- •А.С. Спирин
- •Участие белкового фактора элонгации в связывании аминоацил-тРНК
- •Рабочий элонгационный цикл транслирующей рибосомы
- •Конформационный переход белка EF-Tu при связывании ГТФ: взаимный поворот, слипание и фиксация доменов
- •Фактор элонгации EF-Tu (EF1A):
- •Тройственный комплекс Aa-tRNA • EF-Tu• GTP
- •Связывание тройственного комплекса Aa-tRNA • EF-Tu• GTP с рибосомой: А/Т позиция Аа-тРНК
- •EF-Tu-промотируемое связывание аминоацил-тРНК с А-участком рибосомы
- •Белок EF-Tu (EF1) как молекулярная машина челночного типа
- •Рабочий цикл транслирующей рибосомы как молекулярной машины конвейерного типа
- •Рабочий цикл транслирующей рибосомы
- •Транслирующая рибосома осуществляет два сопряженных процесса молекулярного транспорта:
- •Рибосома как молекулярная машина:
- •ОБЩИЕ ПРИНЦИПЫ ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ РИБОСОМ
- •Крупно-блочная подвижность рибосомы и концепция смыкания-размыкания
- •КОНЦЕПЦИЯ СМЫКАНИЯ – РАЗМЫКАНИЯ СТРУКТУРНЫХ БЛОКОВ
- •Фактор элонгации EF-Tu (EF1A):
- •Рабочий цикл сканирующего 43S рибосомного комплекса как молекулярной машины конвейерного типа
- •Смыкание – размыкание аминоацил-тРНК-связывающего участка рибосомной 30S субъединицы
- •Model of translating ribosome based on mutual mobility of ribosomal subunits
- •Поворот малой рибосомной субъединицы относительно большой, сопровождающий размыкание межсубъединичного канала
- •Демонстрация попеременного смыкания-размыкания транслирующей рибосомы (данные smFRET)
- •Подвижные блоки и наблюдаемые подвижки в рибосоме:
- •Основные подвижные блоки рибосомы:
- •ЧТО ДВИЖЕТ МАКРОМОЛЕКУЛАМИ И ИХ ЧАСТЯМИ?
- •Рабочий цикл транслирующей рибосомы в отсутствие факторов элонгации?
- •Катализ кодон-зависимого связывания аминоацил-тРНК и транслокации факторами элонгации EF-Tu и EF-G с ГТФ
- •Кодон-зависимое связывание аминоацил-тРНК без фактора элонгации EF-Tu с ГТФ
- •Кодон-зависимое связывание аминоацил-тРНК
- •Рабочий (элонгационный) цикл бесфакторной трансляции
- •Рабочий (элонгационный) цикл бесфакторной трансляции:
- •ТРАНСПЕПТИДАЦИЯ
- •ТРАНСПЕПТИДАЦИЯ
- •ТРАНСПЕПТИДАЦИЯ
- •Транспептидация –
- •Транспептидация и миграция между двумя неустойчивыми состояниями
- •Транслокация в терминах механизма «храповика с собачкой»
- •Рабочий (элонгационный) цикл бесфакторной трансляции: translocation of tRNAs shift of mRNA
- •Plausible scenario of the factor-free elongation cycle
- •Последовательность событий в ходе EF-G-зависимой транслокации
- •EF-Tu-промотируемое связывание аминоацил-тРНК c А-участком рибосомы: последовательность событий
- •Конец лекции
- •Рибосома как молекулярная машина
- •Конформационная подвижность рибосомы – это тепловые флуктуации структурных модулей рибосомы.
- •Транслирующая рибосома как молекулярная машина - основные принципы:
- •Рабочий (элонгационный) цикл бесфакторной трансляции
- •Рабочий (элонгационный) цикл бесфакторной трансляции
- •EF-Tu-промотируемое связывание аминоацил-тРНК c А-участком рибосомы: последовательность событий
- •Plausible scenario of the factor-free elongation cycle
- •Scenario of the factor-free elongation cycle in terms of locking-unlocking concept
- •Spontaneous translocation (IIIb → IV transition)
- •Рабочий (элонгационный) цикл бесфакторной трансляции
- •Последовательность событий в ходе EF-G-зависимой транслокации
- •ЧТО ДВИЖЕТ МАКРОМОЛЕКУЛАМИ И ИХ ЧАСТЯМИ?
- •Принципы работы молекулярных машин
- •МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МАШИНЫ
- •Молекулярные машины конвейерного типа
- •СТРУКТУРНЫЕ ОСОБЕННОСТИ МОЛЕКУЛЯРНЫХ МАШИН (по сравнению с механическими макро-машинами)
- •ОСОБЕННОСТИ PАБОТЫ МОЛЕКУЛЯРНЫХ МАШИН
- •Главный вопрос:
- •Как в условиях интенсивных беспорядочных толчков обеспечивается упорядоченная работа безынерционной машины, лишенной точной
- •Как в условиях интенсивных беспорядочных толчков обеспечивается упорядоченная работа безинерционной машины, лишенной точной
- •Как в условиях интенсивных беспорядочных толчков обеспечивается упорядоченная работа безинерционной машины, лишенной точной
- •Фейнмановский храповик с собачкой
- •Что требуется для того, чтобы диффузионное блуждание вдоль направляющей нити
- •A car bombarded by giant hailstones,
- •DRIVING WITHOUT ENGINE
- •Молекулярный «храповик с собачкой» (molecular ratchet-and-pawl mechanism)
- •Принципы работы молекулярных машин конвейерного типа
- •Молекулярный «храповик с собачкой» (molecular ratchet-and-pawl mechanism)
- •Транслокация в терминах энергетического пути реакции
- •Ректификация броуновского движения:
- •Принципы работы молекулярных машин конвейерного типа
- •Транслирующая рибосома как молекулярная машина конвейерного типа
- •Расположение субстратных молекул аминоацил-тРНК (А/а) и пептидил-тРНК (Р/р)
- •Конец лекции
- •Резервные слайды
- •Feynman’s ratchet-and-pawl mechanism
- •Что определяет направленность перемещения макромолекулярного комплекса или
- •СТРУКТУРНЫЕ ОСОБЕННОСТИ МОЛЕКУЛЯРНЫХ МАШИН (по сравнению с механическими макро-машинами)
- •Тепловое броуновское движение является той «движущей силой», которая побуждает макромолекулярный комплекс
- •Что является «движущей силой» (“motive force”), которая побуждает макромолекулярный комплекс или его структурные
- •Участие белкового фактора элонгации в связывании аминоацил-тРНК
- •Последовательность событий в ходе EF-G-зависимой транслокации
- •Model of translating ribosome based on mutual mobility of ribosomal subunits
А.С. Спирин
Молекулярная биология:
Лекция 7.
Фактор элонгации EF1 (EF-Tu) как молекулярная машина челночного типа.
Транслирующая рибосома как молекулярная машина конвейерного типа.
25 марта 2015 г.
Участие белкового фактора элонгации в связывании аминоацил-тРНК
Рабочий элонгационный цикл транслирующей рибосомы
Конформационный переход белка EF-Tu при связывании ГТФ: взаимный поворот, слипание и фиксация доменов (смыкание)
+ GTP
From red to blue = from N- to С-end
From M. Kjeldgaard, P. Nissen, S. Thirup and J. Nyborg (1993) The crystal structure of elongation factor EF-Tu from Thermus aquaticus in the GTP conformation. Structure 1: 35-50.
Фактор элонгации EF-Tu (EF1A):
Конформационный переход из разомкнутого (открытого) в сомкнутое (закрытое) состояние при связывании ГТФ
ГТФ
ГДФ
Тройственный комплекс Aa-tRNA • EF-Tu• GTP
tRNA
3 2
1
EF-Tu (EF1A)
Связывание тройственного комплекса Aa-tRNA • EF-Tu• GTP с рибосомой: А/Т позиция Аа-тРНК
30S
|
|
A P |
mRNA |
|
EF-Tu |
|
|
|
|
|
|
L7/L12 |
1 |
|
L1 |
|
|
||
|
|
|
L10
a p
50S
T.M. Schmeing, R.M. Voorhees, A.C. Kelley, Y.-G. Gao, F.V. Murphy, J.R. Weir and V. Ramakrishnan (2009) The crystal structure of the ribosome bound to EF-Tu and aminoacyl-tRNA. Science 326, 688-694. PDB code 2wrn, 2wro.
EF-Tu-промотируемое связывание аминоацил-тРНК с А-участком рибосомы
Aa-tRNA٠ |
EF-Tu٠GDP |
EF-Tu٠GTP |
Р/р |
А/Т, Р/р |
Pi |
А/a, Р/р |
|
Белок EF-Tu (EF1) как молекулярная машина челночного типа
|
Aa-tRNA |
EF-Tu٠GTP |
|
|
|
GDP |
|
٠ |
٠ |
GTP |
|
EF-Tu٠GDP |
|||
Aa-tRNA EF-Tu GTP |
Aa-tRNA٠EF-Tu٠GTP EF-Tu٠GDP
Р/р |
А/Т, Р/р |
Pi |
А/a, Р/р |
|