Менингококки
Основой для приготовления сред могут быть бульоны на основе гидролизата мяса по Хоттингеру, «эритрит-агар», АГВ, сухой питательный агар специального назначения или «аминопептид для микробов питательных сред» (жидкий).
При первом выделении клеткам менингококкам свойственен полиморфизм - разная величина и интенсивность окрашивания клеток. Колонии имеют маслянистую консистенцию, легко снимаются петлей со среды, не тянутся 0,1-3 мм. Некоторые штаммы, выделенные из СМЖ, могут слабо ферментировать глюкозу или мальтозу или оба углевода
Непатогенные нейссерии способны при выращивании на сывороточном агаре с 5% сахарозы образовывать крахмало-подобное вещество (полисахарид), выявляемое с помощью водного раствора Люголя, в виде появления бурого окрашивания культуры.
С/г А, В, С, Х, У, Z, 29Е, 135W.
Проведение серологического группирования менингококков является обязательным для практических лабораторий.
Бактериологическое исследование спинномозговой жидкости
I день исследования.
СМЖ берут 2-5 мл сразу при поступлении в стационар с соблюдением правил асептики персоналом в масках. В стерильную центрифужную или агглютинационную пробирку.
В лаборатории стерильной пастеровской пипеткой со дна пробирки берут 0,3-0,5 мл материала и по 2-3 капли засевают на поверхность 2 чашек Петри с подогретой питательной средой, растирая шпателем. Одна чашка содержит «шоколадный» агар, вторая - сывороточный. Посевы ставят в термостат при 37оС в условия повышенного содержания СО2 и влажности.
СМЖ, оставшуюся в пробирке, используют для посева на среду «обогащения» (полужидкий агар) и одновременно для реакции встречного иммуноэлектрофореза.
Оставшийся в пипетке материал используют для приготовления мазков.
H. influenzae – мелкие полиморфные грам- палочки и нити с еле заметной капсулой.
Капсула пневмококков остается неокрашенной и заметна на окрашенном фоне.
Результаты бактериоскопии немедленно сообщают лечащему врачу в виде «предварительного ответа»
II день исследования.
Просмотр чашек ведут визуально и с помощью бинокулярного стереоскопического микроскопа, лупы МБС. Во внимание принимают все колонии. При отсутствии роста чашки инкубируют еще 1 сутки. Мазки, биохимические тесты-оксидазу, каталазу, уреазу. Гемофилам присущ резкий специфический («мышиный») запах. Менингококки не меняют цвет среды.
На основании микроскопии и результатов первичных биологических тестов возможна выдача предварительного ответа. гр- кокки относят к роду Neisseria.
На Сыв.А. Н.influenzae не растет. d колоний 0,2-2,0 мм, плоские, серые, легко снимаются со среды.
Str.pneumoniae, Str. группы В, зеленящие, энтерококки могут также вызывать менингит.
Если имеется обильный рост одинаковых колоний, то допустим отсев на дифференциально-диагностические среды, изучение культуры по ряду признаков и антибиотикочувствительность (на АГВ с 20% сыворотки), Н. influenzae и пневмококки - с добавлением крови.
Колонии, подозрительные на менингококки, отсевают на скошенный сывороточный агар или сектор в чашке, на бессывороточный агар и помещают в термостат при 37оС.
Колонии, подозрительные на пневмококки и др. стрептококки, отсевают на 2 сектора Кр.А с 5% крови для последующего определения чувствительности к желчи и постановки тестов на чувствительность.
Если выросли 1-2 колонии, отсев на чашку с сывороточным или шок. аг. для накопления на 1 сутки.
При менингитах изредка выделяются Е coli, Serratia marcescens,Ps. aeruginosa, Acinetobacter calсoaceticum, Listeria monocytogenes, различные стрептококки, стафилококки (золотистый и эпидермальный), грибы рода Candida.
L. monocytogenes подв+ при комнатной температуре, мальтоза+, глюкоза+, дульцит-, маннит-, сорбит-, арабиноза-. Cахароза и глицерин замедленно. Краевая зона гемолиза на агаре с 5% бараньей крови слоем 3 мм.
Дрожжи на Сабуро или МПА с 100 МЕ/мл пенициллина или стрептомицина.
При “-“ результатах высев со среды «обогащения» повторяют через 1-2 дня в течение 7 дней инкубации в термостате.
Диск из фильтровальной бумаги с 20% раствором желчи на физ. растворе накладывают на 1 из секторов и в 37оС на 1-2 часа - лизируются на 1-2 мм.