Уо « Минский государственный медицинский колледж» Методическая разработка практического занятия для учащихся

Специальности «Медико-диагностическое дело» по дисциплине «Микробиология микробиологическими исследованиями»

Практическая работа № 73

Тема: « Комплексное исследование на дисбактериоз кишечника»

Подготовила Якимова Л.М

Минск

Практическая работа

Тема: « Комплексное исследование на дисбактериоз кишечника»

Цель занятия: отработать методику исследования испражнений на дисбактериоз кишечника.

Самостоятельная работа:

1. Приготовление 10-кратных разведений испражнений.

2. Посевы полученных разведений на плотные питательные среды: Эндо, Плоскирёва, Симмонса, Сабуро, ЖСА, КА.

3. Посевы полученных разведений на пробирочные среды: скошенный МПА, среды Блаурок и Вильсона – Блера, обезжиренное молоко.

4. Приготовление мазков с выросших колоний, окраска их по Граму, микроскопия.

Прямыми показаниями к исследованию на дисбактериоз кишечника являются:

- затянувшийся период реконвалесценции после дизентерии или других острых кишечных заболеваний;

- длительно протекающие кишечные расстройства (дисфункции) при которых не удается выделить патогенные микроорганизмы;

- дисфункция кишечника у лиц, длительно подвергающихся воздействию некоторых производственных вредностей (ионизирующие излучения, токсичные химические соединения и др.), а также при интенсивной антибиотико- или иммуносупрессивной терапии;

- обострения хронических заболеваний желудочно-кишечного тракта (колиты, холециститы, язвенная болезнь и др.);

- наличие системной воспалительной реакции и бактериемии без выраженного очага воспаления;

- наличие трудно поддающихся лечению гнойно-воспалительных очагов и вялотекущих инфекционных процессов;

- подготовка к оперативному вмешательству на органах пищеварения;

- дисфункция кишечника у новорожденных;

. Подготовка материала на исследование

Все обследуемые за 1-3 дня до взятия пробы должны соблюдать диету, исключающую продукты, усиливающие брожение в кишечнике, а также алкоголь и антимикробные лекарственные препараты. От момента последнего принятия пищи до взятия материала должно пройти не менее 8-10 часов. Материалом служит кал после естественной дефекации, который собирают в стерильный герметичный контейнер с широким горлышком и плотно завинчивающейся крышкой без консерванта. Если использую судно, его предварительно дезинфицируют, а после дезинфекции ополаскивают стерильной (или просто кипяченой) водой, чтобы удалить следы дезинфекции другими химическими веществами. Материал берут из средней порции кала стеклянной или деревянной палочкой в количестве не менее 1г и помещают в специальную одноразовую посуду или флаконы многократного применения емкостью 10-15 мл, которые стерилизуют автоклавированием, сухим жаром или газовой стерилизацией. Материал необходимо доставить в лабораторию не позднее, чем через 2 часа после взятия пробы (интервал между взятием пробы и началом посева не должен превышать 4 часа). При необходимости материал транспортируют в холодильной сумке.

Схема исследования испражнений на дисбактериоз.

После взвешивания 1 г нативного кала (без консерванта) его гомогенизируют в 9 мл физиологического раствора (ФР, 0,85%), раствор хлорида натрия или фосфатного буфера, получая исходное разведение материала (10^-1). Содержимое контейнера тщательно перемешивают стеклянной палочкой и оставляют при комнатной температуре на 10-15 минут. Попутно готовят ряд последующих разведений материала в физиологическом растворе до 10^-9, 10^-10. Каждое разведение кала готовят новой стерильной пипеткой. Из приготовленных разведений делают дозированные посевы на питательные среды для культивирования различных групп микроорганизмов. Для получения сосчитываемого числа колоний на плотные среды в чашках Петри наносят 0,1 мл взвеси из соответствующих разведений с последующим втиранием материала шпателем; в жидкие, полужидкие и плотные среды, разлитые в пробирки, высоким столбиком вносят 1 мл взвеси на 9 мл среды.

Предлагаемая схема посева (разведение до 10^-10) на различные среды

Микроорганизмы	Высеваемые разведения	Питательные среды	Количество чашек, пробирок
Бифидобактерии	10-7;10-8; 10-9; 10-10	Среда Блаурокк, бифидобульон инкубируют при 370С 24 часов	4 пробирки
Эшерихии (в том числе и гемолитические)	10-6	Эндо, Эндо с 2,5% кровью, желчно-кровяной агар инкубируют 18-24 часа при 370С	1 чашка
Лактобактерии	10-5;10-6	Молоко, МРС-4, лактобакагар, среда Рогоза инкубируют при 370С 24 часов	2 чашки
Другие ассоциации энтеробактерий Е.соli со сниженной активностью, неферментирующие бактерии (НФБ)	10-3;10-6;10-8	Эндо, Плоскирева, Левина, Конго-рот-агар, инкубируют при 370С 24 часа, агар Симмонса 370С до 72 часов	3 чашки
Протей	10-1	Скошенный агар по Шукевичу, амфолан-агар инкубируют при 370С 24 часов	1 пробирка
Клостридии	10-2	Вильсона-Блера Ставят две пробы: гретую (при 700С в течение 15 мин) и негретую. В случае почернения среды с гретой пробой, ее подвергают дальнейшей идентификации. инкубируют при 370С 48 часов	2 пробирки
кампилабактерии	10-1	Колумбиа агар+антибиотики, кампилобактерагар инкубируют при 420С 24-48 часов (в микроаэрофильных условиях)	1 чашка
Энтерококки	10-6	Желчно-кровяной агар, Эндо кровяной, Конго рот агар, энтерококк агар инкубируют при 370С 24 часа	1 чашка
Стафилококки РКП (+) и РКП (-)	10-1;10-3	ЖСА, МЖСА, Байрд-Паркер агар, манитол-солевой агар инкубируют при 370С 48 часов	2 чашки
Кандиды	10-1;10-3	Сабуро, Никкерсона с антибиотиками инкубируют при 370С 48 часов затем оставляют еще 2-е суток при комнатной температуре.	2 чашки
Сальмонеллы, шигеллы	10-1	Плоскирева инкубируют при 370С 24 часа	1 чашка