их процентное содержание, вывести лейкоцитарную формулу.

Результат: заполнить таблицу «Лейкоцитарная формула»

Палоко-ядерные нейтрофилы	Сегменто- ядерные нейтрофилы	Эозинофилы	Базофилы	Лимфоциты	Моноциты

Вывод: В заключение укажите отклонения от нормы в приведенных параметрах. Если отклонений нет, то отметьте, что «показатели крови в норме».

Работа № 2. Подсчет количества лейкоцитов.

Цель работы: Ознакомиться с методикой подсчета лейкоцитов.

Оборудование: Микроскоп, смеситель для лейкоцитов, жидкость Тюрка, спиртовые тампоны, глазные пипетки, камера Горяева, покровные стекла.

Объект исследования: кровь.

Ход работы.

Для подсчета количества лейкоцитов кровь следует развести жидкостью, которая устранила бы эритроциты. Разбавляющими жидкостями для подсчета являются гипотонические растворы, гемолизирующие эритроциты. Дистиллированная вода гемолизирует эритроциты. Добавляемая уксусная кислота просветляет протоплазму лейкоцитов, вследствие чего ядра хорошо видны. Добавление краски (генцианвиолета), окрашивающей ядра способствуют различию их формы.

Состав жидкости Тюрка для разбавления:

Ледяная уксусная кислота - 3см³, 1% водный раствор генцианвиолета - 3 см³, дистиллированная вода - 300см³.

Разбавление крови с помощью смесителя

Для разбавления лейкоцитов применяется смеситель, разбавляющий не в 200 раз, а только в 20, поэтому в смесителях для лейкоцитов имеются метки: на капилляре цифры 0.5 и 1, выше расширения цифра 11 (рис. 12).

. Набрать в смеситель кровь до метки 0.5 и жидкость Тюрка до метки 11. Перевести смеситель в горизонтальное положение, снять резиновую трубочку, задать оба конца пальцами и встряхивать 1.5 минуты.

Разбавление крови пробирочным методом

Разводят исследуемую кровь в 20 раз, для этого в сухую пробирку наливают 0,4 мл уксусной кислоты. Набирают 0,02 мл крови. Кончик пипетки вытирают фильтровальной бумагой или марлей, следя за тем, чтобы из пипетки кровь не вылилась.

Рис. 12.Смесители.

В - смеситель для эритроцитов, Г - смеситель для лейкоцитов.

Выдувают кровь из пипетки на дно пробирки, тщательно перемешивают (повторно набирая и выдувая смесь крови с уксусной кислотой). Маркируют пробирку и оставляют до мо­мента счета (допускается счет лейкоцитов не более чем через 2…4 ч после взятия крови).

Подсчет лейкоцитов

Заправить счетную камеру разбавленной жидкостью, как в предыдущем случае, при подсчете эритроцитов. Сосчитать лейкоциты на площади 100 больших квадратов, сумму умножить на 50, что будет соответствовать количеству лейкоцитов в 1 мм³ крови.

По международной системе измерения общую сумму лейкоцитов умножить на 10⁹, что будет соответствовать количеству лейкоцитов в одном литре крови. Пример: в 100 больших квадратах подсчитали 140 лейкоцитов, в 1 мм³ крови их будет 7000 (140 * 50), а в одном литре крови 7 * 10⁹ (СИ).

У здоровых лошадей, крупного и мелкого рогатого скота в крови содержится 6…10 Г/л лейкоцитов (Г = 10⁹; читают: гига на литр); у свиней лейкоцитов больше – 8…16, а у птиц – 20…40 Г/л.

Результат: Результаты анализа крови обычно записываются на бланках, в которых указываются все исследованные параметры, см. табл. 2.

Таблица 2

Пример результата анализа крови

Параметры	Показатели
Эритроциты	4,5·1012 кл/л
Ретикулоциты	1 %
Гемоглобин	150 г/л
ЦП	1
Гематокрит	45 %
Лейкоциты	6·109 кл/л
Тромбоциты	250·109 /л

Вывод: Заключение по анализу крови.

Занятие № 6. Основы переливания крови.

Работа № 1. Определение группы крови по системе АВ0.

Под группами крови АВ0 понимают различные сочетания антигенов

(агглютиногенов), находящихся в эритроцитах, и антител по отношению к

ним (агглютининов), находящихся в плазме крови.

Существует два групповых агглютиногена (А и В) и два агглютинина (ά и β).

Разные сочетания этих свойств образуют четыре группы крови: 0 (I), А (II),

В (III) и АВ (IV).

Для установления группы крови используются стандартные сыворотки, содержащие определенный титр агглютининов.

Метод определения группы крови по системе АВ0 основан на смешивании капли крови с раствором, содержащим агглютинины – антитела против антигенов А и В (агглютиногенов). В качестве таких растворов служат моноклональные анти-А и анти-Вантитела, поликлональные иммунные сыворотки или сыворотки крови лиц со II и III группами крови.

Цель работы: ознакомиться с методиками определения групп крови.

Задача: Определить группу крови по системе АВО.

Оборудование: спирт, йод, вата, стерильный скарификатор, эмалированные пластинки с лунками, стеклянные палочки, стандартные сыворотки для определения групп крови и резус-фактора.