Литература / Руководство БХ

- структура реакций ацидо- и аммониогенеза, значение реакций ацидо- и аммониогенеза для формирования щелочного резерва;

■расстройства КОС-ацидоз, алкалоз; определение понятий, виды ацидоза и алкалоза;

■биохимические аспекты обмена воды, роль аквапоринов в процессах обмена воды;

■регуляция количества воды в организме, роль антидиуретического гормона, механизм действия антидиуретического гормона;

■биохимическая активность натрия;

■биохимические аспекты обмена натрия;

■гуморальные факторы регуляции уровня натрия в крови, механизм их действия;

■биохимическая активность калия;

■биохимические аспекты обмена калия;

■гуморальные факторы регуляции уровня калия в крови, механизм их действия;

■биохимическая активность кальция;

■биохимические аспекты обмена кальция;

■гуморальные факторы регуляции уровня кальция в крови, механизм их действия;

■биохимическая активность магния;

■биохимические аспекты обмена магния;

■гуморальные факторы регуляции уровня магния в крови, механизм их действия;

■физиологическая активность хлора;

■биохимические аспекты обмена хлора;

■гуморальные факторы регуляции уровня хлора в крови, механизм их действия;

■дыхательная функция крови, определение понятия;

■механизмы транспорта углекислого газа, связь с буферными системами;

■механизмы транспорта кислорода, роль гемоглобина в транспорте кислорода, характер связывания кислорода гемоглобином;

■факторы влияющие на сродство гемоглобина к кислороду, их роль в газообмене;

■понятие гипоксии, виды гипоксии;

■негазообменные функции гемоглобина.

Контроль усвоения слушателями основных этапов выполнения лабораторной работы производится в форме устного опроса. Вопросы, предлагаемые курсантам:

Назовите показатели, значения которых характеризуют кислотно-основное состояние;

■Раскройте содержание показателей, значения которых характеризуют кислотноосновное состояние;

■Назовите показатели, значения которых характеризуют водно-электролитный обмен;

■Назовите показатели, значения которых характеризуют дыхательную функцию крови;

■Назовите принцип метода определения значений показателей КОС и дыхательной функции крови;

■Назовите принцип метода определения значений показателей водно-электролитного обмена.

Заключение

Исследование значений показателей КОС, водно-электролитного обмена, дыхательной функции крови широко проводится в практике отделений неотложной лабораторной диагностики. Результаты исследований используются для построения схем лечения при проведении реанимационных мероприятий и интенсивной терапии.

Биохимия и патобиохимия крови

Вопросы для самоподготовки

1.Белки плазмы крови и их роль в организме:

-клиническое значение определения белков сыворотки крови;

-ферменты крови, механизм гипер- и гипоферментемии;

-клиническое значение определения ферментных и изоферментных спектров;

61

-важнейшие индивидуальные белки крови;

-дис- и папапротеинемия , клиническое значение их выявления;

-иммуноглобулины, структура и биологическая роль.

2.Основные небелковые азотсодержащие и безазотистые соединения крови. Значение их определения. Ренин-ангиотензиновая и калликреин-кининовая системы крови.

3.Свертывающая и антисвертывающая система крови:

-современные представления о структурно-биохимической организации сосудистотромбоцитарного гемостаза;

-внутренний путь активации свертывания крови;

-внешний путь свертывания крови;

-система естественных антикоагулянтов;

-фибринолитическая система.

4.Кислотно-основное состояние (КОС) и дыхательная функция крови:

-определение понятия кислотно-основное состояние;

-ионы водорода, их биологическая активность, единицы измерения концентрации ионов водорода, допустимые пределы изменения количества ионов водорода в крови;

-источники ионов водорода в организме;

-понятие буфера, механизм действия буфера, буферные системы крови, распределение буферной емкости между буферными системами;

-сопряжение буферных систем в процессе нейтрализации избыточных количеств ионов водорода, влияние кислорода на взаимодействие буферных систем;

-регенерация щелочной емкости гемоглобинового буфера в легких, сопряжение с процессами газообмена;

-почечные механизмы влияния на кислотно-основноесостояние:

-структура реакций цикла сохранения избытка бикарбоната в крови при почечной фильтрации, порог реабсорбции бикарбоната, физиологическое значение удаления избытка бикарбоната;

-структура реакций ацидо- и аммониогенеза, значение реакций ацидо- и аммониогенеза для формирования щелочного резерва;

-расстройства КОС-ацидоз, алкалоз; определение понятий, виды ацидоза и алкалоза; дыхательная функция крови, определение понятия;

-механизмы транспорта углекислого газа, связь с буферными системами;

-механизмы транспорта кислорода, роль гемоглобина в транспорте кислорода, - характер связывания кислорода гемоглобином;

-факторы влияющие на сродство гемоглобина к кислороду, их роль в газообмене;

-понятие гипоксии, виды гипоксии;

-негазообменные функции гемоглобина.

5.Биохимия, патобиохимия обмена воды и электролитов сыворотки крови:

-биохимические аспекты обмена воды, роль аквапоринов в процессах обмена воды;

-регуляция количества воды в организме, роль антидиуретического гормона, механизм действия антидиуретического гормона;

-биохимическая активность натрия;

-биохимические аспекты обмена натрия;

-гуморальные факторы регуляции уровня натрия в крови, механизм их действия;

-биохимическая активность калия;

-биохимические аспекты обмена калия;

-гуморальные факторы регуляции уровня калия в крови, механизм их действия;

-биохимическая активность кальция;

-биохимические аспекты обмена кальция;

-гуморальные факторы регуляции уровня кальция в крови, механизм их действия;

-биохимическая активность магния;

-биохимические аспекты обмена магния;

62

-гуморальные факторы регуляции уровня магния в крови, механизм их действия;

-физиологическая активность хлора;

-биохимические аспекты обмена хлора;

-гуморальные факторы регуляции уровня хлора в крови, механизм их действия.

Биохимия почек

Биохимия пищеварения. Биохимия печение и поджелудочной железы.

Определение активности ά-амилазы методом Каравея. Под действием ά-амилазы крахмал гидролизуется с образованием продуктов, не дающих цветной реакции с йодом. Интенсивность уменьшения окраски йод-крахмального комплекса в единицу времени пропорциональна активности фермента.

Исследуемый материал

Моча, разведенная дистиллированной водой в 10 раз (не забудьте конечный результат умножить на степень разведения). Активность фермента в моче сохраняется в течение 5-ти дней при температуре 2-8 °С. При хранении мочи рН довести до щелочной реакции.

Состав набора

Реагент № 1. Буфер (105мл).

Реагент № 2. Субстраткрахмал по Lintner 10 мг/мл (4,5 мл). Реагент № 3. Концентрированный раствор йода (7 мл). Реагент № 4. Раствор фторида калия (13 мл).

Реагент №5 . Кислота соляная (50 мл).

Подготовка реагентов к процедуре анализа и их стабильность

Для исследования необходимо приготовить следующие рабочие растворы: Буферно-субстратный раствор: смешивают необходимые количества реагентов № 1 и

№ 2 в соотношении 24:1. Рабочий буферно-субстратный раствор стабилен в течение 5-ти дней при температуре 2-8 °С.

Рабочий раствор йода: смешивают необходимые количества реагентов № 3 и № 4 с дистиллированной водой в соотношении 1:2:7. Рабочий раствор йода стабилен не менее месяца при комнатной температуре (18-25 °С) при хранении в защищенном от света месте.

Рабочий раствор соляной кислоты: разводят необходимое количество реагента № 5 дистиллированной водой в соотношении 1:15. Рабочий раствор соляной кислоты стабилен длительное время.

Необходимо плотно закрывать флаконы после использования реагентов. Невскрытые реагенты стабильны в течение 12 месяцев: реагенты № 1, 3, 4, 5 при комнатной температуре, реагент № 2 при температуре 2-8 °С; реагент № 3 в защищенном от света месте.

После вскрытия флакона с реагентом № 2 - концентрированный субстрат крахмала стабилен не менее 6 месяцев при температуре 2-8 °С. Дата изготовления, серия и номер набора по каталогу указаны на упаковке.

Процедура анализа

63

Пробы тщательно перемешивают и инкубируют при комнатной температуре в течение 5 минут. Измеряют оптические плотности опытной и контрольной проб против дистиллированной воды при длине волны 630 нм (630 - 690 нм). Интенсивность окраски реакционной среды стабильна не менее часа.

Расчет

Активность ά-амилазы выражается в единицах, которые определяются количеством крахмала (мг), гидролизованного одним литром исследуемой мочи за одну секунду при 37 °С (мг/сек х л).

Расчет активности фермента (А) проведите по формуле:

где: Е оп. - оптическая плотность опытной пробы, Е контр. - оптическая плотность контрольной пробы, С - коэффициент пересчета на 1 мг крахмала,

t - коэффициент пересчета на 1 сек инкубации, К - коэффициент пересчета на 1 лмочи,

66,6 - при соблюдении приведенных в инструкции соотношений C x t x K = 0,2 / (300 х

10-5).

Нормальные показатели

Моча - до 44 мг / (сек х л).

Обратите внимание:

Избегайте случайного загрязнения реагентов и исследуемого материала слюной и потом!

Аналитические характеристики набора

Линейность - до 55 мг/(сек х л).

Значение коэффициента вариации - не более 10 %.

Моча здоровых людей обладает низкой амилазной активностью по сравнению с амилазой слюны. Активность ά-амилазы в моче увеличивается при заболеваниях поджелудочной железы (первые сутки заболевания), а затем постепенно возвращается к норме. При почечной недостаточности амилаза в моче отсутствует. В детском возрасте увеличение активности амилазы наблюдается при эндемическом воспалении околоушной железы (паротите), что указывает на одновременное поражение вирусом паротита и поджелудочной железы.

Биохимия почек и мочи

Почки — один из важнейших органов, основная функция которого заключается в поддержании постоянства внутренней среды организма. Образующиеся в процессе клеточного метаболизма и подлежащие удалению продукты сначала поступают из клеток в плазму крови, являющуюся частью внеклеточной жидкости, а затем уже выводятся из организма. Наиболее изучена роль почек в выведении из организма различных, главным образом азотистых, продуктов обмена, в регуляции постоянства концентрации натрия и регуляции количества внеклеточной жидкости. Почки являются также одним из органов, обеспечивающих постоянство концентрации водородных ионов в крови и постоянство ее осмотического давления.

Функциональное значение клубочков и канальцев различно. В клубочках происходит образование первичной мочи или ультрафильтрата, который содержит все компоненты плазмы

64

крови, за исключением белков (в действительности в ультрафильтрате все же содержится некоторое количество белка). В канальцах основное количество выделившейся воды в клубочках и часть растворенных веществ подвергается обратному всасыванию. Таким образом, образуется окончательная моча, отличающаяся от ультрафильтрата более высоким содержанием ряда органических и неорганических соединений. В канальцах, кроме того, возможно также и выделение в фильтрат некоторых веществ, как входящих в состав крови (экскреция), так и заново образующихся в ткани почки (секреция в канальцах). Объем клубочкового фильтрата, т. е. первичной мочи, у человека составляет около 150-180 л в сутки; в то же время из организма на протяжении суток выводится всего 1,5 - 2 л окончательной мочи.

Почечный каналец может быть подразделен на две части — проксимальный и дистальный сегменты. В проксимальном сегменте происходит реабсорбция примерно 96 % воды и 80 % ионов натрия и хлора. Здесь же реабсорбируются глюкоза, аминокислоты и небольшое количество белков, попавших в состав ультрафильтрата. Концентрация белка в ультрафильтрате обычно не превышает 10—30 мг %. Однако, учитывая общий объем ультрафильтрата, можно подсчитать, что при отсутствии реабсорбции человек терял бы с мочой ежедневно 18 - 54 г белка. На самом же деле суточное выделение белка с мочой составляет всего 30 мг, из которых 2/3 составляют альбумины и 1/3 - глобулины.

Глюкоза реабсорбируется также почти полностью. Содержание глюкозы во вторичной моче составляет 5 - 10 мг %, т. е. за сутки человек выделяет всего 50 - 200 мг глюкозы. Всасывание воды в проксимальном сегменте происходит пассивно, в результате активного всасывания натрия. Вода в этом случае как бы «следует» за натрием. Всасывание же натрия идет против градиента концентраций; в содержимом канальца концентрация натрия ниже концентрации его в крови.

Впроксимальном отделе канальцев происходит и реабсорбция почти всего калия, содержащегося в клубочковом фильтрате, хотя, вероятно, он может всасываться и в других отделах нефрона.

Вдистальном сегменте канальца продолжается всасывание как воды, так и оставшейся части натрия, но, в отличие от всасывания в проксимальном сегменте, в дистальной части канальца вода всасывается вне всякой зависимости от всасывания ионов Na.

Вформировании окончательной мочи, наряду с фильтрационно-реабсорбционными процессами, принимают участие и процессы канальцевой секреции или, как их еще называют, процессы активной экскреции. Они заключаются в выделении в просвет канальца ряда веществ, как фильтрующихся в клубочках, так и не способных проходить через почечный фильтр. К их числу, например, относятся экзогенный креатинин, парааминогиппуровая кислота, мочевина (при высокой концентрации ее в крови), калий, лекарственные вещества и некоторые другие. Секреция, как и реабсорбция, является активным процессом, связанным с функцией канальцевых клеток. Следует также отметить, что именно путем канальцевой секреции выделяются многие чужеродные для организма вещества, попавшие в кровь. Почки выполняют большую работу по изменению концентрации водородных ионов в первичной моче, которая по величине рН не отличается от плазмы крови (рН 7,4).

О фильтрационной способности почек судят, определяя величину клубочковой фильтрации. Она равна клиренсу таких веществ, которые после фильтрации не подвергаются реабсорбции, а также не секретируются клетками канальцевого эпителия (инулин и эндогенный креатинин). Под клиренсом того или иного вещества условно понимают количество крови (в мл), очищающееся от него в 1 мин, при прохождении крови через почки.

Регуляция деятельности почек, как и регуляция работы других органов, осуществляется нервно-гуморальным путем, при участии гормонов ряда желез внутренней секреции. В известной степени сама почка является железой внутренней секреции, вырабатывающей такие гормоны, как ренин и эритропоэтин. Работа почек направлена на поддержание постоянства осмотического давления. По современным представлениям, ткани содержат осморецепторы, реагирующие на изменение осмотического давления. В ответ на раздражение осморецепторов изменяется выделение антидиуретического гормона гипофиза (вазопрессина), который влияет на процесс реабсорбции воды в дистальных сегментах почечных канальцев. Одновременно, в результате изменения секреции альдостерона корой надпочечников, меняется и реабсорбция натрия в дистальном сегменте. Таким образом, основными гормонами, влияющими на деятельность почек, являются антидиуретический гормон и альдостерон. Что же касается других

65

гормонов, например адреналина, то этот гормон в основном оказывает влияние на диурез косвенным путем, изменяя скорость кровообращения.

Непосредственно нервная регуляция почечной деятельности осуществляется главным образом симпатической нервной системой, которая влияет как на скорость кровообращения в почках, так и на реабсорбционные процессы в канальцах.

Как известно, исследование мочи позволяет судить о функции как почек, так и ряда других органов. Анализ мочи включается в число диагностических исследований при всех заболеваниях.

Плотные вещества мочи представлены как органическими, так и неорганическими веществами. Дать полную сводку всех химических ингредиентов, содержащихся в моче здорового

ибольного человека, было бы весьма трудно, так как число их очень велико (не менее 150).

Смочой человека выводятся углеводы и продукты углеводного обмена. В моче встречаются в небольшом количестве белковые вещества. В норме содержание их невелико. Основным азотистым компонентом мочи является мочевина. Выведение мочевины с мочой у здорового человека зависит от содержания белка в пищевом рационе. В среднем за сутки выводится около 25—30 г мочевины. Конечным продуктом азотистого обмена является также креатинин (1,5—2 г в суточном объеме мочи); он образуется из фосфокреатина, содержащегося в мышечной ткани. Количество креатинина в моче тем выше, чем больше масса мышц тела человека. Важным азотистым компонентом мочи является мочевая кислота - конечный продукт обмена пуриновых оснований, которая выделяется с мочой за сутки в количестве 0,7 - 1 г. Моча как здорового, так и больного человека содержит различные аминокислоты. Количество их в суточной моче составляет примерно 1,1 г. Выделение с мочой различных аминокислот неодинаково. Такие аминокислоты, как гликокол, гистидин, аланин, выводятся в большем количестве по сравнению с другими аминокислотами.

Наряду с продуктами белкового обмена с мочой из организма выводятся и продукты жи-

рового обмена, в частности ацетоновые тела ( -оксимасляная кислота, ацетоуксусная кислота и ацетон). В норме количество их в моче невелико (около 10 мг в сутки). В моче человека содержатся также следы летучих жирных кислот, холестерина, желчных кислот. В моче обычно содержатся все водорастворимые витамины. Количество витаминов в суточном объеме мочи зависит от содержания их в пище, потребности в них организма, возраста человека, способности слизистой кишечника к всасыванию. В среднем здоровый человек в норме выделяет 20 - 40 мг витамина С, 100 - 150 мкг витамина B1, 100 мкг витамина В2, 5 мг витамина РР; кроме того, с мочой всегда выделяется и основной продукт обмена витамина РР - N- метилникотинамид.

В моче содержатся также различные гормоны и продукты их обмена. Так, например, в очень небольшом количестве с мочой выводится адреналин. С мочой выводятся гормоны коры надпочечников - 17-окси-кортикостероиды, которые содержатся в моче как в свободном состоянии, так и в виде глюкуронидов. Количество их в суточном объеме мочи колеблется в норме в пределах 4 - 10 мг, наряду с глюкокортикоидами, в моче содержится и основной минералокортикоид — альдостерон (3,2 - 18,9 мкг в суточном объеме мочи).

Из минеральных веществ в моче содержатся все элементы, входящие в состав крови и других тканей организма. С мочой человека за сутки при обычной смешанной пище выделяется: 3 - 6 г натрия, 1,7 - 3,4 г калия, 0,11 - 0,36 г кальция, 0,03 - 0,18 г магния. Следует заметить, что с мочой выводится лишь около 30 % всего количества Са и Mg, подлежащего удалению из организма.

Количество выделяемого с мочой железа в норме не превышает 1 мг.

С мочой человека всегда выводятся и аммонийные соли, количество которых в пересчете на ион аммония равно 0,7 - 1 г. У здорового человека количество аммиака в моче в определенной степени отражает состояние кислотно-щелочного равновесия.

Определение относительной плотности мочи (ОПМ). Этот показатель определяют с помощью урометра. В зависимости от ОПМ урометр оказывается погруженным в слой мочи на разную глубину.

Ход определения. В цилиндр на 50 мл наливают по стенке исследуемую мочу и погружают в нее урометр. Производят отсчет относительной плотности по линии на шкале урометра, соответствующей нижнему мениску жидкости.

66

Внорме ОПМ колеблется в пределах ?1,010 - 1,025(в Рук-ве другие значения)?. Изменения ОПМ зависят от количества растворенных в моче веществ, ее объема, а также от количества потребленной жидкости. Колебания ОПМ наблюдаются при различных заболеваниях почек, связанных с нарушением их реабсорбционной способности. Так, при остром нефрите моча имеет высокую плотность вследствие понижения суточного количества мочи. При сахарном диабете ОПМ резко повышается из-за высокого содержания в ней глюкозы. Понижение ОПМ указывает на нарушение концентрационной функции почек, что отмечается при хроническом нефрите, первично или вторично сморщенной почке. При несахарном диабете моча также имеет низкую плотность вследствие нарушения обратной реабсорбции воды в канальцах.

Определение рH мочи с помощью индикаторной бумаги. В основу метода положен принцип буферного метода определения рН. На середину универсальной индикаторной бумаги наносят 1-2 капли исследуемой мочи и сравнивают окраску индикаторной зоны с окраской зон стандартной шкалы.

Внорме рН мочи колеблется в пределах 5,0 - 6,5. Большое влияние на рН мочи оказывает характер питания. При употреблении животной пищи рН мочи имеет кислый характер, растительной - щелочной. При сахарном диабете и длительном голодании величина рН мочи сдвинута в кислую сторону вследствие появления в ней кетоновых тел. Кислотность мочи увеличивается при лимфатическом диатезе, туберкулезе почек, почечной недостаточности. Щелочную реакций моча имеет при некоторых заболеваниях мочевыделительной системы. В этом случае микроорганизмы разлагают мочевину с выделением аммиака еще в полости мочевого пузыря (цистопиелиты). После долгого стояния моча также разлагается бактериями.

Изменения рН мочи обыкновенно протекают параллельно с изменениями рН крови. При ацидозах рН мочи - кислый, при алкалозах -щелочной. Однако при некоторых расстройствах КОС наблюдаются расхождения в рН крови и мочи. Так, рН мочи сдвинут в щелочную сторону при гиперхлоремическом ацидозе и почечных тубулярных ацидозах. Напротив, алкалоз при наличии кислой мочи встречается в случаях гипокалиемичеоких состояний, при лечении алкалоза внутривенным введением больших количеств NаСl. Величина рН мочи имеет значение для дифференцированного диагноза гипокалиемического и гипохлоремического алкалозов. Первый протекает при кислом рН мочи, второй - при щелочном.

Определение титруемой кислотности мочи. В основе метода лежит реакция нейтрали-

зации между кислыми веществами мочи и раствором щелочи. Количество пошедшей на нейтрализацию щелочи отражает уровень титруемой кислотности мочи.

Ход определения. В плоскодонную колбу наливают 10 мл мочи, добавляют 2-3 капли фенолфталеина, титруют 0,1 N раствором NаОН до порозовения, не исчезающего в течение 30 c. Кислотность мочи выражают количеством ммоль NаОН, пошедшим на нейтрализацию суточного количества мочи.

Расчет титруемой кислотности (ТК) осуществляют по формуле:

а * 0,1 * 1500

ТК, ммоль/л = —————————— = а * 15, 10

где а - объем 0,1 N щелочи, пошедшей на титрование; 0,1 - количество щелочи в 1 мл 0,1 N раствора, ммоль; 1500 - расчет на объем среднесуточного диуреза, мл; 10 - объем исследуемой мочи, мл.

Норма кислотности мочи 20-50 ммоль/сут. При снижении рН мочи титруемая кислотность повышается, при повышении - понижается.

Качественное обнаружение белка в моче. Реакция основана на выпадении белка в осадок вследствие его денатурации сульфосалициловой кислотой.

Ход определения. К 1,0 мл мочи приливают 3 капли 20 % сульфосалициловой кислоты. При наличии белка образуется белый осадок.

67

Количественное определение белка в моче. Метод основан на том, что если в исследу-

емой моче содержится белок в концентрации 0,033 г/л, то при наслаивании мочи на раствор концентрированной азотной кислоты на границе соприкосновения жидкостей через 2-3 минуты образуется белое кольцо (проба Геллера).

Ход определения. В 5 пробирок наливают по 1 мл воды. В 1-ю пробирку прибавляют 1,0 мл мочи, перемешивают и 1 мл из данного разведения переносят во 2-ю пробирку и т.д. Таким образом, моча в пробирках разводится соответственно в 2, 4, 8, 16 и 32 раза.

В6 пробирок вносят по 1,5 мл концентрированной HNО3 и осторожно по стенке наслаивают в 1-ю - 1 мл исходной мочи, во все остальные - мочу в соответствующих разведениях. Отмечают пробирку, в которой образуется белое кольцо на границе соприкосновения жидкостей между 2-й и 3-й минутами. Умножают 0,033 г/л на степень разведения в данной пробе и получают концентрацию белка в моче в граммах на литр.

Внорме моча содержит минимальное количество белка, которое не может быть установлено перечисленными выше двумя методами. Появление белка в моче - протеинурия - патология. Протеинурии делятся на две группы - почечные и внепочечные. При почечных протеинуриях белки выделяются почками, при внепочечных - мочевыводящими путями. Почечные протеинурии наблюдаются при остром и хроническом гломерулонефрите, нефрозах, нефросклерозах, врожденных анатомических дефектах почек (поликистозы), судорогах, гиперфункции щитовидной железы, желтухах, энтероколитах, ожогах, застое крови в почках, внепочечные - при почечнокаменной болезни, воспалительных, заболеваниях и опухолях мочевыводящйх путей.

Качественное определение глюкозы в моче. Проба Гайнеса. Проба основана на спо-

собности глюкозы при нагревании в щелочной среде восстанавливать Сu(ОН)2 в СuОН. В пробирку вносят 1 мл реактива Гайнеса и 2-3 капли мочи. Перемешивают и нагревают до кипения. В присутствии глюкозы появляется желтое или оранжевое окрашивание жидкости (осадка).

Внорме в моче глюкоза не содержится в таком количестве, которое может быть определено качественными пробами. Повышенный уровень глюкозы в моче (глюкозурия) наблюдается при нарушении ее реабсорбции в почках, при пищевой нагрузке глюкозой, эмоциональном стрессе, недостатке инсулина (сахарный диабет), при избытке контринсулярных гормонов

вкрови. Как временное явление глюкозурия может появляться при некоторых нервных и острых инфекционных заболеваниях, сотрясении головного мозга, после приступов эпилепсии. Отравления морфином, стрихнином, хлороформом, фосфором также сопровождаются глюкозурией. Встречается глюкозурия и при беременности.

Качественное определение ацетона в моче. Проба Ланге. Кетоновые тела образуют с нитропруссидом натрия в щелочной среде комплексное соединение фиолетово-красного цвета.

Ход определения. В пробирку наливают 4-5 мл мочи, 4-5 капель концентрированной уксусной кислоты и 4 капли свежеприготовленного раствора нитропруссида натрия. Перемешивают и наслаивают 1,5 мл 25 % раствора аммиака. Проба считается положительной при появлении в течение 1-2 мин на границе раздела жидкостей фиолетово-красного кольца.

Нормальная моча содержит незначительное количество кетоновых тел. Увеличение их содержания в моче наблюдается при недостатке углеводов в пище, сахарном диабете, голодании и других заболеваниях .

Качественная проба на гемоглобин в моче. Реакция основана на способности гемоглобина катализировать окисление бензидина перекисью водорода в соединение, окрашенное в синий цвет.

К 0,5 мл мочи добавляют 5 капель 0,2 % раствора бензидина и 5 капель 3 % раствора перекиси водорода.

Появление крови в моче (гематурия) отмечается при травмах почек, раке мочевого пузыря, мочекаменной болезни, циститах и других воспалительных заболеваниях мочевыводящих путей.

68

Качественное определение индикана в моче. Метод основан на превращении индикана в индоксил и окислении последнего в синий индиго хлорным железом.

Ход определения. К 10 мл мочи прибавляют 3 мл 20 % уксуснокислого свинца и фильтруют через бумажный фильтр. К 5 мл фильтрата прибавляют 5 мл 0,2 % раствора хлорного железа в концентрированной НС1. Черев 10 мин прибавляют 2 мл хлороформа и жидкость энергично встряхивают в течение 3 мин, а затем дают отстояться. Слой хлороформа приобретает синюю окраску, интенсивность которой пропорциональна количеству индикана в моче. В нормальной моче содержится в виде следов (слой хлороформа имеет бледно-голубую окраску).

Повышенное содержание индикана в моче отмечается при усилении гниения белков в толстой кишке, длительных запорах и кишечной непроходимости.

Количественное определение хлоридов в биологических жидкостях колориметри-

ческим методом. В присутствии ионов хлора в кислой среде тиоцианат ртути образуют тиоцианатионы, формирующие окрашенный комплекс с Fe3+. Интенсивность окраски комплекса пропорциональна концентрации хлоридионов в пробе.

Исследуемый материал

Негемолизированная сыворотка или гепаринизированная плазма крови. Моча, разведенная в 2 раза бидистиллированной водой. (Не забудьте результат анализа умножить на 2).

Состав набора

Реагент № 1. Железо азотнокислое (180 мл). Реагент № 2. Роданид ртути (20 мл).

Калибратор - раствор хлорида натрия 100 ммоль/л (2 мл).

Подготовка реагентов к процедуре анализа и их стабильность

Для приготовления рабочего реагента смешайте необходимое количество реагентов № 1 и № 2 в соотношении 9:1. Рабочий реагент, реагенты № 1 и № 2 после вскрытия стабильны при хранении в темном месте при температуре 18 – 25 °С не менее года.

Калибратор готов к использованию. После вскрытия флакона калибратор стабилен не менее 6 месяцев при температуре 18 – 25 °С.

Невскрытые реагенты № 1, № 2 и калибратор стабильны не менее года при хранении при 18-25 °С. В реагенте № 2 возможно выпадение незначительного осадка; в этом случае реагент № 2 необходимо перед использованием прогреть при 37 °С.

Плотно закрывайте флаконы после каждого использования реагентов. Дата изготовления, серия и номер набора по каталогу указаны на упаковке.

Процедура анализа

Пробы тщательно перемешивают и инкубируют при 20 – 25 °С в течение 5 минут. Опытную и калибровочную пробы фотометрируют против контрольной пробы при длине волны 540 нм (480-550 нм).

Расчет

Расчет концентрации (С) хлоридов в исследуемом материале проведите по формуле:

Е пробы

где: Е пробы - оптическая плотность опытной пробы, Е калибр. - оптическая плотность калибровочной пробы,

100 ммоль/л - концентрация хлоридов в калибраторе.

69