Химические методы. Основаны на поглощении кислорода воздуха в герметически закрытом сосуде (анаэростате, эксикаторе) такими веществами, как пирогаллол или гидросульфит натрия n838204
3) Биологические методы. Основаны на совместном выращивании анаэробов со строгими аэробами
Для этого из застывшей агаровой пластинки по диаметру чашки вырезают стерильным скальпелем полоску агара шириной около 1см. Получается 2 агаровых полу диска в одной чашке. На одну сторону агаровой пластинки засевают аэроб, например, часто используют S. aureus или Serratia marcescens. На другую сторону засевают анаэроб. Края чашки заливают расплавленным парафином н помещают в термостат. При наличии подходящих условий в чашке начнут размножаться аэробы. После того как весь кислород в пространстве чашки будет ими использован, начнется рост анаэробов (через 3-4 суток). В целях сокращения воздушного пространства в чашке питательную среду наливают возможно более толстым слоен.
Комбинированные методы. Основаны на сочетании физических, химических и биологических методов создания анаэробиоза
Работа №3
Культивирование вирусов
Для культивирования вирусов используют:
1) Куриные эмбрионы. Куриный эмбрион - удобная модель для культивирования вирусов с целью получения вирусов и для приготовления диагностических, профилактических и лечебных препаратов - диагностикумов и вакцин. Куриные зародыши используют в возрасте от 8 до 12 дней, перед заражением инфекционным материалом скорлупу яйца над воздушной камерой обрабатывают 70% спиртом, обжигают, смазывают йодом (2% настойка), вторично протирают спиртом и обжигают. Вируссодержащий материал, обработанный для удаления бактериальной флоры, в асептичных условиях наносят на хорион-аллантоисную оболочку или вводят в желточный мешок, аллантоисную полость, либо в амнион (ткань эмбриона). После заражения в алдантоисную полость отверстие заливают парафином; если материалом заражают хорион- аллантоис отверстие в скорлупе закрывают стерильным покровным стеклом, края которого замазывают парафином. После инфицирования эмбрионы помещают в термостат при 37°С. Признаки репродукции вируса проявляются особенно четко в месте заражения на хорион-аллантоисной оболочке в виде очагов поражения и геморрагии.
Куринный эмбрион
Воздушное пространство
Отверстие в скорлупе
Скорлупная оболочка
Хорионаллантоисная оболочка
Желточный мешок
Белок
Амнион
Плод
Аллантоисная полость
2) Культуру клеток (тканей). Клетки получают из тканей животных и человека. Их делят:
- на первичные, которые используют в течение одной генерации. Первичные клетки получают из эпителиальной или соединительной ткани. Они растут в суспензии, при оседании прочно прикрепляются к стенке флакона или пробирки в виде монослоя.
- полуперевиваемые сохраняются в течение 50 пассажей или года. Они относятся к соматическим диплоидным клеткам человека, которые не претерпевают злокачественного перерождения.
- перевиваемые, которые длительное время размножаться in vitro. Однослойные культуры клеток готовят из нормальных, чаще эмбриональных линий клеток (клетки амниона человека, почек обезьяны) и злокачественных линий клеток (злокачественные клетки HeLa, первоначально выделенные из карценомы шейки матки, Hep - 3 -из лимфоидной карценомы).
Репродукция вирусов в культуре клеток сопровождается цитопатическим ™ действием (ЦПД); которое проявляется в изменении морфологии клеток и их гибели. Характер и время проявления 1ШД зависит от вида вируса
3) Лабораторных животных (белых мышей, хомяков, крыс, кроликов и т.д.). Их используют для создания моделей вирусных инфекционных болезней и выделение вирусов. Чувствительность животных к вирусам зависит от вида животного и его возраста. Репродукция вируса сопровождается клиническими проявлениями болезни или гибелью животного
Подпись преподавателя___________________________________________________