1.4. Патогенез.

На першому етапі вірус проникає через епідерміс або потрапляє на слизисту оболонку. Первинна реплікація вірусів відбувається, мабуть, в клітинах поперечносмугастих м'язів в місці інокуляції вірусу. Контакт вірусу з периферичною нервовою системою здійснюється в області нейром'язового і нейросухожильного веретена. Потім, можливо по аксоплазмі периферичного нерва, вірус поширюється до центральної нервової системи. Вірусемія, що розвивається, як показали експерименти, недостатньо, аби грати провідну роль в генезі природного захворювання. Після того, як вірус досяг центральної нервової системи, він починає реплікуватися в сірій речовині мозку, а потім поширюється еферентний уздовж вегетативних нервів в інші тканини - слинні залози, кору надниркових, нирки, легені, скелетні м'язи, шкіру і серце. Знаходження вірусу в слинних залозах обумовлює подальше поширення захворювання з інфікованою слиною. Дослідження у тварин показали, що вираженість імунної відповіді макроорганізму і особливості вірусного штаму також впливають на активність захворювання.

Нейропатологія сказу схожа із змінами, які викликають інші вірусні захворювання, що вражають центральну нервову систему, - гіперемія, хроматоліз різної міри вираженості, пікноз, ядер, нейронофагія, лімфоцитарна і плазмоклітинна інфільтрація преваскулярного простору; інфільтрація мікроглії і руйнування нервових клітин паренхіматозних областей. Патогномонічною ознакою сказу є поява телець Бабеша-Негрі [2].

2. Лабораторна діагностика

У типових випадках клінічна картина сказу тварин вельми характерна, і діагностика не викликає скрути, проте на практиці часто зустрічаються випадки атипового перебігу хвороби.

У лабораторній практиці сказ діагностують лише посмертно, по морфологічних, біологічних і іммунохімічним показникам: по виявленню в мозку загиблих тваринних тілець Бабеша-Негрі, специфічного антигена (метод флуоресціюючих антитіл) і інфекційного вірусу (метод біопроби на лабораторних тваринах). Серологічна діагностика інфекції доки не отримала широкого вживання і обмежується головним чином реакцією дифузійної преципітації. За останні роки з'явилися обнадійливі перспективи прижиттєвої діагностики сказу за допомогою іммунофлуоресцентного дослідження відбитків рогівки.

2.1. Морфологічні дослідження

Морфологічні дослідження сказу полягають в дослідженні головного мозку загиблих від сказу тварин. Патоморфологічні показники сказу включають:

1) реактивні зміни запального і дегенеративного характеру (картина розсіяного енцефаломієліту з поразкою оболонок, судин і речовини мозку)

2) наявність специфічних внутріклітинних включень - телець Бабеша-Негрі.

2.1.1. Взяття матеріалу

Трупи тварин розкривають з дотриманням запобіжних засобів: у гумових рукавичках, перевірених на цілісність, окулярах-консервах або масках на все обличчя з целофану або органічного скла. Черепну порожнину розкривають звичайним способом, але з дотриманням правил асептики. Мозок витягують прокип'яченим або прожареним на вогні інструментом і кладуть підставою на стерильний лоток. Щоб уникнути забруднення мозку спочатку стерильними ножицями беруть матеріал для біологічної проби - шматочок (0,5-1 см) з різних відділів: кора великих півкуль, мозочка, довгастого мозку і аммонового рогу. Для морфологічних досліджень використовують ділянку мозку в області аммонового рогу, а також мозочка, в клітинах якого тільця зустрічаються більш постійно. Аммонів ріг розташований в нижньому розі бічного шлуночку на медіальній стороні у вигляді дугоподібного піднесення і може бути виявлений двома способами:

Перший спосіб. Тупою стороною леза скальпеля, зануреною в центральну звивину великих півкуль, відсовують кору убік, до появи під нею аммонового рогу.

Другий спосіб. Скальпелем роблять хрестоподібний розріз, спочатку подовжній, уздовж зовнішнього краю центральної звивини, а потім поперечний, посередині півкулі головного мозку, товщу кори відшаровують і під нею виявляють аммоновий ріг. Якщо важко розібратися в структурі мозку, то у пошуках аммонового рогу потрібно орієнтуватися по судинному сплетенню.

З аммонового рогу і мозочка вирізують невеликі шматочки завтовшки 3- 4 см і поміщають їх у фіксуючу рідину. Для біологічної проби шматочки мозку поміщають в стерильну банку, що щільно закривається, з нерозве-деним нейтральним стерильним гліцерином або розведенням навпіл фізіологічним розчином, яку тримають в льоду. Окремо в пробірки без фіксатора беруть шматочки мозку для мазків і відбитків.

Фіксуючі рідини

Рідина Дюбоск-Бразиль-Буена: пікринова кислота - 1 г, 80° етиловий спирт - 150 мл, формалін - 60 мл, крижана оцтова кислота - 15 мл. Пікринову кислоту розчиняють в спирті, потім додають останні компоненти. Шматочки тканини опускають приблизно в десятиразовий об'єм фіксатора. Тривалість фіксації шматочка розміром 2X3 см - 2-3 діб; для дрібніших менше. Даний фіксатор тривало зберігається при кімнатній температурі і добре фіксує майже всі тканини тваринного походження. Основна перевага фіксуючої суміші - можливість тривалої витримки в ній тканин. Перед обробкою матеріалу для заливки в парафін з фіксованого об'єкту вирізують шматочки завтовшки 2-2,5 мм, які знову занурюють в рідину на 24 години і потім піддають загальноприйнятій проводці.

Сулемові фіксатори придатні для фіксації тонких об'єктів невеликих розмірів, оскільки вони повільно проникають в тканини. Для видалення з тканин кристалічних і аморфних осадів, утворених ртуттю, матеріал кілька разів обробляють спиртовим розчином йоду (60 мл 70° спирту, 1 мл 10%-ной йодної настойки і 10 мл розчину Люголя). Про повне видалення сулеми судять по припиненню знебарвлення йоду. Сліди йоду, присутність якого перешкоджає фарбуванню зрізів аніліновими фарбниками, видаляють проводкою через 0,25%-вий розчин гіпосульфіту (15-30 хвилин).

Заливку і приготування парафінових зрізів проводять за наступною схемою:

а) ущільнення і обезводнення в спиртах висхідної концентрації: 70° -4 години, 96'- 18 годин і 100° - двічі (1-2 години);

б) просочення парафіну розчинниками (ксилолом або іншими) - 3-4 години;

в) просочення парафіном протягом декількох годинників при 56°;

г) заливка шматочків і приготування зрізів товщиною 5 мк [5].