- •Асептика и антисептика. Стерилизация и дезинфекция. Определение понятий, методы, область применения.
- •Влияние и механизм действия физических факторов на жизнедеятельность бактерий: высокие температуры, высушивание, ультразвук, уф-лучи, ионизирующее излучение. Практическое применение.
- •Газовая стерилизация, область применения.
- •Механические методы стерилизации, область применения.
- •1) Промывание
- •4) Хирургическая обработка раны – иссечение раны.
- •Пастеризация, тиндализация. Режим работы, область применения.
- •Дезинфектанты, основные группы дезинфектантов, механизм действия, область применения.
- •Антисептики, требования, предъявляемые к ним, основные группы, механизм их действия, область применения, определение чувствительности к ним микробов.
- •Бактериофаги, их природа, строение, формы существования (вегетативный фаг, зрелый фаг, профаг).
- •Классификация фагов по характеру взаимодействия с бактериальной клеткой (умеренные и вирулентные). Лизогения и лизогенная конверсия.
- •Методы культивирования и титрования бактериофагов (по Грациа и Аппельману).
- •Лечебно-профилактическое и диагностическое использование бактериофагов в медицине.
- •Понятие о генотипе и фенотипе. Генетические детерминанты бактерий (нуклеоид, плазмиды, транспозоны, Is-последовательности), особенности строения, функции.
- •Фенотипическая и генотипическая изменчивости, их суть, отличительные черты.
- •Мутации, их виды. Мутагены, основные группы. Репарации, их разновидности, биологическая значимость.
- •Генетические рекомбинации (трансформация, трансдукция, конъюгация), их ме6ханизмы, биологическая значимость.
- •Плазмиды, их основные виды, характеристика.
- •Использование бактериоциногении и бактериоциночувствительности культур как эпидемиологического маркёра для установления идентичности культур различного происхождения.
- •Микробный антагонизм, его эволюционная значимость.
- •Понятие «антибиотик», основные источники получения антибиотиков, природные, полусинтетические и синтетические антибиотики.
- •Классификация антибиотиков по химическому составу, механизму действия, спектру действия на микроорганизмы.
- •Методы определения чувствительности микробов к антибиотикам (диско-диффузионный метод, метод серийных разведений). Определение мпк и расчёт терапевтической концентрации антибиотика.
- •Резистентность микробов к антибиотикам, генетические и биохимические механизмы резистентности, методы их выявления.
- •Условия селекции устойчивых штаммов и формирования полирезистентных микробных популяций.
- •Рациональная антибиотикотерапия. Осложнения при антибиотикотерапии.
Методы культивирования и титрования бактериофагов (по Грациа и Аппельману).
Культивируют бактериофаги в жидких и плотных питательных средах, в которые засеяны соответствующие культуры бактерий. Существуют 2 метода титрования бактериофагов: метод по Аппельману (в жидкой питательной среде) и по Грациа (на плотной среде).
По Аппельману, титром в жидкой питательной среде называется то максимальное разведение, которое даёт полный лизис бактерий.
По Грациа, титр – количество активных фаговых частиц в пересчёте на 1 мл неразведённого фага. Количество активных фаговых частиц в 1 мл = количество зон лизиса * величина обратного разведения. Метод по Грациа более точный.
Для приготовления биопрепаратов из бактериофагов используют в основном три источника: лизогенные культуры бактерий, фекалии выздоравливающих больных, сточные воды. Для выделения дизентерийного бактериофага в сочных водах сначала проводят его индикацию методом фаговой дорожки. На чашку Петри с МПА засевают газоном культуру дизентерийных бактерий, затем на поверхность посева закапывают фильтрат сточной воды стекающей каплей. Посевы инкубируют в термостате в течение 18 часов. При положительном ответе проводят определение исходного титра бактериофага по Аппельману. Для титрования фага готовят его десятикратные разведения, в которые добавляют эталонную культуру дизентерийных бактерий (2 млрд. м. т. в 1 мл). Пробирки помещают в термостат на сутки. Учитывают исходный титр бактериофага. По Грациа, готовят десятикратные разведения фага, которые смешивают со стандартной культурой дизентерийных бактерий в объёме 0,1 мл каждое разведение бактериофага и расплавленным и слегка остуженным агаром. Полученную смесь выливают на чашку Петри с МПА вторым агаровым слоем и после застывания смеси инкубируют в термостате 24 часа. Подсчитывают количество «негативных колоний» бактериофага, умножают на степень разведения фага и объём из расчёта на 1 мл. Это и будет титр бактериофага по Грациа.
Лечебно-профилактическое и диагностическое использование бактериофагов в медицине.
Цели: лечебно-профилактическая или диагностическая.
С лечебно-профилактической целью применяют только вирулентные фаги. Это могут быть стафилококковый, брюшнотифозный, дизентерийный, синегнойный, стрептококковый, эшерихиозный бактериофаг или комбинированные фаги. Обязательна проверка чувствительности.
«+» применения: можно назначать на фоне лечения антибиотиками (5 – 7 дней энтерально; орошение на раневую поверхность).
Диагностические препараты бактериофагов применяются с целью (3 «И»):
индикация
идентификация
источник инфекции
Индикация – точная диагностика. Быстро, недорого по сравнению с другими методами. Пример: холерный вибрион имеет 2 биовара – для их индикации используют классический и эльторовский бактериофаги.
Идентификация. Пример: исследование сточных вод при подозрении на наличие дизентерийной палочки с помощью дизентерийного фага.
Определение источника инфекции – фаготипирование. Пример: вспышка стафилококковой инфекции в больнице. Нужно определить источник инфекции (медперсонал, больные). Можно использовать генетические маркёры и типовые бактериофаги, которые взаимодействуют с определёнными сероварами у бактерий внутри вида.