4.5. Реакция на аргинин (Сакагучи)
Ход работы
Берут пять пробирок:
в первую наливают 10 капель раствора яичного белка,
во вторую – 10 капель 0,01%-ного раствора аргинина,
в третью – 10 капель раствора желатина,
в четвертую – 10 капель растительного альбумина,
в пятую – 10 капель раствора казеина.
Во все пробирки добавляют по 10 капель 10%-ного раствора NaOH и по несколько капель 0,2%-ного спиртового раствора α-нафтола. Хорошо перемешивают и прибавляют по 5 капель гипобромида натрия (NaBrO). Опять быстро перемешивают и (немедленно!) добавляют 8–10 капель 40%-ного раствора мочевины для стабилизации быстроразвивающегося розово-красного окрашивания.
Наблюдают за изменением окраски в каждой из пробирок и отмечают, какой цвет и почему появился в каждой из них. Делают вывод, какие из белков – содержат, а какие – не содержат аминокислоту аргинин.
4.6. Реакция на аминокислоты, содержащие серу
4.6.1. Реакция Фоля
Ход работы
Берут пять пробирок:
в первую наливают 5 капель раствора яичного белка,
во вторую – 5 капель 0,02%-ного раствора цистеина,
в третью – 5 капель раствора желатина,
в четвертую – 5 капель растительного альбумина,
в пятую – 5 капель раствора казеина.
В каждую пробирку добавляют по 5 капель 30%-ного раствора NaОН и по 1 капле 5%-ного раствора ацетата свинца. Интенсивно кипятят и дают постоять 1–2 мин.
Наблюдают за изменением окраски в каждой из пробирок и отмечают, какой цвет и почему появился в каждой из них. Делают вывод, в состав каких белков входят серосодержащие аминокислоты.
4.6.2. Нитропруссидная реакция
Ход работы
Берут пять пробирок:
в первую наливают 5 капель раствора яичного белка,
во вторую – 5 капель 0,02%-ного раствора цистеина,
в третью – 5 капель раствора желатина,
в четвертую – 5 капель растительного альбумина,
в пятую – 5 капель раствора казеина.
В каждую пробирку добавляют 5 капель 20%-ного раствора щелочи, интенсивно кипятят, охлаждают и приливают 3 капли свежеприготовленного 5%-ного раствора нитропруссида натрия.
Наблюдают за изменением окраски в каждой из пробирок и отмечают, какой цвет и почему появился в каждой из них. Делают вывод, в состав каких белков входят серосодержащие аминокислоты. И в первом, и во втором опыте интенсивность окрашивания зависит от количества аминокислот, содержащих серу, и от количества белка в растворе.
5. СОСТАВЛЕНИЕ ОТЧЕТА
Отчет составляется с указанием цели, задания, включает уравнения протекания реакций, экспериментальные данные и выводы. Выводы содержат заключение об аминокислотном составе белков и о возможности их обнаружения цветными реакциями.
6. ВОПРОСЫ ДЛЯ КОНТРОЛЯ
6.1. Какие вещества называются белками?
6.2. Чем обусловлены цветные реакции на белки?
6.3. Что вы можете сказать об аминокислотном составе белков, если с раствором одного из них реакции Миллона и ксантопротеиновая положительны, а с раствором другого отрицательны?
6.4. Как с помощью цветных реакций обнаружить в белке аргинин?
6.5. Как обнаружить в белке цистеин?
6.6. Как обнаружить в белке тирозин?