5.2. Оценка токсичности энергена на организменном уровне

5.2.1. Острая токсичность энергена

Опыты выполнены на 70 нелинейных белых мышах-самцах массой 19-21 г и 42 белых крысах-самцах массой 180-200 г. Энерген вводили однократно внутрь в дозах от 1,0 до 6,0 г/кг массы тела. Препарат вводили в водном растворе в объеме 0,6 мл на мышь и 6,0 мл – на крысу.

За животными проводили ежедневное клиническое наблюдение в течение 14 дней, учитывая внешний вид, поведение, поедаемость корма и прием воды, ритм и частоту сердцебиения, количество дыхательных движений и глубины дыхания. Изменений в поведении и клиническом состоянии мышей и крыс при введении препарата не отмечено. Признаки нарушения дыхания, наблюдаемые в первые минуты после введения препарата, проходили. Гибели мышей и крыс в течение всего периода наблюдения не наблюдалось.

Патоморфологическое изучение по окончании эксперимента не выявило нарушений в структурной организации внутренних органов. Среднесмертельную дозу – LD₅₀ – определить не удалось, так как при введении внутрь энергена в максимально возможных объемах (0,6 мл – белым мышам и 6,0 мл – белым крысам) в дозе 6000 мг/кг массы тела не отмечалось гибели животных или развития клинических признаков интоксикации. Препарат по степени токсичности относится к IV классу опасности – малоопасные вещества (ГОСТ 12.1.007-76).

Острую токсичность энергена изучали также при внутрибрюшинном введении. С этой целью 6 белым крысам массой тела 215 г вводили в брюшную полость препарат в максимально допустимом объеме при данном способе введения – 5 мл на животное. Реакции на введение и развития клинических признаков интоксикации у крыс при этом отмечено не было, гибели животных не происходило.

5.2.2. Хроническая токсичность и кумулятивные свойства энергена

Невозможность определения LD₅₀ из-за отсутствия смертности животных при введении максимальной дозы в 6000 мг/кг исключала возможность определения подострой токсичности.

Эксперименты по определению хронической токсичности проводили на белых крысах. С этой целью было сформировано 4 группы аналогов белых беспородных крыс с массой тела 180-200 г по 10 голов в группе. Первая группа получала терапевтическую дозу энергена (30 мг/кг массы тела). Вторая группа получала трехкратную (90 мг/кг массы тела), а третья – пятикратную (150 мг/кг массы тела) дозы препарата. Четвертая группа служила контролем.

После установления клинического статуса опытным животным ежедневно с кормом на протяжении 70 дней по схеме давали энерген. За всеми животными в течение срока эксперимента велись наблюдения: учитывалось общее состояние, аппетит, двигательные и поведенческие реакции. Взвешивание крыс проводилось трехкратно – в начале опыта, через 35 дней и на момент завершения эксперимента.

Кровь для морфологических исследований отбирали от пяти животных каждой группы на 35-е и 70-е сутки, в которые определяли содержание эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобин, гематокритную величину. Убой проводили после последнего взвешивания, отбирая образцы органов и тканей для гистологического и морфологического исследований.

В результате проведенных исследований отмечено, что длительное применение энергена в различных дозах (в 3 и 5 раз превышающих рекомендуемую терапевтическую дозу) не оказывает вредного влияния на организм белых крыс. Предлагаемый корм они поедали охотно. Состояние животных в группах на протяжении всего периода опыта оставалось удовлетворительным. Аппетит, дыхание, поведенческие реакции, рефлексы не претерпели изменений. Расстройств пищеварения от применения энергена не зарегистрировано.

При анализе динамики массы тела обнаружили увеличение массы тела крыс всех опытных групп, причем наибольший эффект наблюдали при введении энергена в дозе 90 мг/кг массы тела. Так, прирост массы тела на 1 животное в первой группе составил 114,8%, во второй – 133,3 и в третьей – 118,8% по отношению к контролю, а дополнительный привес опытных групп за весь период кормления составил соответственно 120, 270 и 153 г к контролю.

Морфологические исследования крови не выявили токсического влияния, показатели мало отличались от контроля и оставались в пределах физиологической нормы.

В крови крыс опытных групп наблюдалось незначительное увеличение содержания гемоглобина, что, вероятно, можно отнести на счет активизации обменных процессов, протекающих в организме. Кроме того, в лейкоформуле крыс опытной группы на 35-е сутки эксперимента наблюдали незначительный лимфоцитоз, который, однако, в сочетании с обычным содержанием эритроцитов в крови животных можно рассматривать как благоприятный фактор, указывающий на повышение деятельности органов гемопоэза.

По окончании эксперимента белых крыс взвешивали, убивали методом декапитации, проводили патолого-анатомическое исследование и взвешивание внутренних органов.

Из каждой группы животных, участвующих в эксперименте по изучению влияния энергена на органы и системы при длительном скармливании, было убито и исследовано по пять животных.

При проведении патоморфологических исследований у крыс как опытных, так и контрольной групп макроскопически не было выявлено отклонений и каких-либо особенностей в строении органов и тканей.

Расположение внутренних органов было анатомически правильным. Серозные оболочки полостей имели ярко-розовый цвет, гладкую и блестящую поверхность.

Легкие не увеличены, симметрично расположены, ткань розового цвета. Плевра имела гладкую поверхность.

Сердце не увеличено, перикард и эпикард гладкие, блестящие. Миокард умеренно плотный, ярко-красного цвета.

Печень – с заостренными краями и гладкой капсулой, не увеличена. С поверхности и на разрезе темно-вишневого цвета с хорошо выраженным рисунком, соскоб не обильный.

Желчный пузырь заполнен желчью желто-зеленого цвета, жидкой консистенции. Проходимость желчных протоков сохранена.

Селезенка не увеличена, вытянутой формы, с острыми краями и гладкой капсулой, имеющей с поверхности сероватый цвет. На разрезе структура органа хорошо выражена, соскоб с пульпы не обильный.

Серозная оболочка желудка и кишечника имела гладкую блестящую поверхность серого цвета. Слизистая оболочка желудка, тонкого и толстого отделов кишечника на всем протяжении имела ярко-розовый цвет, гладкую блестящую поверхность.

Почки не увеличены, симметричные, темно-вишневого цвета. Фиброзная капсула почек легко снимается. Корковое и мозговое вещество на разрезе хорошо различимы, слизистая лоханки светло-розового цвета, гладкая, блестящая.

Таким образом, введение крысам в корм энергена в указанных дозах не вызывало каких-либо существенных изменений в структуре и расположении внутренних органов. У убитых животных опытных и контрольных групп была определена абсолютная и относительная масса внутренних органов.

Установлено, что соотношение масс внутренних органов к массе тела как в опытных, так и в контрольных группах достоверно не отличается. Это свидетельствует об отсутствии дополнительной нагрузки на органы, а также токсического воздействия изучаемого препарата и о его хорошей переносимости организмом крыс.

Таким образом, в опытах по изучению хронической токсичности было показано, что при длительном введении энергена в дозах, в несколько раз превышающих терапевтическую, вредного действия препарата не наблюдалось, гистологическая структура и функции жизненно важных систем оставались без изменений.

На основании результатов исследования нам не удалось определить среднесмертельную дозу (LD₅₀), так как при всех испытуемых дозах гибель подопытных животных не наступила. Следовательно, препарат не обладает кумуляцией, что подтверждается и данными оценки хронической токсичности энергена. Учитывая, что введение энергена переносится животными без видимых последствий в дозе 6000 мг/кг массы тела, он классифицируется как малотоксичный и по ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества» относится к 4-му классу опасности (незначительно опасные вещества).