1.5. Правила определения активности ферментов

в сыворотке крови

Важное значение для воспроизводимости и точности результатов имеет стандартизация и оптимизация условий тестирования, т.е. при проведении исследований необходимо строго соблюдать одни и те же условия. Например, создание оптимальных рН и температуры для проведения ферментативной реакции, использование буфера точной концентрации и вида.

Для того, чтобы скорость реакции зависела только от концентрации фермента, при постановке ферментативной реакции необходимо определять активность фермента в самом начале реакции в условиях достаточного насыщения его субстратом (субстрат должен быть в избытке). В этом случае концентрация продуктов реакции недостаточна для того, чтобы началась обратная реакция.

При выборе материала исследования необходимо учитывать также наличие исследуемых ферментов в клетках крови и возможность их освобождения при гемолизе, что исказит результаты исследования.

Таблица 8

Уменьшение активности ферментов в сыворотке при хранении

(Тимин О.А. с соавт., 2002)

Ферменты	Температура хранения
	20-25 С	2-8 С
АЛТ	3 дня – 17%	3 дня – 10%
АСТ	3 дня - 10%	3 дня – 8%
-амилаза	5 дней – без снижения	5 дней – без снижения
Сывороточная Холинэстераза	7 дней – без снижения	7 дней – без снижения
Креатинкиназа	24 часа – 2%	7 дней – 2%
ЛДГ	7 дней – 5%	3 дня – 8%
Щелочная фосфатаза	7 дней – 10%	7 дней – без снижения
Липаза	24 часа	5 дней – без снижения

Для большинства ферментов не имеет значения, определяется ли их активность в плазме или сыворотке крови, но это имеет значение для тех ферментов, которые содержатся в тромбоцитах (кислая фосфатаза, лактатдегидрогеназа), так как при активации свёртывании крови эти ферменты будут освобождаться из тромбоцитов и ферментативная активность в сыворотке крови будет выше, чем в плазме.

При разведении биологической жидкости активность фермента изменяется не всегда пропорционально, вследствие нарушения естественной среды фермента и соотношения активаторов и ингибиторов.

Активность фермента следует определять в свежем биологическом материале, так при хранении активность многих ферментов снижается (табл.8).

При постановке ферментативных проб необходимо также помнить, что многие лекарственные вещества могут оказывать влияние на активность ферментов. Например, результаты исследования активности ЛДГ завышают кодеин, клофибрат. Эритромицин, метилдофа, индометацин завышают результаты исследования АЛТ. Применение изониазида, эритромицина, тетрациклина, парацетамола завышают показатели активности АСТ. Аспирин занижает результаты исследования активности аминотрансфераз.

1.6. Биохимические констелляции

(спектры биохимических тестов)

Определение активности ферментов в биологических жидкостях в настоящее время является обязательным компонентом диагностики заболеваний органов и тканей. Одним из способов рационализации применения лабораторных исследований и повышения специфичности энзимодиагностики является использование констелляций, или спектров (наборов) биохимических тестов. Назначение исследований является прерогативой клинициста.