22. Методы определения чувствительности микробов к антибиотикам (диско-диффузионный метод, метод серийных разведений). Определение мпк и расчёт терапевтической концентрации антибиотика.

Метод бумажных дисков. Если зона задержки роста микроба вокруг диска диаметром не менее 1 см, то микроб чувствителен к данному антибиотику. Метод качественен, удобен, нетрудоёмкий, можно исследовать действие 5 – 6 антибиотиков (до 12) на 1 микроб, но нельзя определить концентрацию антибиотика.

Метод серийных разведений. Определение минимальной ингибирующей концентрации антибиотика и терапевтической дозы. Приготавливают серийные разведения антибиотика в пробирках с МПБ. В каждую пробирку вносят определённое количество стафилококка. После суточной инкубации в термостате определяют наличие или отсутствие роста бактерий по степени прозрачности бульона. Определяют минимально подавляющую концентрацию (МПК) и рассчитывают терапевтическую дозу. МПК – наименьшая концентрация антибиотика, в присутствии которой угнетается видимый рост микробов. Терапевтическая доза в 2 – 4 раза выше МПК.

23. Резистентность микробов к антибиотикам, генетические и биохимические механизмы резистентности, методы их выявления.

Антибиотикорезистентность – проблема антибиотикотерапии (синегнойная палочка образует «госпитальные штаммы»).

Антибиотикорезистентность:

1. Первичная (природная) устойчивость. Пенициллины не действуют на грамотрицательные бактерии.

2. Вторичная (приобретённая)

1. хромосомная

2. внехромосомная

Хромосомная антибиотикорезистентность возникает, когда в основной хромосоме происходит мутация.

Внехромосомная устойчивость обеспечивается плазмидами. R-фактор – плазмида, обладающая резистентностью к многим лекарствам. Плазмида R имеет несколько генов устойчивости к нескольким антибиотикам. Такие плазмиды могут передаваться от клетки к клетке, могут распространяться как инфекция в микробной популяции. Таким образом, формируется штамм микробов с множественной резистентностью к антибиотикам. Этот механизм формирования резистентности встречается чаще.

Химические механизмы.

1. Выработка ферментов, разрушающих антибиотики. β-лактамазы – ферменты, разрушающие β-лактамные антибиотики.

2. Изменение поверхностных рецепторов микробной клетки и изменение проницаемости клеточной стенки для антибиотиков. Как следствие, антибиотик не проникает в микробную клетку.

3. Изменение скорости выведения из клетки.

4. Изменение структур мишеней. Изменение структуры фермента или появление обходного варианта метаболизма.

Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам служат для выявления антибиотикорезистентных штаммов.

24. Условия селекции устойчивых штаммов и формирования полирезистентных микробных популяций.

Селекция устойчивых штаммов происходит в больницах при несоблюдении рациональной антибиотикотерапии (синегнойная палочка образует «госпитальные штаммы»).

25. Рациональная антибиотикотерапия. Осложнения при антибиотикотерапии.

Для предупреждения развития резистентности бактерий к антибиотикам необходима рациональная антибиотикотерапия.

1. Перед назначением антибиотиков обязательно бактериологическое исследование, выделение возбудителя, определение чувствительности возбудителя к антибиотикам.

2. Назначать антибиотик, к которому более чувствительна микрофлора.

3. Менее токсичный антибиотик.

4. Доза, достаточная для получения терапевтического эффекта. Нельзя назначать малыми дозами, так как погибают более чувствительные, а резистентные микроорганизмы сохраняются, происходит селекция резистентных микробов и образование резистентного штамма.

5. Нельзя лечиться бессистемно, т.к. не будет достаточной концентрации антибиотика.

6. Комбинирование антибиотиков. Антибиотики-синергисты – усиливают действие друг друга.

7. Замена антибиотика через 5 – 7 дней на другой.

Для получения полусинтетических и синтетических антибиотиков используют новые методики. Резистентность к ним развивается медленнее.

Недопустимо использовать антибиотики для консервирования продуктов и кормления животных.