Факторы, влияющие на точность анализа

1. Ослабленная или загрязненная тест-культура.

2. Несоблюдение стерильности при приготовлении и перевивке тест- культуры.

3. Несоблюдение техники выполнения анализа.

Применение индикатора резазурина. Этим методом можно обнаружить добавленные в молоко перекись водорода в дозе более 0,01 %, формалин в количестве 0,005 %; пенициллин - более 0,01 МЕ/мл. Сущность метода заключается в том, что микроорганизмы Streptococcus thermophilus, добавленные к молоку, развиваясь, выделяют ферменты, восстанавливающие резазурин. Если в молоке нет ингибирующих веществ, при внесении резазурина цвет окрашенного им молока сохраняется. При наличии ингибирующих веществ добавленный к молоку резазурин восстанавливается, и оно будет иметь белый цвет.

Приготовление 0,05 %-ного водного раствора резазурина. В 200 мл прокипяченной и охлажденной дистиллированной воды растворить 100 мг резазурина (ГОСТ 9225-84). Для приготовления рабочего раствора надо взять 10 мл этого раствора и добавить 25 мл дистиллированной воды.

Приготовление коллекционной тест-культуры Streptococcus thermophilus. Одну петлю тест-культуры внести в пробирку с 10 мл стерильного обезжиренного молока, затем выдержать в термостате при температуре 42-43⁰С в течение 16-18 ч. Культуру хранят при 6-8⁰С до 3 мес, перевивая через 10-14 сут.

Приготовление рабочей тест-культуры. К 10 мл стерильного обезжиренного молока, находящегося в пробирке, добавить одну петлю коллекционной тест-культуры, затем поместить в термостат на 16-18 ч при 42-43⁰С. Для анализа используется одно – или двухсуточная культура, которая должна храниться при температуре 6-8⁰С.

Техника определения:

1. Пипеткой отмерить в пробирку 10 мл исследуемого молока. Пробирку закрыть стерильной резиновой пробкой. Одновременно провести контрольный анализ с восстановленным препаратом СКИВ. Приготовление препарата: вскрыть флакон с сухим препаратом, внести 10 мл дистиллированной воды температурой 50 ± 10⁰С, закрыть пробкой и встряхивать до полного растворения, затем перенести в пробирку.

2. Пробирки с препаратом и исследуемым молоком нагреть в водяной бане до 85-90⁰С, затем при данной температуре выдержать 10 мин и охладить до 43-45⁰С.

3. В охлажденное в пробирках молоко и препарат стерильной петлей внести по 0,3 мл рабочей тест-культуры, тщательно перемешать, переворачивая трехкратно пробирки, закрытые пробкой.

4. Пробирки выдержать 2 ч при температуре 42-43⁰С в редуктазнике или на водяной бане. В каждую из пробирок внести по 1 мл 0,05 %-ного водного раствора резазурина (его температура не ниже 18-20⁰С), тщательно перемешать и далее пробирки выдержать в течение 15 мин при температуре 42-43⁰С в редуктазнике или на водяной бане.

5. Осмотреть пробирки. Если содержимое исследуемой пробы окрашено в сине-стальной, сине-фиолетовый или фиолетовый цвет, то это указывает на присутствие в молоке ингибирующих веществ. Если содержимое исследуемой и контрольной пробирок будет иметь розовый или белый цвет, в молоке ингибирующих веществ нет.